三种不同方法检测乙型肝炎表面抗原的临床应用及比较

三种不同方法检测乙型肝炎表面抗原的临床应用及比较

金小丽

武清区中医医院天津武清301700

摘要：目的通过对实验组和对照组HBsAg进行检测，探讨3种方法检测乙型肝炎表面抗原准确性、灵敏度和特异度，为今后临床选择检测乙型肝炎的方法提供依据。方法选择172例确诊的乙型肝炎患者作为观察组，258例各项检查指标排除乙型肝炎感染的患者作为对照组，对两组患者血清分别用化学发光分析法（CMIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）、胶体金法检测乙型肝炎表面抗原，检测完成后，对三种方法的检测结果进行比对，结合三种方法的试剂成本，检测时间及操作过程探讨其临床应用价值。结果三种检测方法的准确度由高到低分别是，化学发光分析法>酶联免疫吸附法>胶体金法；三种方法的灵敏度与特异度由高到低分别是，化学发光分析法>酶联免疫吸附法>胶体金法，其差异具有统计学意义（P<0.05）。结论化学发光分析法能够准确的检测出乙型肝炎表面抗原，且灵敏度、特异度高，是临床术前、有创检查前、血透前及孕产妇筛查的首选。。

关键词：乙型肝炎表面抗原；检测；电化学发光分析法；酶联免疫吸附法；胶体金法

乙型肝炎病毒性肝炎简称乙肝，是一种由乙肝病毒（HBV）感染后引发的疾病，乙型肝炎病毒是一种嗜肝病毒，主要存在于肝细胞内并损害肝细胞，该病变以肝脏炎性病变为主，并伴有多器官损害[1]。传染率极高，在世界各国广泛流行，具统计，全世界无症状乙肝病毒携带者超过2.8亿，我国约占1.3亿，已超过中国人口的十分之一，感染乙肝病毒后，会导致血清中出现特异性的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）及其他血清标志物[2]。乙型肝炎病毒主要通过乙肝患者和（或）乙肝病毒携带者进行传播，在潜伏期和急性期，病人血清均有传染性。传播途径有血液传播、医源性传播、母婴传播和性传播，严重威胁人类健康。所以，如何准确的检测乙型肝炎病毒，切断传染源就成为了至关重要的问题。乙肝病毒由大球形颗粒（Dane颗粒）、小球型颗粒与管型颗粒组成，HBsAg是由HBV的基因组所特定的，为上述三种形态的颗粒所共有。HBsAg能刺激机体产生相应抗体—抗HBS，它是HBV的中和抗体，具有免疫保护作用，感染乙肝病毒后，会导致血清中出现特异性的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）及其他血清标志物[2]，是筛查乙肝最重要的一项血清标志物，检测结果阳性则提示患者体内存在乙肝病毒[3]。故HBsAg检测的准确性在乙型病毒性肝炎的临床诊断、治疗以及疗效判定方面都具有很大的价值。

孕妇由于肝脏负担加重，儿童免疫系统不成熟，老年人由于各器官功能退化都是乙肝病毒的易感者，另外，接触乙肝病人的医护人员，直接接触血液、分泌物的医护人员，乙肝病人和乙肝病毒携带者的配偶，家庭成员或密切接触者，都属于易感者。感染乙肝后如果不能及时发现，实施有效、及时的救治，易转化为肝硬化甚至肝癌，对患者的身体健康造成严重危害，同时还增加了患者家庭的经济负担。且由于不同厂家试剂、不同型号仪器以及方法学等存在差异，在乙肝病毒感染初期，血清中HBsAg的浓度很低，不同的检验机构所用检测方法也不尽相同，所以检测结果存在差异，不可避免的造成一定程度的误诊或漏诊，甚至可能引发医疗纠纷。

目前，所有检验机构HBsAg检测方法主要有，ELISA、CMIA、胶体金法、时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术及PCR技术。我院现有的检测方法有化学发光分析法、酶联免疫吸附法、胶体金法。本文通过分析三种检验方法的测定结果，以探讨出三种方法在不同人群的适用性，为临床更为科学选择检查方法提供依据。

1．对象与方法

1.1研究对象

选取我院自2015年3月—2017年2月住院收治的根据病史、肝功能、B超、HBVDNA等确诊为乙型肝炎的患者172例。以上所有患者均符合2000年中华医学会传染病学会分会、肝病学分会制定的病毒性肝炎诊断标准[4]。其中男112例，女60例，年龄25～82岁，平均年龄（48.46±5.96）岁。选择2015年3月—2017年2月我院258例非乙型肝炎肝患者作为对照组，其中有男142例，女116例，年龄在30～75岁，平均年龄为（49.46±4.16）岁。172例乙肝患者作为观察组。

1.2研究方法

本研究采用对照研究的方法，258例非乙肝患者作为对照组，172例乙肝患者作为观察组，两组患者的血清均分别采用EMIA、ELISA、胶体金法三种方法进行检测，所用检测仪器性能正常、试剂均按相应条件保存并在试用期内，操作程序均按相应SOP进行，结束后记录两组患者检测结果，通过对比三种检测方法的准确性、灵敏度及特异度，探讨其临床应用价值。

1.3实验仪器与结果判定

1.3.1实验仪器与操作方法

EMIA采用购自美国雅培公司的AＲCHITECT-I1000全自动化学发光仪。操作步骤按仪器的SOP进行实验，测定结果由仪器自动完成。

ELISA检测试剂为上海科华生物工程股份有限公司生产，仪器为TECAN-150全自动酶免工作站。按仪器的操作规程进行实验，所测结果均由仪器自动完成。

胶体金法所用试剂为艾博生物医药（杭州）有限公司提供，按照其说明书中方法检测，并在实验后10-20min内判读结果。

1.3.2阳性判断标准

化学发光法HBsAg的单位为IU/ml，结果≥0.05时判定为阳性；ELISA的HBsAg以S/CO为单位结果≥1.0时判为阳性；胶体金法HBsAg的判断标准为测试区和质控区内均出现红色条带为阳性。

其中，灵敏度＝实验组实际阳性数／理论阳性数；特异度＝对照组实际阴性数／理论阴性数；假阴性率＝1－灵敏度；假阳性率＝1－特异性。

1.4统计学方法

采用SPSS17.0统计学分析软件对实验数据进行分析处理，计数资料则采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2．结果

2.1检测结果

经过检测结果分析得出结论，三种试验方法的准确度由高到低分别是EMIA>ELISA>胶体金法。三组结果比较结果通过χ2检验P<0.05，差异有统计学意义。见表1

3讨论

根据对检测结果的分析，三试验方法都可达到检验效果，但敏感度、特异度却不尽相同。胶体金法的优点是方便、快速、试剂易于保存，特别适用于血站献血筛查，体检中心和急诊，但实验结果显示该法灵敏度低，且准确率低，且该方法影响因素较多，容易造成HBsAg阳性漏检[5]。

ELISA是目前国内各血液检查最常用的方法之一，但由于其受加样、温度、孵育时间、洗板、显色等各种因素的影响，导致产生一定的假阳性和假阴性结果，给结果判读结果带来一定程度的影响。而且当HBsAg浓度过高时，容易产生钩状效应，导致假阴性结果[6]。CMIA特点是检测速度快、自动化程度高易于控制、灵敏度较高等[7]。通过两组患者检测结果分析，在测定HBsAg时，CMIA与另外两种方法相比，CMIA在HBsAg检测的敏感度、特异度高，弥补了其他方法耗时、易漏检等很多不足之处[8]，CMIA检测HBsAg的分析灵敏度为0.03IU/ml，较ELISA测定灵敏度0.13IU/ml高，能够检出人群中HBsAg浓度较低的患者[9]，特别是感染初期的患者。大量研究[10]表明，CMIA在检测HBsAg中具有很大优势，测定结果阳性率较高，它的测定结果具有很重要的价值，对医生早期诊断以及制定有效治疗方案具有重要意义。能够作为临床检测HBsAg，特别是血透病人，术前、有创检查前患者及孕产妇检测HBsAg的首选方法。由于CMIA用的是配套试剂，而且仪器自动化程度高，大大提高了检测方法的稳定性以及结果的重复性。另外，CMIA法定量检测还解决了定性方法对灰区值判断的困难，能够对灰区结果做出明确、客观的评价和判断，能对医生对患者病情疗效做出合理的解释，并且指导治疗[12]。

综上所述，三种方法各有所长，胶体金法检测用时最短，操作最为简单，试剂成本低，能够满足急诊和健康体检的基本要求，但由于影响因素多，准确度不高，无法检测出低浓度的HBsAg。酶联免疫吸附试验准确度、特异度、灵敏度均比胶体金法高，试剂成本低，适用于大批量的健康体检以及流行病学筛查，但操作繁琐，检测时间长，也存在一定漏检。化学发光分析法检测乙型肝炎表面抗原的准确度高，灵敏度、特异度高，特别适用于临床术前、有床检查前、血透前及孕产妇筛查。

参考文献：

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[10]魏丽红.三种方法检测乙肝表面抗原的结果分析［J］．临床合理用药，2014，7（4）：98-99.

[11]卫晓青，黄秋芳，戴悦，等．低水平HBsAg3种方法检测结果比较［J］．检验医学与临床，2013，10（3）：283－286．