31例腹腔镜脾切除术治疗ITP前后T淋巴细胞亚群检测分析

31例腹腔镜脾切除术治疗ITP前后T淋巴细胞亚群检测分析

马利锋王晨宇李涛张立超刘国超

马利锋王晨宇李涛张立超刘国超王建龙康建省（通讯作者）

[摘要]目的：测定特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者腹腔镜脾切除术前后外周血T淋巴细胞亚群的变化，并分析其临床意义。方法：通过采集31例患者手术前后静脉血，采用流式细胞术检测外周血CD3+、CD4+、CD3/CD4、CD3/CD8及CD3CD4/CD3CD8比值，同时测定血常规，比较T淋巴细胞亚群手术前后变化及与血小板变化的相关性。结果：31例因ITP行手术治疗患者前后比较CD3+、CD4+、CD3/CD4、CD3/CD8及CD3CD4/CD3CD8测定值差异均有统计学意义(P＜0.05)，且与术后血小板变化呈一定相关性。结论：ITP患者存在T淋巴细胞亚群失衡，脾切除术可改善ITP患者T淋巴细胞亚群的失衡，且可能作为一个了解患者预后的参考指标。

[关键词]特发性血小板减少性紫癜腹腔镜脾切除术T淋巴细胞亚群

DOI:10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2014.44.029

作者单位：马利锋，李涛，张立超，刘国超，王建龙，康建省（通讯作者）：050005河北石家庄，河北医科大学第二医院

王晨宇：075000河北张家口，河北北方学院附属第一医院

TheChangesofT-lymphocyteSubsetamong31PatientswithIdiopathicThrombocytopenicPurpurabeforeandafterLaparoscopicSplenectomy

MaLifeng,WangChenyu,LiTao,ZhangLichao,LiuGuochao,WangJianlong,KangJiansheng

Abstract:ObjectiveToexplorethechangesofperipheralbloodT-lymphocytesubsetamongpatientswithidiopathicthrombocytopenicpurpura(ITP)beforeandafterlaparoscopicsplenectomy,andanalyzeitsclinicalsignificance.MethodThevenousbloodofthe31patientsbeforeandafteroperationwereacquiredtodetecttheperipheralblood’sCD3+,CD4+,CD3/CD4,CD3/CD8andCD3CD4/CD3CD8ratiothroughthemethodofflowcytometrydetection.Meanwhile,patients’routinebloodtestswerealsoconductedtostudythecorrelationbetweenT-lymphocytesubsetschangesbeforeandafteroperationandthechangeofplatelet.ResultThedifferencesofCD3+,CD4+,CD3/CD4,CD3/CD8andCD3CD4/CD3CD8inthe31patientsbeforeandaftertheoperationbyidiopathicthrombocytopenicpurpurawereofstatisticallysignificant(P<0.05),andthechangesofplateletwerealsoassociatedwiththeoperation.ConclusionITPpatientshavetheimbalanceofT-lymphocytesubsets.SplenectomycanimprovetheT-lymphocytesubsetsimbalanceinpatientswithITP,andmayserveasareferencetotheprognosisofsuchpatients.

Keywords:idiopathicthrombocytopenicpurpura;laparoscope;splenectomy;T-lymphocytesubsets

特发性血小板减少性紫癜（idiopathicthrombocytopenicpurpura，ITP），也叫自身免疫性血小板减少性紫癜（idiopathicautoimmunethrombocytopenicpurpura，ATTP），是临床上最常见的一种血小板减少性疾病。主要由于自身抗体与血小板结合，引起血小板生存期缩短。ITP的人群发病率估计约为1/10000，女性:男性比例约2~3:1。ITP患者除有体液免疫异常外，尚存在细胞免疫异常[1]。通过检测31例ITP患者治疗前后T淋巴细胞亚群变化，并比较术后T淋巴细胞亚群变化与血小板变化的相关性，旨在分析其临床意义。

1.资料与方法

1.1临床资料

2013年1月－2014年5月在河北医科大学第二医院胆道微创外科住院ITP患者31例，男8例，女23例，年龄16~71岁，中位数年龄40.5岁。诊断标准参照血液病诊断及疗效标准[2]，发病时PLT：(11.3～49.5)×109/L。术前都有过内科治疗史，效果不佳于我科行手术治疗。其中2例合并胆囊结石，行腹腔镜脾切除术+胆囊切除术。

1.2检测方法

1.2.1应用试剂CIM－FITC/CD8－PE/CD3－PC5三标记单克隆抗体购自贝克曼库尔特公司，溶血素购自贝克曼库尔特公司。

1.2.2检查仪器FC500型流式细胞仪（COULTER公司），XFA6100A型全自动血常规分析仪（普朗医疗公司）。

1.2.3方法31例住院患者均在手术前、手术后1天、3天、7天、14天采集静脉血一次，流式细胞术定量检测ITP患者外周血T淋巴细胞亚群，以%表示。取患者外周静脉血1ml（EDTA试剂抗凝），于试管中加入10μl的三标记单克隆抗体(CD4－FITC/CD8-PE/CD3－PC5)，在试管中再加入20μl抗凝静脉血，充分混匀，室温避光孵育30min后，加入红细胞裂解液(溶素)100μl，以1200r/min的速度离心5min，弃上清，生理盐水洗涤一次，最后以500μl的生理盐水悬浮细胞，流式细胞仪检测10000个淋巴细胞。同时通过我院血常规分析仪检测血常规。

1.3统计学方法

运用SPSS16统计软件进行统计分析，T细胞亚群数据以均数±标准差(x±s)表示，细胞百分率以百分数表示，采用两样本配对t检验，P＜0.05为有统计学意义。两变量间的相关性采用Pearson相关分析以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1腹腔镜脾切除术前后ITP患者T淋巴细胞群比较

31例患者行腹腔镜脾切除术前后T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+和CD3/CD4均上升，而CD3/CD8及CD3CD4/CD3CD8数值下降，差异均有统计学意义(P＜0.05)（见表1）。

2.2ITP患者术后T淋巴细胞群与血小板变化比较

ITP患者术后14天血小板值呈[（120.5±25.93）×109/L]，且T淋巴细胞中CD3+%、CD4+%、CD3/CD4、CD3CD4/CD3CD8与血小板值的增长呈正相关，CD3/CD8与血小板值呈负相关。差异均有有统计学意义(P＜0.05)（见表2）。

3.讨论

特发性血小板减少性紫癜的治疗仍是医学难题，约30~40%病人可通过激素治疗缓解[3]，有大部分的病人单纯依靠内科治疗不能有效缓解及控制病情，对于此类病人行腹腔镜脾切除术通过目前随访总体有效率达80%以上[4]，且安全性可靠[5]。本次所选31例患者，脾切有效者（术后血小板＞50×109/L）30例，为96.7%，效果确切。ITP患者体内存在着多种T淋巴细胞异常，尤其是T细胞亚群功能和比例失常，在ITP的发病机制中起重要作用[6]。通过本研究显示：患者行腹腔镜脾切除术前后T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+和CD3/CD4均上升，而CD3/CD8及CD3CD4/CD3CD8数值下降，T淋巴细胞中CD3+%、CD4+%、CD3/CD4、CD3CD4/CD3CD8与血小板值的增长呈正相关，CD3/CD8与血小板值呈负相关。说明腹腔镜脾切除术后不仅去除了破坏血小板的主要场所，同时改变了机体内免疫系统的功能，使得血小板数量及功能恢复。腹腔镜脾切除术后的ITP患者免疫功能并未下降，反而有所改善，在激素治疗效果不佳时，应积极考虑行腹腔镜脾切除术[7]。脾切除的选择应该个体化，但个体化绝不意味着随意化。人体的免疫系统中，CD4+T细胞与CD8+T细胞之间相互诱导、相互制约，共同形成T细胞免疫网络，它们之间的数量、功能、比例等的变化决定着免疫应答的发生、类型、发展及预后[8]。CD4+T淋巴细胞数量减少，对自身体内反应性T细胞的抑制作用降低，活化的CD8+T细胞、巨噬细胞便会破坏、吞噬自身体内血小板，也可辅助B细胞活化增殖产生抗血小板抗体进而通过补体系统或调理吞噬作用破坏血小板导致血小板的减少和ITP的发生[9]。腹腔镜脾切除术后的患者外周血中CD4+T细胞数量较治疗前升高，CD8+T细胞数量下降。脾切后原有免疫紊乱被纠正，CD4+T细胞数量及功能逐渐恢复，随之血小板数量也逐渐恢复。虽然严格的说，脾切除术本身不能“治愈”本病，但是清除了破坏血小板的主要场所，同时通过本研究还发现，脾切除还可以改变患者的免疫功能，同时检测患者的T淋巴细胞亚群，对患者的预后及手术疗效的判断等都有很好的指导作用。同时还提示我们，是否可以通过药物或者其他手段来改变机体中T淋巴细胞亚群的功能，从而达到治疗ITP患者的可能，从而避免了患者手术治疗，提高内科治疗有效率，也为治愈ITP患者提高一种临床思路。本研究只是观察患者免疫功能及血小板情况至术后14天，随访时间较短，应观察继续术后长远疗效及患者免疫功能情况。因此，我们认为CD4+、CD8+T细胞水平，可作为一个了解患者预后的指标。

参考文献

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