微生物检验有哪些优势？

微生物检验有哪些优势？

王豫川

绵阳市人民医院 四川绵阳 621000

随着近些年微生物导致人体患病的病例不断增多，微生物检测逐渐受到了广泛的应用，对常见微生物疾病进行了有效的检测，下面我们就来看一下微生物检测在临床部分领域的诊断价值

一、无菌体液标本细菌的诊断价值
无菌体液标本包括血液、脑脊液，胸腔积液、腹腔积液、心包积液、关节腔积液及鞘膜液等。在正常人体中，上述体液应为无菌，在排除污染的情况下，一旦标本中检出细菌应考虑为病原菌。无菌体液标本的正确留取、规范的涂片操作与细菌培养结果间有着高度的相关性。有研究显示，脑脊液、胸腔积液、腹腔积液等穿刺液培养与离心后革兰染色(脑脊液墨汁染色找隐球菌)结果一致性可大于80%，且涂片结果可以在收到标本30 min内回报临床，为临床有效抗感染治疗提供了重要依据。
二、痰标本的价值
痰标本涂片的一个重要价值是判断标本留取的质量。当标本符合下列条件时，可以接收并进行细菌培养：
(1)痰液标本：平均每低倍视野鳞状上皮细胞数<10个；
(2)气管吸出痰液：平均每低倍视野鳞状上皮细胞数<10个或20个油镜视野至少能见1个细菌；
(3)支气管肺泡灌洗液：鳞状上皮细胞数<细胞数的1%。合格痰标本的涂片信息可以预测培养结果，并指导临床用药。陈险峰和周庭银调查492例痰标本，合格标本368例，合格率为74.8%，合格痰标本涂片与培养结果符合率达到71.19%，而涂片结果早于培养结果至少24 h，能够在早期为呼吸道感染的诊断和治疗提供重要信息。涂片发现不合格痰标本如果来自留取标本困难的患者，并非绝对不能接受，例如幼儿患者留取标本时常会混合唾液。操作者应尽量接收一些在痰液中混有黏性或血性痰片的口水痰标本，可在不同部位挑取标本多做痰涂片，甚至清洗后培养。
痰标本涂片革兰染色的另一个重要价值在于发现少见菌或特殊菌感染，为临床感染的诊断和治疗提供新的思路。我国是结核感染高负担国家之一，近年由于不规则用药或混合感染，很多活动性结核患者症状、体征并不典型，临床医师在送检痰标本进行涂片检测时经常忽视痰涂片找抗酸杆菌；有经验的检验医师可以在痰涂片革兰染色的涂片中发现"鬼影细胞" ，而高度怀疑抗酸杆菌的感染，并以抗酸染色、分子生物学技术(如结核PCR)或结核分枝杆菌培养确证，从而为临床感染诊断提供重要信息。奴卡菌是另一类生长速度较慢、弱抗酸染色呈阳性、治疗首选磺胺类药物的细菌，早期发现能够对患者进行有效治疗并降低广谱抗生素的应用，若痰涂片革兰染色发现革兰染色阳性、具有短或长的分枝菌丝可疑菌的涂片应以改良Kinyoun抗酸染色复查，并初步报告临床医师为可疑奴卡菌，待菌落可见时再进行后期鉴定；这样临床应用有效抗生素可提前48～72 h。
三、阴道分泌物检查的价值
临床标本涂片革兰染色镜检的另一个重要价值是生殖道感染细菌来源的判断，特别是对女性细菌性阴道病(BV)或细菌性阴道炎具有重要的辅助诊断价值。BV患者阴道的正常菌群被破坏，从主要为乳杆菌等优势菌群变为由阴道加德纳菌、厌氧菌(普雷沃菌、动弯杆菌等)混杂的菌群，伴随阴道分泌物pH值>4.5、分泌物加KOH后产生氨味(鱼腥味)，线索细胞的存在也可以辅助诊断BV，Rebecca等最早报道了BV的实验室诊断标准。此外，生殖道标本革兰染色镜检还应注意观察：
(1)是否存在淋病奈瑟菌，及菌体是否位于白细胞内；
(2)发现酵母样真菌孢子可辅助诊断霉菌性阴道炎；
(3)是否存在杜克雷嗜血杆菌；
(4)湿片法观察阴道毛滴虫。
四、便标本检查的意义
粪便标本正常菌群含量很高，临床标本涂片检查很难鉴别病原菌，因而粪便标本一般不直接做涂片检查。但当怀疑霍乱弧菌所致腹泻或患者存在菌群失调时应直接涂片检查。
粪便标本涂片检查另一重要意义是观察菌群是否平衡，也就是不同菌种比例有否失调。正常粪便中革兰阴性杆菌所占比例最高，其次为革兰阳性球菌或杆菌，有或无少量酵母样真菌。当患者经历放化疗、应用免疫抑制剂或系统感染并最终应用大量抗生素进行抗感染治疗后，抗菌谱范围内的细菌被抑制，而其他未覆盖细菌或真菌大量繁殖，患者机体微生态失衡、产生"二重感染" ，而粪便菌群变化是机体微生态失衡的敏感标志；临床较常出现由难辨梭菌、金黄色葡萄球菌或白色假丝酵母菌大量繁殖而引起的假膜性肠炎。因而，虽然粪便标本涂片检查不能辨认菌种，但能对肠道菌群是否失衡做出快速的判断，有利于临床对此类患者尽快调整用药。

五、微生物测定方法的原理，并比较各种测定方法的优缺点。

1、培养平板法：取一定体积的稀释菌液涂布在合适的固体培养基上，经培养后
计算原菌液的含菌数。优点：可以获得活菌的信息。缺点：操作繁琐且时间长，测定结果受多种因素的影响。
2、膜过滤培养法：当样品中菌数很低时,可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样品通过膜过滤器,然后将膜转到相应的培养基上进行培养,对形成的菌落进行统计。优点：适用于样品中菌数很低时。缺点：价格昂贵。

3、量进行直接计数。优点：简便、快速、直观。缺点：不能区分死菌与活菌；适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察。
4、比浊法：在一定范围内，菌的悬液中细胞浓度与浊度成正比，可用分光光度计测定。优点：比较准确。缺点：不能区分死菌与活菌。
重量法：以干重、湿重直接衡量微生物群体的生物量；通过样品中蛋白质、核酸含量的测定间接推算微生物群体的生物量。优点：测定多细胞及丝状真菌生长情况的有效方法。缺点：不太准确。