谈谈微生物检验操作技能及注意事项

谈谈微生物检验操作技能及注意事项

罗敏霞

峨眉山佛光医院 四川峨眉 614000

微生物检验过程之中除了要保障检测环境的无菌以及工作器具的清洁之外，对于检测人员的技能操纵也有相当的要求。为了全面保障实验室内检验操作的准确可信，应当从下面几个方面注意操作事项。

1. 培养基的使用

微生物的培养基础在于培养基的配置，每次根据不同的微生物培养要重新确定培养基的配置配方与流程。配置前要确定其生产日期与最佳使用时段，在开瓶前检验密封性，确保未变质、吸潮、发霉的情况下进行配置使用。

培养基配置时需要保障称量准确，一定要将配置和灭菌放在同时进行，没有及时进行灭菌措施的培养基绝不能长时间放置，尤其不能隔夜，否则一律以污染物处理。

灭菌操作以恒温恒压为主要条件，维持一定的灭菌时间。灭菌完成之后要放置冰箱进行保存，但最好当天使用。保存时间不应当超过三天时间，对于难以确定保存时间的培养基，一律以污染物处理。

在培养基的使用之中，需要根据班次安排使用量。水浴加热培养基为液态，先化开的培养基能够取出放在锅盖上缓慢冷却，但是所有的培养基都不能长期处于高温加热状态下。（没懂起什么意思）

微生物在检测时培养基温度通常要控制在45℃，过烫的情况下会导致菌群死亡，过冷会导致培养基凝聚，无法观察。

检测做样要集中进行，培养基每次打开都有可能提升杂菌污染几率，出现实验误差。

培养基除菌群外均要流出空白位置，方便对照观察。

2. 检测环境的维持

检测环境的维持分为检测室大环境的维持和超净工作台小环境的维持。检测室大环境之中，每当微生物样本检测之前需要关闭窗户、空调与风扇，然后用酒精等杀毒药物对空间内进行消毒喷雾，避免检测室内的空气运动对超净工作台内部环境产生影响。如果在检测室内有紫外灯，需要定期打开紫外灯进行杀毒操作。（酒精擦拭消毒仪器设备，含氯消毒制剂擦拭消毒操作台面）

在小环境超净工作台之中，需要对初效过滤器进行定期清洁与及时更换，在检测前将工作台进行全面清洁，使用医用酒精进行擦拭消毒。超净工作台需要提前至少半个小时打开紫外光灯，对超净台内所有的环境进行杀毒操作。一旦需要人员进入，一定要先关灯，避免紫外灯对人眼视网膜灼伤，再打开风机，调整进风量。检测完成之后，要再次进行清洁与消毒。紫外光等需要及时进行更换。

检测环境也包含检测工具的清洁，对于大多数的玻璃器皿，使用干热灭菌方法。对于剪刀勺子等专用器具，不可与外界混用，避免污染残留。使用前要使用酒精消毒并酒精灯灼烧，进行完全灭菌。接种环与接种针需要在完全冷却后采用灼烧方式进行杀毒灭菌。

3. 样品采集与检测

样品采集主要在于人员操作，对于手部与腕部的清洗与消毒尤为重要，在清洗时要保证刷手三分钟，清洗范围包括手部正反面与整个小臂。在取样和检测之前要先洗手再消毒，有需要带手套的，不可拉拽手套，不可自行戴手套，不可碰触手套外壁。

取样时要有代表性，对于随机样、综合样等取样种类要标识清楚。取样完毕之后不可长时间逗留，及时将样品表面用紫外光消毒，后放入检测台准备检测。所有的检测操作都要在检测区域内完成，不可将打开的样品带出检测区域。

检测前需要向培养基或样品袋口部进行消毒，对于样品要稀释的情况，稀释倍数也要非常精准，如100倍的稀释时，1mL的吸管要深入到生理盐水的水面下，不能沿着试管壁将样品流进生理盐水，但是也要避免与管底碰触影响样品分散。稀释操作之中温度会稍低，一般会维持在40℃，对于一些温度敏感性微生物，可以适当下探到35℃。过热的稀释温度会起到杀灭细菌的效果，而过冷会造成样品无法溶解完毕。稀释操作要完全摇匀，方面检验。（这个是培养什么用的方法？）

进行大肠杆菌培养时，需要提前将乳糖胆盐培养基备好，提前放入到超净工作台内进行杀毒。当培养基准备好之后，立刻进行大肠杆菌接种。在使用接种针或接种环时，要提前进行冷却处理，让菌落能够顺利接种并且便于判断。（现在很少用这个了吧？）

检验完毕后，需要及时放入恒温箱或培养箱内进行培养操作，同时清理超净工作台。

4. 微生物的培养

培养过程之中恒温箱或培养箱要维持足够的温度同时要随时监控其培养情况。保证微生物能够按照计划预想生长成为菌落。

在平皿内发现有链状菌落出现的情况下，菌落之间如果没有发现明显的界线，或者仅仅有一条链的情况下，可以被视作一个菌落。如果是来源各不相同的几条链，将每一条链都能够视作一个菌落。

对于大肠杆菌菌落的培养尤为典型，在对乳糖胆盐管内产气观察之中，只要出现气泡向上接触水面，就算产气开始。而菌落选取时一定要选择典型菌落，在三天观察时就要进行标记。对于霉菌的观察则重在不能将培养皿随意打开，需要高压灭菌之后再进行清洗，避免污染。

微生物的检验与操作相对繁琐，需要每一位从业人员将各项规章制度和操作手册铭记在心，才能做出令人满意的检测成绩。