灵芝提取物对化学性肝损伤及免疫作用研究

灵芝提取物对化学性肝损伤及免疫作用研究

陈亮 蒋小华 李丽

潍坊医学院 山东潍坊 261053

摘要： 研究灵芝提取物对化学性肝损伤及免疫的作用。免疫试验设三个剂量组12.5、25、75mg（/kg·d）和阴性对照组，每天灌胃小鼠1次，连续灌胃30天后，进行各项免疫指标的测定。对化学性肝损伤作用选用酒精肝损伤模型，试验设三个剂量组，分别为12.5、25、75mg（/kg·d），同时设空白对照组和模型对照组，连续灌胃30 d，进行各项生化指标检测及组织病理学检查。结果 免疫试验结果灵芝提取物具有增强小鼠体液免疫及单核-巨噬细胞吞噬功能的作用， 对化学性肝损伤试验结果灵芝提取物可降低小鼠肝组织中丙二醛、甘油三酯含量，升高还原型谷胱甘肽含量（P<0.05）。结论 灵芝提取物对化学性肝损伤有保护功能，同时具有增强免疫力作用，为开发灵芝提取物功能食品提供依据。

关键词： 灵芝，化学性肝损伤，免疫

灵芝是我国传统的药用真菌，有“仙药”、“瑞草”之称。药理研究证明灵芝三萜具有抗肿瘤、抗HIV、抗炎、保肝护肝等多种药理活性^[1-3]。本实验灌胃小鼠不同剂量灵芝提取物30d后，通过各项免疫试验及酒精肝损伤模型， 研究灵芝提取物对化学性肝损伤及免疫的作用。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1受试物:灵芝提取物，0.15g/d，主要成分为灵芝三萜，每g提取物相当于生药10g。

1.1.2动物：SPF ICR 级小鼠，雄性，250 只，体重 18~22 g。

1.2仪器和试剂:电子分析天平、半自动生化分析仪、 酶标仪、二氧化碳培养箱、显微镜等。MTT、YAC-1细胞、DNFB、ConA 、印度墨汁、绵羊红细胞（SRBC及补体（豚鼠血清）、RPMI1640培养液、紫外可见分光光度计（XTL-2400）；冰冻切片机（LEICA CM510）、病理显微镜（DM4000B）、全自动生化分析仪（TBA-120FR）。还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）试剂盒；甘油三酯（TG）试剂盒等。

1.3方法

1.3.1 免疫试验：参照《保健食品检验与评价技术规范（2003年版》中“增强免疫功能检测方法”相关规定进行。

动物按体重随机分组，分为5大组，每大组40只，每大组又分为4组，每组10只小鼠。 低、中、高剂量组按照人体推荐剂量的5,10,30倍设计，分别为12.5、25、75mg/（kg·BW），动物灌胃按0.2ml/（10g·BW）体积给予，同时设对照组，对照组给予等体积纯水。每天灌胃1次，连续灌胃31d，进行各项指标的测定。

1.3.2 对化学性肝损伤试验

选用酒精性肝损伤模型， 50只雄性小鼠随机平均分成5组。每组10只，设3个剂量组12.5、25、75mg/（kg·BW）， 小鼠灌胃体积为10mL/kg·BW。同时设空白对照组（0g/kg·BW）和模型对照组（0g/kg·BW）,用无菌水代替受试物，每日灌胃体积与各受试物组相同。连续灌胃30d。各剂量组均给予维持饲料，每周称重。给予受试物结束时，将模型对照组和各剂量组一次性灌胃给予50%乙醇12mL/（kg·BW），空白对照组给予无菌水。各组动物隔夜禁食16h。处死动物立即称取肝重计算脏体比，并按试剂盒要求进行肝脏生化指标( MDA、GSH、TG) 检测和组织病理学检查。

1.4结果判定

1.4.1 免疫试验结果判定：在细胞免疫，体液免疫，单核巨噬细胞功能及NK细胞功能四项中2项阳性即可判定样品具有增强免疫力作用。

1.4.2对化学性肝损伤试验结果判定：在酒精性肝损伤模型成立的前提下，肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标结果阳性，或 肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标中任两项指标阳性和病理组织学检查结果性，可判定受试样品具有对酒精肝损伤有辅助保护作用。

1.5 统计学方法 采用SPSS 16.0 统计软件对数据进行方差分析。

2结果与分析

2.1 免疫试验结果

各组小鼠生长发育好，各期体重差异均无统计学意义(P＞0.05)。脾脏、胸腺

体重比值在阴性对照组与低、中、高剂量组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。 与阴性对照组比较，高剂量组光密度差值、抗体细胞数显著升高（P＜

0.05），中、高剂量组溶血空斑数、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数显著升高（P＜0.05，P＜0.01），对足趾肿胀度、碳廓清、NK细胞活性无影响。结果见表1-3.

表1 对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响（x ± s ）

注^{: *} 表示与阴性对照组比较 ^{P＜0. 05。}

表2对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

注^{: *} 表示与阴性对照组比较 ^{P＜0. 05;} ＊＊表示与阴性对照组比较 ^{P＜0. 01。}

表3 对小鼠NK细胞活性的影响（x ± s ）

2.2 对化学性肝损伤试验结果

试验后模型对照组与空白对照组比较，模型对照组肝组织中MDA显著升高、GSH显著降低、TG显著升高、肝组织脂肪变性平均分显著升高，均具有统计学差异（P<0.01），表明造模成功。与模型对照组（0g/kg·BW）比较，中、高剂量组肝组织中丙二醛含量显著降低（P<0.05，P<0.01），高剂量组肝组织中GSH 含量显著升高，高剂量组肝组织中TG含量、肝组织中脂肪变性平均分显著降低（P<0.05），结果见表4，5。

表 4灵芝提取物对小鼠肝匀浆中 MDA、GSH、含量的影响( x±s)

注^{: *} 表示与模型对照组比较 ^{P＜0. 05;} ＊＊表示与模型对照组比较 ^{P＜0. 01。}

表5 灵芝提取物对肝组织切片病理学影响（I±SD）

3结论与讨论

本试验研究了灵芝提取物保肝作用及对免疫的作用。免疫结果表明灵芝提取物可明显增强小鼠脾淋巴细胞的转化能力及体液免疫作用、单核-巨噬细胞吞噬功能。保肝实验中采用酒精肝损伤模型，灵芝提取物可降低小鼠肝组织中丙二醛含量，降低小鼠肝组织中甘油三酯含量，可升高小鼠还原型谷胱甘肽含量（P<0.05）。

根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003 年版）增强免疫力及对化学性肝损伤有辅助保护功能检验方法结果判定标准可知，灵芝提取物具有增强免疫力及对化学性肝损伤具有辅助保护功能。这为以灵芝提取物为原料开发保健食品提供了依据。

参考文献

1. 李安云.复方灵芝冲剂治疗慢性乙型肝炎120例[J].中国药业,2004(08):72.

2. 刘宇,苏海国,周勤梅,等.不同种的灵芝醇提物对肝癌细胞增殖的抑制作用[J].食用菌学报,2018,25(02):121-125.

3. 李敏,仇雯倩,黄金华.灵芝三萜对小鼠肝损伤的预防和保护作用研究[J].现代中西医结合杂志,2009,18(32):3933-3934.

5