血液制品生产中丙型肝炎病毒抗体检测与核酸检测联合应用的分析

血液制品生产中丙型肝炎病毒抗体检测与核酸检测联合应用的分析

赵丽娟 王培培 薛婷慧 常天田 史亚玲 苟丽娟 陈通威

山西康宝生物制品股份有限公司 山西 长治 046600

摘要 目的：分析血液制品生产中HCV-Ab（丙型肝炎病毒抗体）检测与核酸检测联合应用价值。

方法：选取2020年10月至2021年3月原料血浆95462人份，浆站进行第一遍HCV-Ab酶免血清学检测、公司进行HCV-Ab酶免血清学检测+核酸检测，对比两种检测方法阳性率。结果：两遍HCV-Ab检测+核酸检测阳性率（0.9‰）高于两遍HCV-Ab检测阳性率（0.3‰）。

结论：HCV-Ab检测+核酸检测可显著提高阳性检出率，可有效保障生产用原料血浆病毒安全。

关键词：血液制品；丙型肝炎病毒抗体；核酸检测；原料血浆

丙型肝炎病毒（HCV）是输血或血制品后肝炎的致病因子之一，是一种临床常见传染性疾病，主要经血或血制品传播。HCV感染极易呈慢性化，早期临床症状不典型，容易被患者忽视，导致部分患者肝硬化或者肝癌，对其生命安全构成一定威胁[1]。因此在血液制品生产中加强对HCV的筛查极为重要。核酸检测由于能够大大缩短窗口期的问题，在血液制品生产中已被广泛应用。但是由于检测原理和方法学原理不同，核酸检测并不能完全代替ELISA 。本文就我室开展核酸检测半年来，HCV的血清学和核酸检测结果报告如下，并探讨二者应用的意义。

一、材料与方法

1、样本来源：2020年10月至2021年3月各浆站采集的原料血浆95462人份，所有样本均有自动采浆机采集后，样本管为不含肝素抗凝剂的无菌样本管，6小时内进行速冻，然后移送至-20摄氏度以下的库房20天左右，运送至公司进行检测。检测前进行室温复融、离心、开盖等处理，处理后的样本同时进行血清学筛查和核酸检测。

2、试剂与仪器：HCV标准血清、核酸质控血清均购于北京康彻斯坦生物药业有限公司。丙型肝炎病毒ELISA检测试剂为国产试剂（浆站酶免试剂为北京万泰生物药业有限公司，公司为上海科华股份有限公司）。HCV核酸检测试剂盒为北京万泰生物药业有限公司。全自动酶免工作站ADC ELISA 1100，购自烟台艾德康；核酸提取仪为WanTag1.0，购自北京万泰公司，扩增仪CFX96购自伯乐； 离心机为KDC-1044。自动脱帽机ACR-1200。

3、检测流程

血浆采集后第二天进行第一遍ELISA检测，检测合格的血浆-20℃冷冻后运输至公司，样本经复融、离心、脱帽后，进行ELISA和核酸检测。酶免阴性、单阳复查标本随机混合后在进行核酸检测，酶免阳性标本做单标本核酸检测。

4、抗-HCV血清学和核酸检测

每份血浆均采用两遍ELISA试剂进行血清学检测，每板实验均设有HCV标准血清、空白对照、阴阳对照空。结果判定标准：S/CO≥1为阳性，判为不合格。0.8为灰区，判为不合格。

核酸检测采用混样检测。每个一级POOL含48份标本，全自动混样仪加样，每个一级混样POOL含内标、每次实验袋标准质控品。以及混样POOL出现阳性，进行拆分，二级混样POOL为6混样，出现阳性后，原始样本单检。单检样本检测阳性判定为核酸阳性。

二、实验结果

1、ELISA检测结果

2020年10月至2021年3月各浆站采集的原料血浆95462人份，各浆站第一遍ELISA检测结果共检出抗-HCV阳性标本34例，其中S/CO S/CO≥1的22例，0.8的12例。公司第二遍ELISA检测结果共检出抗-HCV阳性标本2例，其中S/CO≥1的1例，0.8的1例。具体见表1。

表1 ELISA检测呈单阳性标本的检测结果

2、核酸结果

两遍ELISA阳性标本经核酸检测29例阴性，7例阳性。两遍ELISA法检测阳性反应率为0.3‰。两种ELISA试剂检测阴性的标本经核酸检测共49例HCV RNA阳性，这些标本标本可能处于窗口期，两遍ELISA+核酸检测阳性反应率为0.9‰。

三、讨论

血液制品的起始原材料为健康人血浆，存在经血液传播病毒的安全性风险，而HCV是常见的一种经血液传播的病毒。HCV-Ab血清学检测对象为抗原、抗体，在病毒侵入机体后到做出免疫应答需要一段“窗口期”；而核酸检测的对象为病原体核酸，能够缩短窗口期，减少漏检。同时血清学检测又可避免核酸检测受病原体间歇现象影响而导致漏检问题［2］。随着病毒核酸检测（nucleic acid testing，NAT）技术的发展［3-5］，可明显缩短血浆感染病毒阳转前潜伏期（窗口期）的检出期限，降低血源性病毒的传播风险。Schreiber等研究表明，核酸检测HCV，窗口期和缩短41～60天。因此本室采用两遍ELISA+核酸开展原料血浆HCV的检测，是缩短HCV病毒检测“窗口期”，减少漏检，是进一步提高血液制品安全性、降低经血传播疾病风险的重要举措。随着科技的不断创新与发展，PCR技术向全自动化不断进步，检测试剂的灵敏度逐步提高，试剂价格有望下调，使得核酸检测技术在血制品企业中全面推广应用，提高血制品质量，确保人民生命安全。

［1］Grant PR，Busch MP.Nucleic acid amplification technology methods used in blood donor screening Transfus Med,2002,12：229-242.

［2］郁玲.俞北伟.等输血前感染性指标检测对患者血感染的影响研究[J].中华医院感染学杂志，2016,26（13）：3063-3065.

［3］ ARORA S，DODA V，KIRTANIA T，et al． Sensitivity of inpi-dual donor nucleic acid testing （NAT） for the detection of he-patitis B infection by studying diluted NAT yield samples［J］．Vox Sang，2015，13（2）:227-232.

［4］ GHOSH K，MISHRA K． Nucleic acid amplification testing inIndian blood banks：A review with perspectives ［J］． IndianJPathol ＆ Microbiol，2017，60（3）：313-318．

［5］ RAJPUT M K． Automated triplex （HBV，HCV and HIV）NAT

assay systems for blood screening in India ［J］． J Clin Diag Res，2016，10（2）：KE01-KE04．

1]谷金莲, 于洋, 梁争论. 趋势分析法评价我国用于血液筛查中丙型肝炎病毒抗体诊断试剂的质量[J]. 中国生物制品学杂志, 2016, 29(8):834-839.

姓名：赵丽娟，女，出生，1983年2月9日，毕业于苏州大学，人体解剖与组织胚胎学专业，就职于山西康宝生物制品股份有限公司，血源质控室负责人，中级职称