液相色谱柱进展及其在药品标准中的应用

液相色谱柱进展及其在药品标准中的应用 周嘉玲 孙菊丽 高嘉琦 刘志刚 孙菊华

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【摘要】在当前的药物分析中，随着色谱柱技术的快速发展，高效液相色谱法的应用也更加广泛。本文主要针对液相色谱柱的进展开展研究，分析其填料分类以及核心技术发展，同时对药品标准中液相色谱柱的应用情况进行总结，提出完善色谱柱使用的措施，更好的推动药品标准的完善。

【关键词】液相色谱柱；药品标准；应用；技术

在开展药物分析的过程中，高效液相色谱法的已经得到了广泛应用，特别是在杂质控制以及多组分分析当中，价值更为明显。在当前理论体系日益完善的背景下，分离方法也得到了更新换代，仪器性能的优化，推动了应用领域的扩张。从技术领域的发展来看，主要体现在数据分析、仪器性能以及色谱柱技术等方面。当前，色谱柱技术的快速发展，推动了填料种类的丰富，同时也形成了完善的分离模式以及方法，色谱柱作为液相色谱分离中的核心要素，必须要开展深入的研究，提供更为多样的色谱柱类型^[1]。所以说，必须要针对液相色谱柱以及填料的进展进行分析，发挥出其在药品标准中的作用，为医药事业的发展打下良好基础。

一、液相色谱柱与填料种类

在目前的药物分析当中，研究人员对于色谱峰形与分离度改善的重视程度不断提升，通过采用流动相组成改变的手段，实现色谱柱选择性的提升。为了更好的满足分离工作的需求，出现了越来越多的色谱固定相，在药物分析中得到了广泛应用。以基质材料化学组成的标准进行划分，液相色谱填料主要包括无机基质填料与有机基质填料两种，前者作为研究与应用的主流，应用最多的为硅胶，机械强度较强，成为了液相色谱的重要填料^[2]。有机基质填料主要包括聚合物型与多糖型两种，在将硅醇基的影响排除以后，可以实现稳定的化学状态。以键合相种类不同，可以分为反相色谱柱、正相色谱柱、离子交换色谱柱、手性拆分色谱柱等类型，其中反相色谱柱的应用更为广泛。

二、液相色谱填料技术的进展

从目前的液相色谱柱填料技术研究成果来看，主要体现在多种色谱固定、快速液相色谱分析以及各种分离模式应用等方面。

（一）表面多孔型填料技术

对于表明多孔型颗粒填料来说，又可以成为核-壳型填料，商品化的产品主要包括Poroshell 300 SB C₁₈，这种填料采用的是4.5μm硅胶实心内核，然后在外面包括0.25μm的多孔层，在蛋白质与单抗的分析中有着广泛应用^[3]。对于表面多孔型填料来说，其粒径分布以及扩散路径较窄，能够更好的控制涡流扩散，实现传质路径的缩短，同时减小传质的阻力，满足较粗填料颗粒的需求。

（二）整体化色谱柱填料技术

在目前液相色谱柱填料的研究当中，整体化色谱柱也成为了一个重要领域。整体柱又可以叫做棒状柱，主要采用无机或者有机的聚合方式，在色谱柱内实现原位聚合的连续床固定相。相较于常规的装填来说，整体柱的渗透性更好，同时表现出良好的多孔型，可以快速的实现传质的分离^[4]。在聚合物整体柱的应用中，通常采用离子交换以及亲和色谱的方式，在大生物分子中的应用比较广泛，例如抗体、蛋白以及DNA等超快速分析。

（三）不同选择性的色谱固定相

在多种作用力的情况下，出现了反相色谱分离，在不同键合相或者同一键合相在不同硅胶机制与键合技术的作用下，造成其空间位阻、疏水作用以及静电作用产生差异，在化合物的分离能力方面也各不相同，因此会出现不一样的选择性。比如在碳链当中嵌入极性的酰胺基团，能够实现键合相水相兼容性的提升，同时增强固定相与化合物之间的氢键作用^[5]。对于一般硅胶基质填料来说，其固定相pH适用范围在2-8之间，为了更好的实现硅胶基质填料键合相稳定性的提升，可以借助大体积有机基团的保护，借助双异丙基或者双异丁基等，开展保护，增强稳定性，避免出现硅烷键流失的情况。

三、药品标准中液相色谱柱的应用情况

从目前新颁布的2015版《中国药典》来看，液相色谱柱的应用已经得到了充分肯定。在新版药典当中，通过对原来各部的附录进行整合，形成了第四部，构建了更为合理的编码，同时在通则0512当中，列入了液相色谱法。在新版《中国药典》当中，液相色谱法已经得到了广泛应用，形成了合理的使用方法。比如在二部化药当中，对415个品种进行修订，部分增加了液相色谱检测的方式，部分修订了流动相。在本芴醇的相关物质检查当中，原有的薄层色谱法被液相色谱法所取代，对主成分的分离度与杂质Ⅰ进行了规定，从而明确了杂质的信息，对杂质的限量进行了更为准确的控制。在叶酸含量检测过程中，通过增加四丁基氢氧化铵，实现了叶酸保留度的提升，同时也避免在高水相比例下出现色谱柱C₁₈键合相疏水塌陷的情况。但是从药品标准的应用来看，高效液相色谱柱的应用缺乏活力，更多的采用反向液相色谱法的方式，针对其他种类的应用比较有限，存在较大的提升空间。尽管在2015年版的药典当中，并没有单独收录超高效液相色谱法，但是并不能否认其做具有的价值，在系统科学的描述下，能够解决以往存在的概念混乱问题，同时也推动了药品检验水平的提升。

结语：在近些年的发展中，液相色谱柱技术的水平得到了显著提升，特别是在表面多孔型填料方面得到了广泛应用，借助多种分离模式以及色谱固定相，可以解决以往遇到的诸多分离难题。在色谱柱填料类型与种类日益增加的情况下，在进行药典制定以及药品标准明确的过程中，需要对色谱柱的分类进行细化，更为科学合理的采用分离技术，实现药物分析水平的提升。

【参考文献】

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