摘要目的评价氧连氮-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)转移酶(OGT)在甲烷减轻大鼠脊髓神经元氧糖缺失-复氧复糖损伤中的作用及其与Nrf2表达的关系。方法原代培养的大鼠脊髓神经元，以1×105个/ml密度接种于6孔板，采用随机数字表法分为4组(n＝60)：对照组(C组)、氧糖缺失-复氧复糖组(OGD/R组)、甲烷组(M组)和甲烷＋OGT抑制剂四氧嘧啶组(MA组)。采用无糖-无血清Earle平衡盐液，在37 ℃、5%CO2-95%N2缺氧培养箱中孵育2 h，然后正常培养的方法制备脊髓神经元氧糖缺失-复氧复糖损伤模型。M组于复氧复糖时在培养液中加入200 μl甲烷饱和生理盐水(甲烷终浓度1.8 mmol/L)；MA组于M组复氧复糖后10 min在培养液中加入8 mmol/L四氧嘧啶。复氧复糖12 h时，测定神经元存活率、LDH漏出率和凋亡率；采用染色质免疫沉淀和实时荧光定量PCR(qPCR)法检测Nrf2基因启动子区OGT和H3K4me3表达水平；提取核蛋白，采用免疫沉淀和Western blot法测定H3K4甲基转移酶复合物调节亚基RBBP5的O-GlcNAc糖基化水平；采用邻位连接法检测H3K4甲基转移酶复合物催化亚基MLL1与组蛋白H3空间邻近水平；采用Western blot和qPCR法测定Nrf2及其mRNA的表达；采用ELISA法测定上清液SOD、过氧化氢酶(CAT)活性和MDA浓度。结果与C组比较，OGD/R组和M组神经元存活率降低，LDH漏出率、凋亡率和上清液MDA浓度升高(P<0.01)；与OGD/R组比较，M组神经元存活率升高，LDH漏出率、凋亡率和上清液MDA浓度降低，Nrf2启动子区OGT和H3K4me3表达上调，RBBP5亚基O-GlcNAc糖基化、MLL1亚基与组蛋白H3空间邻近水平增高，Nrf2及其mRNA表达上调，上清液SOD和CAT活性升高(P<0.01)；与M组比较，MA组神经元存活率降低，LDH漏出率、凋亡率和上清液MDA浓度升高，Nrf2启动子区OGT和H3K4me3表达下调，RBBP5亚基O-GlcNAc糖基化、MLL1亚基与组蛋白H3空间邻近水平降低，Nrf2及其mRNA表达下调，SOD和CAT活性下降(P<0.05或0.01)。结论OGT参与了甲烷减轻大鼠脊髓神经元氧糖缺失-复氧复糖损伤的过程，与上调Nrf2表达有关。
