研究 HIV核酸即时检测分子诊断技术在人类免疫缺陷病毒（ HIV-1）检测中的应用价值及对总精密度,检测限的影响

研究 HIV核酸即时检测分子诊断技术在人类免疫缺陷病毒（ HIV-1）检测中的应用价值及对总精密度、检测限的影响

唐登燕

四川省南充市中心医院 四川省南充市637000

【摘要】目的：研究HIV核酸即时检测分子诊断技术在人类免疫缺陷病毒（HIV-1）检测中的应用价值及对总精密度、检测限的影响。方法：取2019年1月~2020年1月期间检验科收集的临床检测样本60例，均采用传统PCR技术和Xpert HIV-1即时核酸检测，比较两种技术的应用价值。结果：Xpert HIV-1即时核酸检测符合率更高，抗干扰能力更强，对总精密度、检测限的影响更小，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：人类免疫缺陷病毒（HIV-1）检测中应用HIV核酸即时检测分子诊断技术效果显著，可有效提高总精密度，值得临床推广。

【关键词】HIV核酸即时检测分子诊断技术；HIV-1检测；总精密度；检测限

【Abstract 】 objective: to study the value of real-time detection of HIV NUCLEIC ACID in the detection of human immunodeficiency virus (HIV-1) and its effect on the total precision and detection limit. Methods: A total of 60 clinical samples were collected from Jan. 2019 to Jan. 2020. All samples were detected by PCR and Xpert, and the application value of the two techniques was compared. Results: XPERT had higher coincidence rate, stronger anti-interference ability, less influence on total precision and detection limit (p < 0.05) . CONCLUSION: immediate detection of HIV NUCLEIC ACID in human immunodeficiency virus (HIV-1) detection by molecular diagnostic technology is effective, can effectively improve the total precision, worthy of clinical promotion. [ keywords ] HIV nucleic acid real-time detection molecular diagnostic technology; HIV-1 detection; Total Precision; detection limit

HIV核酸检测是艾滋病检测的重要补充手段，在婴儿的早期诊断和辨别窗口期感染有着重要作用^[1]。传统PCR技术报告结果长，且操作复杂，存在污染及假阳性情况较多，而HIV核酸即时检测是在发病或者发生事件的地点进行检测，能快速获得检测结果并及时反馈一线医务人员的一类检测方法，在保证了高灵敏度和高特异性的同时，可以大大加强HIV病毒载量的可及性，避免运输中导致的样本降解及污染，本研究将对样本应用HIV核酸即时检测分子诊断技术的价值进行评估。

1 材料和方法

1. 2. 一般资料

取2019年1月~2020年1月期间检验科收集的临床检测样本60例，其中男45例，女15例，年龄为20-49岁，检测者均知情同意和签署知情同意书。

1.2 实验仪器

采用GeneXpert Dx system设备（医疗器械注册《设备》证书编号：国械注准20173400829）及GeneXpert® Dx System平台

1.3 实验方法

对6份1mL血浆样本进行检测，传统PCR技术在进行核酸的提取和纯化后，在实时荧光定量PCR里同时进行PCR扩增和扩增的产物的检测。

Xpert HIV-1即时核酸检测，基于GeneXpert® Dx System全自动化平台的检测，集样本提取、核酸扩增至PCR检测等流程于封闭的系统中完成。采用半巢式荧光定量PCR，核酸提取部分采用专利技术-超声滤膜方法；核酸扩增部分采用，芯片式独立6色荧光PCR反应模块；最后，由于GeneXpert一个样本在一个封闭试剂盒中完成，同时试剂盒又在单独一套模块中进行。每支样本均重复5次检测。

1.4观察结果

符合率：准备3个阳性和3个阴性临床样本，同一批次一起做检测，分析阴阳性符合率。

总精密度：包括批内精密度、批间精密度、准确度。批内精密度：准备1例3-5次方标准品CV1、1例2次方低浓度标准品CV2，各重复5次检测。批间精密度：将标准品CV1，每天检测一次，连续检测5天。准确度：评估以上CV1和CV2结果与定标值的差异，差值应在0.5Log以内。

检测下限：将已知浓度的标准品，用阴性血浆直接稀释到40cp/ml（定量下限），重复5次检测。

抗干扰：取前面准备好的CV2样本，分别制备成2份脂血和2份溶血样本，4份样本一起检测，分析抗干扰能力。

2统计学方法

研究所得的计量资料（t）、计数资料（x²）使用SPSS22.0统计进行数据分析，表示方式为（x±s）和（n，%），P＜0.05，为差异有统计学意义。

3检测结果

Xpert HIV-1的符合率、总精密度明显高于传统PCR技术，而检测下限明显低于传统PCR技术，差异具有统计学意义（P<0.05）见表1。

表1：两种检测方法对比情况[x±s,(%)]

4 讨论

随着艾滋病分布的广泛，以及抗艾滋病工随访工作压力增长。降低病人失访率，降低病人等待结果时间已经成为一个重大的挑战。HIV核酸检测可用于婴儿的早期诊断作为HIV感染补充试验及急性期和晚期感染者的诊断^[2]。对HIV抗体阴性的高危人群样品以及采供血机构的原料血浆进行集合核酸检测，可及时发现窗口期感染，降低“ 残余危险度”，减少二代传播^[3]。同时HIV核酸检测可以用于治疗效果监测，病程监控及预测，以及耐药性监测。随着分子诊断技术的演变，核酸即时检测技术-POCT应运而生，可用于 HIV1感染、儿童早期 HIV感染的辅助诊断、疾病监控及抗病毒药物疗效评价^[4]。

HIV核酸即时检测分子诊断技术具有 即送即检、报告快速；高灵敏度、高特异性；高度集成化；内置质控，高准确度；高通量的优势，且操作简单、安全性高。检测性能远高于国产同类产品，相较于传统PCR技术的国产核酸检测下限为50cps/ml-250cps/ml，HIV核酸即时检测分子诊断技术明显更低。

本研究结果显示，Xpert HIV-1 VL的符合率、总精密度明显高于传统PCR技术，而检测下限明显低于传统PCR技术，差异具有统计学意义（P<0.05），其主要原因在于传统HIV核酸检测，设备灵活度较差以及HIV亚型覆盖不足的问题。Xpert HIV-1 VL即时分子诊断，可在极短的时间（90分钟）完成对HIV病毒载量的检测，并且具有和目前其他进口设备相同的性能及优秀一致性。及时的诊断可以让病人更快的获得诊断结果，降低窗口期和等待报告期间的传播风险，可以让医生更快的调整抗病毒治疗方案，降低合并症发生风险及耐药风险。同时由于设备的灵活性及操作的简易性，能够增加病毒载量的可及性和降低病毒载量检测成本及布置成本，提高病人随访率及提高早期诊断的可及性和准确性。

综上所述，应用HIV核酸即时检测分子诊断效果明显，可以提高总精密度，降低检查限，值得临床推广。

参考文献：

[1]孙婧,黄力勤,刘正敏, 等.不同标本保存条件对人类免疫缺陷病毒核酸鉴别试验的影响[J].中国医学装备,2018,15(5):72-75.

[2]中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)[J].中国病毒病杂志,2016,6(6):401-427.

[3]岳爽, 吴桂芳, 于晓燕,等. 自我管理对院外抗病毒治疗HIV感染者生活质量的影响[J]. 西部医学, 2015, 027(002):312-314.

[4]刘婉彤,童梅,林福玉, 等.分子诊断技术的临床应用进展[J].生物技术通讯,2020,31(2):240-250.