初探高浓度球蛋白对胶体金法检测HIV抗体的干扰

初探高浓度球蛋白对胶体金法检测 HIV抗体的干扰

杨洁，易元杰，陈中元 张玲

岳池县人民医院检验科 四川岳池 638300

摘要：目的 研究高浓度球蛋白对胶体金法检测HIV抗体的干扰，探讨引起干扰的球蛋白浓度水平。方法 对高浓度球蛋白血清用PH7.2PBS进行系列稀释，并对原血清和系列稀释血清逐一测定其球蛋白含量。同时用胶体金法（两个厂家）、化学发光法和ELISA法对原血清和系列稀释血清进行HIV抗体检测。结果 化学发光法和ELISA法及艾博乳胶法检测均为阴性；原血清及低稀释度血清用英科胶体金试剂检测表现为阳性反应，并有背景干扰。随着血清稀释度逐渐增高、球蛋白浓度逐渐降低，阳性反应逐渐减弱，背景干扰逐渐减弱，在球蛋白含量为60.5-61g/L稀释处干扰完全消失，结果为阴性。初步结论 高浓度球蛋白对胶体金法（英科）检测HIV抗体有假阳性反应和背景干扰；血清球蛋白＜61g/L时，胶体金法检测HIV抗体无干扰。

关键词：高浓度球蛋白，HIV抗体，胶体金法，背景干扰，假阳性

A preliminary study on the interference of high concentration globulin on the detection of HIV antibody by colloidal gold method

Yang Jie，Yi Yuanjie，Chen Zhongyuan ，Zhang Lin

Laboratory Department of Yuechi people's Hospital SiChuan Yuechi 638300)

Abstract: objective To study the interference of high concentration globulin on the detection of HIV antibody by colloidal gold method and to explore the concentration level of globulin causing interference. Methods High concentration globulin serum was diluted with PH7.2PBS, and the globulin content of original serum and series diluted serum was determined one by one. At the same time, colloidal gold method, CLIA method and ELISA method were used to detect HIV antibody in original serum and series diluted serum. Results The CLIA method, ELISA method and ABON latex method were negative, while the original serum and low diluted serum showed positive or weak positive reaction by INTEC colloidal gold reagent, and there was background interference. With the increase of serum dilution and the decrease of globulin concentration, the positive reaction and background interference gradually weakened. When the globulin content was 60.5-61g/L dilution, the interference disappeared completely, and the result was negative. Conclusion High concentration globulin has false positive reaction and background interference in the detection of HIV antibody by INTEC colloidal gold method．When the serum Globulin was less than 61 g/L，there was no interference in the detection of HIV antibody by colloidal gold method.

Keywords: high concentration globulin, HIV antibody, colloidal gold method, background disturbance, false positive

随着国家对艾滋病管控加强，各医疗机构加大对艾滋病的快速筛查工作，胶体金法成为HIV抗体快速筛查的首选方法^[1][2]。

1.资料料与方法

1. 1. 实验对象 男性恶性淋巴瘤患者1例，总蛋白113g/L，白蛋白22g/L,球蛋白91g/L；男性多发性骨髓瘤患者1例，总蛋白114g/L,白蛋白22g/L，球蛋白92g/L^[3]。

   2. 仪器 LICK-500光激化学发光分析仪及ST-360酶标仪、cobas8000生化分析仪

   3. 试剂 英科胶体金试剂、艾博乳胶试剂、博阳光激化学发光试剂、万泰ELISA试剂、cobas8000生化试剂。

   4. 方法

1.4.1用英科胶体金试剂按其说明书操作程序对两个血清样本进行HIV抗体快速检测^[4][5]，同时用HIV抗体8NCU/ml标准品和HIV抗体阴性标准品进行室内质控^[6]，在规定的判读时间内判定结果，室内质控品检测结果均在控。血清样本层析速度很慢，在规定的判读时间内不能层析完全，于检测线处有一条明显的反应条带。由于血清层析不能到达质控区，因而在质控区无反应条带出现，并反应背景重。重复试验，结果相同。

1.4.2 用艾博乳胶试剂按其相应的说明书操作程序对两个血清样本进行检测，室内质控方法与1.4.1相同，结果为阴性，无明显干扰。

1.4.3稀释患者血清样本，用英科新创试剂盒中的PH7.2PBS稀释。为稀释方便，按原倍、1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍等进行系列稀释，再对系列稀释样本用英科胶体金试剂和艾博乳胶试剂同时进行检测。

1..4.4用光激化学发光法分别对原血清样本和系列稀释血清样本进行检测^[7][8]，所有样本检测结果均为阴性。

1.4.5 用ELISA法对系列稀释血清样本进行平行检测^[9][10]，所有样本检测结果为阴性^[11]。

1.4.6 用cobas8000生化分析仪检测原血清和系列稀释血清球蛋白浓度，分别测出系列稀释样本球蛋白浓度，见系列稀释血清样本球蛋白浓度表。

2. 结果 英科胶体金试剂对系列稀释样本检测结果表现为：原血清样本和低稀释度样本背景深，在检测线处有“阳性”反应线，随着血清稀释度增加，球蛋白浓度含量逐渐降低，干扰逐渐减弱，在球蛋白60.5-61g/L处干扰完全消失。艾博试剂检测系列稀释样本，检测结果无明显干扰，结果均为阴性。

系列稀释血清样本球蛋白浓度表

血清 原倍 1.1倍 1.2倍 1.3倍 1.4倍 1.5倍 1.6倍 1.7倍

淋巴瘤 91g/L 82.5g/L 75.5g/L 70g/L 65g/L 60.5g/L 57g/L 53.5g/L 骨髓瘤 92g/L 83.5g/L 76.5g/L 70.5g/L 65.5g/L 61g/L 57.5g/L 54g/L

3. 讨论 健康成人总蛋白为65-85g/L，白蛋白为45-55g/L，球蛋白为20-40g/L^[3]。未经治疗的恶性淋巴瘤^[12]和骨髓瘤^[13]患者血清总蛋白含量显著增高，常高于100g/L，由于球蛋白异常合成增加，导致球蛋白含量亦显著增高，合成的球蛋白主要是γ-球蛋白^[3][4]。γ-球蛋白是分子量较大的蛋白质。本文要讨论的两个样本总蛋白浓度均高于110g/L，球蛋白浓度均高于90g/L。

英科HIV抗体快速检测试剂采用胶体金免疫技术和层析原理，其检测方法是在加样处加60ul血清或血浆，30分钟内判读结果。在本文的两例血清检测时，由于球蛋白＞90g/L，血清黏稠度极高，使得层析变慢，高浓度大分子的γ-球蛋白更是阻碍了层析作用，大量的胶体金标记抗原被阻塞在检测线处聚集成假阳性反应线。同时由于γ-球蛋白的阻碍作用，造成干扰背景的产生，在规定的检测时间内，游离的胶体金标记抗原不能到达对照线处与HIV单克隆抗体结合，致使对照线不显色。随着样本的稀释度逐渐增高，球蛋白浓度逐渐降低，血清黏稠度减弱，球蛋白对层析的阻碍作用逐渐减弱，干扰亦逐渐减弱直至消失。由系列试验可知，在球蛋白60.5-61g/L时，干扰消失。

艾博HIV抗体快速检测试剂采用高度特异性的抗原抗体反应及免疫层析乳胶标记技术原理，其检测方法是在加样处加25ul血清或血浆，随后加入40ul缓冲液，15-20分钟判读结果。在对本文的两例血清检测时，无干扰现象发生，检测结果为阴性。事实上，在加样后随即加入的40ul缓冲液已经对血清起到了稀释作用，稀释效果应在2倍以上，可以推断球蛋白浓度<60g>，小于引起干扰的球蛋白浓度。

ELISA法检测HIV抗体采用的是双抗原夹心法，但在检测过程中分两步进行，避免了高浓度球蛋白与酶标记物因混合吸附所致的背景干扰和假阳性反应。

光激化学发光法（LICA-500分析系统）检测HIV抗体采用的是双抗原夹心法，检测过程为一步法，但在分析前已经将样本稀释11倍，球蛋白浓度处于较低水平，消除了假阳性干扰的可能性。

当然，对高浓度球蛋白血清稀释后再用胶体金法检测HIV抗体，有可能使HIV抗体低水平的血清检测结果受到影响，因为胶体金法灵敏度要次于其它检测方法，可能会引起假阴性结果^[7]。在临床实际HIV抗体检测中遇到有干扰的血清时，不主张使用稀释血清的方法来快速检测HIV抗体，可以使用其它方法替代检测。

高浓度球蛋白血症的相关疾病在临床上不属于多发病，相关病人来源较少，对于这两种病人进行HIV抗体快速检测，实属偶遇。未经治疗的恶性淋巴瘤和多发性骨髓瘤是高浓度球蛋白血症的典型病倒。通过初步系列试验和结果分析，初步认为：血清球蛋白<61g>时，对胶体金试剂的检测结果无干扰；血清球蛋白>65g/L时，对不加缓冲液的胶体金试剂的检测结果存在明显干扰。欲有更多的试验数据来证实这一初步结论，尚需进行更多试验。

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