HPLC法检测 人参皂苷 Rg1 和 Rb1 评价 血栓通注射液放置稳定性的研究

HPLC法检测 人参皂苷 Rg1 和 Rb1 评价 血栓通注射液放置稳定性的研究

韩爱玲

新疆阿勒泰地区食品药品检验所，新疆 阿勒泰 836500

【摘要】目的：通过HPLC法检测人参皂苷Rg1和Rb1评价血栓通注射液的放置稳定性。方法：建立HPLC检测条件：C18柱，乙腈和水为流动，检测波长203 nm，流速1.0 mL·min^-1，柱温37℃。样品分为A、B两组，A组为生产一个月内的血栓通注射液，B组为放置2年的血栓通注射液。结果：A组人参皂苷Rg1在0.141-2.311μg范围内线性关系良好，R=0.999，人参皂苷Rb1在0.145-2.991μg范围内线性关系良好，R=0.998，平均回收率分别为99.4%和94.7%。B组人参皂苷Rg1在0.121-2.421μg范围内线性关系良好，R =0.999；人参皂苷Rb1在0.136-2.731μg范围内线性关系良好，R=0.996，平均回收率分别为98.7%和95.6%。两组的精密度、稳定性、重复性RSD均小于2%；A组和B组血栓通注射液共5批样，两组之间人参皂苷Rg1和Rb1含量无明显变化，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：通过HPLC法检测血栓通注射液中的人参皂苷Rg1和Rb1可以评价其放置稳定性。

【关键词】 HPLC；血栓通注射液；人参皂苷；稳定性

血栓通注射液是国家火炬计划复方血栓通胶囊的延续，其主要用于急性缺血性脑血管疾病的治疗^[1]。该制剂中三七为君药，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1等皂苷。目前，其法定质量标准采用HPLC测定其中5个皂苷类成分的含量^[2]。血栓通注射液在放置储存过程中是否发生的含量的变化，将很大程度上影响其安全性和有效性，本研究将采用HPLC法，以人参皂苷Rg1和Rb1为指标，研究其在放置过程的含量变化，进而评价血栓通注射液的稳定性。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：Agilent 1260（美国Agilent公司）。对照品：人参皂苷Rg1（批号110703-201027）和人参皂苷Rb1（批号110704-200420）由中国食品药品检定研究院提供，样品为市售品。

2 实验方法

2.1对照品和供试品的制备

精密称取三七总皂苷对照品63.36 mg，加甲醇适量使溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。血栓通注射液分为A、B两组。取每一组样品适量，混匀，精密量取1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。

2.2 色谱条件

HPLC色谱柱：Phenomenex Luna C18；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0-45min，20% A；45-65 min，20%A→34% A；65-85 min，34% A；85-86 min，34%A→90% A；86-96 min，90% A），进样量：10μL，检测波长：203nm，流速：1 mL·min^-1，。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察

精密称取三七总皂苷对照品50.10 mg，置5 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解，稀释摇匀，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液适量，稀释成系列溶液，取1μL注入液相色谱仪测定，以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。

2.3.2 重复性试验

取各组同一批样品，精密量取0.5、1、1.5 mL，各取3份，分别置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，进样液相色谱仪测定。

2.3.3 准确度试验

精密量取已知含量的样品0.5mL，置10mL量瓶中，分别加入人参皂苷Rg1对照品溶液、人参皂苷Rb1对照品溶液各1mL，再加甲醇至刻度，进样液相色谱仪测定，计算回收率。

2.3.4稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、16、32 h，进样液相色谱仪测定，评价实验的短期稳定性。

2.5 统计学方法

采用SPSS20.0软件进行，计量资料采用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 线性关系

由表1所示，两组样品中人参皂苷Rg1和Rb1在各自的线性范围内线性关系良好，R均>0.99。

表1 两组样品的标准曲线及定量限

3.2 重复性

A组人参皂苷Rg1和Rb1的RSD分别为1.1%、1.3%；B组人参皂苷Rg1和Rb1的RSD分别为1.3%、1.5%，表明本方法重复性良好。

3.3 准确度

A组人参皂苷Rg1和Rb1的平均回收率分别为99.4%和94.7%；B组人参皂苷Rg1和Rb1的平均回收率分别为98.7%和95.6%，表明本方法回收率良好。

3.4 稳定性

A组人参皂苷Rg1和Rb1 RSD分别为0.52%和0.71%；B组人参皂苷Rg1和Rb1 RSD分别为0.65%和0.72%。表明供试品溶液在室温下放置，至少32 h内稳定。

3.5 两组样品含量的对比

由表2所示，A、B组血栓通注射液人参皂苷Rg1和Rb1含量无明显变化，差异无统计学意义（P>0.05）。

表2 两组样品中人参皂苷Rg1和Rb1测定结果（mg·mL^-1）

4 讨论

血栓通注射液主要成分为三七总皂苷提取物，其分离难点主要为人参皂苷Rg1与Re的分离及人参皂苷Rb1与相邻杂质峰的分离^[3]。本实验针对血栓通注射液在放置的过程中成分和含量的变化，以人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1为质量控制指标，建立了HPLC的测定方法，并进行方法学验证，结果表明本方法简便，专属性强，准确，重复性良好，可用于该制剂的质量控制。血栓通注射液在我单位储存条件下，放置2年的时间，然后检测其稳定性，结果显示血栓通注射液在有效期2年内相当稳定，其主要质控成分人参皂苷Rg1和Rb1无显著的变化。以上结果提示血栓通注射液在我单位储存条件下，放置2年的时间并没有发生变化。

参考文献

[1] 罗先才. 冠心宁注射液联合血栓通注射液治疗不稳定型心绞痛[J]. 中国实验方剂学杂志, 2013, 19(4): 303-305.

[2] 王常顺, 刘永利, 王晓蕾, 等. UPLC, HPLC测定血栓通注射液中个皂苷类成分含量的比较研究[J]. 药物分析杂志, 2013, 33(9): 1617-1620.

[3] 成彦, 陈伟. HPLC法同时测定复方血栓通胶囊中5种皂苷类成分[J]. 安徽医药, 2015, 19(7): 1264-1267.