N-myc下游调节基因2在癫痫小鼠海马中的表达及对星形胶质细胞谷氨酸、葡萄糖摄取的影响

(整期优先)网络出版时间:2020-08-10
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摘要目的探讨N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)在癫痫小鼠海马中的表达及其对小鼠脑星形胶质细胞谷氨酸和葡萄糖摄取的影响。方法采用氯化锂-匹鲁卡品诱导法建立癫痫小鼠模型,在造模后1 d、7 d、15 d、6周处死小鼠取取海马区脑组织,Western blot检测NDRG2蛋白表达变化。原代培养野生型、NDRG2+/+和NDRG2-/-小鼠的星形胶质细胞并进行基因型鉴定。使用谷氨酸含量测定试剂盒及紫外分光光度计检测星形胶质细胞培养上清液中谷氨酸含量。流式细胞术检测2-NBDG荧光标记星形胶质细胞的阳性率。结果(1)与对照组(0.25±0.07)比较,小鼠海马区NDRG2表达量在癫痫急性期1 d(0.45±0.06,t=-3.84,P<0.05)、7 d(0.54±0.09,t=-4.30,P<0.05)、15 d(1.04±0.06,t=-15.08,P<0.01)均有明显增加,癫痫慢性期6周(1.30±0.16,t=-10.40,P<0.01)依然保持明显的高表达。(2)检测原代细胞培养上清液剩余的谷氨酸含量,发现NDRG2-/-组星形胶质细胞对谷氨酸的摄取相对于NDRG2+/+组明显减少[(689.03±101.78)μmol/L,(113.67±37.35)μmol/L;t=9.19,P<0.01]。(3)Western blot分析NDRG2-/-组原代星形胶质细胞中EAAT1蛋白的表达显著低于NDRG2+/+组[(0.34±0.03),(1.16±0.21)],差异有统计学意义(t=-6.59,P<0.01)。(4)流式细胞术检测发现,NDRG2-/-组细胞的阳性率明显低于NDRG2+/+组细胞阳性率[(17.60±5.72)%,(72.22±8.35)%],差异有统计学意义(t=-13.22,P<0.01)。结论NDGR2与癫痫疾病的发生发展密切相关。NDRG2的表达有利于EAAT1发挥其生理功能,促进星形胶质细胞对谷氨酸和葡萄糖的摄取,可能是一种潜在细胞保护因子,促进神经保护和修复。