益生菌分散片的制备及体外抑菌研究

益生菌分散片的制备及体外抑菌研究

李磊 任冬艳 李翠平 孙洁宇 韩毅峰 闫继彪

内蒙古普泽生物制品有限责任公司 010080

摘要：目的：优选益生菌分散片制备工艺，确认分散片体外抑菌作用。方法：采用单因素试验对麦芽糊精、乳糖量进行筛选，采用正交试验对交联聚维酮添加量、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素比例进行优化；并对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌进行体外抑菌圈试验。结果：麦芽糊精添加量为5%，乳糖添加量为5%，交联聚维酮添加量15%，羧甲基纤维素钠8%，微晶纤维素30%，润滑剂适量，以制得的分散片崩解时间<3 min，分散均匀且对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌均有＞7mm的抑菌圈出现。结论：按该方法制备的益生菌分散片工艺稳定可行；分散片对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌有抑菌作用。

关键词:益生菌；分散片；抑菌试验

1.引言

阴道炎是女性常见的生殖器官炎症，已婚妇女中，一半以上人群患有不同程度的阴道炎。抗生素是治疗阴道妇科疾病的主要手段，而长时间使用可导致宿主对抗生素的耐药性，且抗生素可改变阴道的正常微生态环境造成菌群失调，从而导致治疗效果不好、复发率高等问题^[1]。但并没有从根源上解除妇科疾病，忽视了女性生殖道微生态菌群平衡。近年来已研究出许多新方法并开发出不少的剂型，如洗液、栓剂、散剂及胶囊等等^[2]。分散片是一种崩解快、溶出快、生物利用度高的固体制剂，兼具片剂和液体制剂的优点^[3]。本试验拟开发一种妇科用益生菌分散片，不仅能有效的缓解与预防阴道炎，而且很大程度的避免了药物使用过程中的污染和交叉感染，开发利用本品，会给广大女性阴道炎患者带来福音。

2.材料与方法

2.1仪器及试剂

6冲压片机（上海天凡药机制造厂），崩解时限仪(天津市富兰斯电子科贸有限公司），YP2001N型电子天平(上海精密科学仪器有限公司）。

交联聚维酮、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、麦芽糊精、乳糖、乳酸、聚乙二醇、微粉硅胶、硬脂酸镁；95%乙醇；大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌（广州环凯生物技术有限公司）；益生菌混合菌粉由内蒙古普泽生物制品有限公司提供。

2.2崩解时间测定方法

取分散片6片，分别置于崩解仪吊篮的玻璃管中，使吊篮浸入1000 mL烧杯中，并调节吊篮位置使其下降时筛网距烧杯底部25 mm，烧杯内盛有37℃蒸馏水，调节水位使吊篮上升时筛网在水面下15 mm 处，启动崩解仪，观察崩解情况并记录时间。

2.3填充剂的选择

对分散片常用的填充剂麦芽糊精、乳糖进行单因素考察，以崩解时间为指标筛选较优填充量，以交联聚维酮为崩解剂，与其他辅料混匀，加入95%乙醇适量制软材，制粒，干燥，整粒，压片，测定崩解时间。

2.4崩解剂的选择

在填充剂用量保持不变的情况下，以崩解时间为指标，采用L₉(3⁴)正交表对崩解剂的配伍比例进行筛选。

2.5体外抑菌试验

(1)抑菌片的制备:取无菌并干燥的滤纸片。每片滴加实际使用浓度抑菌溶液 20μL，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置温箱(37℃) 中烤干，或置室温下自然干燥后备用。

(2)试验菌的接种:用无菌棉拭子蘸取浓度为 5×10⁵cfu/mL～5×10⁶cfu/mL 试验菌悬液（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌），在营养琼脂培养基（沙氏培养基）平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次，平板应转动 60°，最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平皿，置室温干燥 5min。

(3)抑菌剂样片贴放:每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距 25mm以上，与平板的周缘相距 15mm 以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。盖好平皿，置37℃温箱，培养16h～18h 观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径 (包括贴片) 并记录。

测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行。 测量其直径应以抑菌环外沿为界。

4. 抑菌环直径大于 7mm 者，判为有抑菌作用^[4-6]。

3. 结果与分析

3.1填充剂的选择结果

对分散片常用的填充剂麦芽糊精、乳糖进行单因素考察，结果见表1、表2。

表1 麦芽糊精不同添加量崩解时间比较

添加量（%）	崩解时间（s）
1	95
5	105
10	121
15	168
20	197

结果显示，随着麦芽糊精添加量的增加崩解时间变长，但1%添加量片剂表面粗糙，无光滑感，且1%和5%添加量崩解时间差别不大，故选5%为麦芽糊精最终添加量。

表2 乳糖不同添加量崩解时间比较

添加量（%）	崩解时间（s）
3	186
4	210
5	233
6	289
7	315

3%、4%虽然崩解时间短，但考虑乳糖作为益生元，会影响产品中益生菌活性，降低其功能性； 6%添加量接近崩解时限5min，为了减少它对后期整体崩解时间的影响，所以确定5%为乳糖最终添加量。

3.2崩解剂的选择结果

采用L₉(3⁴)正交表对崩解剂的配伍比例进行筛选，因素水平见表3，正交试验结果见表4。通过直观分析结果可知，最优组合是A₁B₁C₂，经过3次崩解时间验证，平均时间为118s，故交联聚维酮添加量15%，羧甲基纤维素钠8%，微晶纤维素30%为最佳配伍比例。

表3 崩解剂配伍比例正交试验因素水平表

表4崩解剂配伍比例正交试验安排与结果

3.3体外抑菌结果

抑菌圈结果如图1所示，分散片对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌均出现直径＞7mm的抑菌圈。

大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌

图1 抑菌圈图

4.结论

本试验对填充剂进行单因素试验确定麦芽糊精添加量为5%，乳糖添加量为5%；对崩解剂进行正交试验确定交联聚维酮添加量15%，羧甲基纤维素钠8%，微晶纤维素30%；润滑剂适量。经过3批的制备，其崩解时间平均为118s，片型良好，外观光滑，适于益生菌分散片的制备；该分散片对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌均出现抑菌环直径＞7mm，有较好抑菌效果。

参考文献：

1. 钟燕,Inge Tarnow,隋龙.鼠李糖乳杆菌GR-1和罗伊氏乳杆菌RC-14防治阴道炎的研究进展[J].国际妇产科学杂志,2013,40(05):428-431.

2. 康艳萍.四物汤分散片制备工艺研究[J].广州化工,2021,49(18):28-30.

3. 蓝美英,徐凯,曾华哲,郑晓斌.克拉霉素分散片制备工艺研究[J].中国处方药,2021, 19 (08):33-35.

4. 董锡文,孙晶,杜春梅,汪景宽.嗜酸乳杆菌的体外抑菌研究[J].安徽农业科学,2008(07): 2629 -2630+2635.

5. Anatoly, Bezkorovainy. Probiotics: determinants of survival and growth in the gut1,2,3[J]. The American Journal of Clinical Nutrition, 2001, 73(2):399s-405s.

6. 资英娟,孔俊铭,郭志鹏,杜全能,史宝军.凝结芽孢杆菌NJh032产酶抑菌活性及其发酵产品性能探究[J].饲料研究,2021,44(07):102-106.