摘要目的观察长链非编码RNA Crnde通过调节Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对小鼠成骨细胞增殖的影响。方法培养MC3T3-E1成骨细胞，随后诱导分化3周，实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Crnde表达，应用CRISPR-Cas9方法构建Crnde基因敲除小鼠模型，同时以野生型小鼠作为对照，分为Crnde基因敲除小鼠组(n＝25)和野生型小鼠组(n＝25)，小鼠处死前12 h腹腔注射BrdU进行染色观察成骨细胞增殖，检测血清1型前胶原N末端(P1NP)和Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-Ⅰ)表达，蛋白质印迹法(Western blot)检测骨组织Wnt和β-catenin蛋白表达，原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况，分别运用Osteomeasure系统和MicroCT分析进行骨组织形态计量分析，双荧光素酶报告基因验证Crnde与Wnt蛋白的靶向调节关系。组间比较采用t检验。结果成骨细胞分化过程Crnde表达情况为在诱导的3周时间内，随着时间延长，Crnde表达明显增加，在第3周表达最高(P>0.05)；Wnt和β-catenin在Crnde-/-小鼠和正常小鼠中表达情况中，蛋白质印迹法(Western blot)结果显示，Crnde-/-组中Wnt和β-catenin蛋白表达低于WT小鼠组(P<0.05)；BrdU免疫荧光染色结果显示，正常对照组小鼠胫骨存在大量BrdU阳性细胞，而Crnde-/-小鼠细胞显著减少；TUNEL染色显示正常对照组小鼠与Crnde-/-小鼠小鼠凋亡成骨细胞数量差异无统计学意义(P>0.05)；μCT和Osteomeasure系统结果显示，椎骨的组织形态分析BV/TV，WT组[(19.43±1.53)%]，Crnde-/-组[(20.14±1.56)%]，Crnde-/-鼠的小梁和皮质骨均显示出低骨量表型，Crnde-/-小鼠的骨形成参数均与野生型小鼠差异有统计学意义(P<0.05)；Crnde-/-小鼠血清P1NP和CTX-I分别为(15.62±1.23) μg/L和(12.36±1.12) μg/L，WT小鼠血清P1NP和CTX-I分别为(22.81±1.56) μg/L和16.21±1.21) μg/L，Crnde-/-小鼠组均比WT小鼠组明显下降(P<0.05)；双荧光素酶报告基因检测结果显示Crnde模拟物显著降低了野生型组荧光素酶活性(P<0.05)，而对突变组荧光素酶活性基本无影响(P>0.05)。结论Crnde通过Wnt/β-catenin信号传导调节骨形成。
