不同对照品对血塞通软胶囊含量测定影响

不同对照品对血塞通软胶囊含量测定影响

陈平

陈平

(昆明圣火药业集团有限公司650217)

【摘要】目的:选用不同对照品为指标，对血塞通软胶囊中三七总皂苷含量测定的影响进行研究。方法：采用紫外分光光度法，香兰素-高氯酸显色，以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1及不同批号三七总皂苷对照品分别作对照，测定血塞通软胶囊中三七总皂苷的含量。结果：不同对照品对血塞通软胶囊中三七总皂苷含量测定结果差异明显。结论:紫外分光光度法测定血塞通软胶囊中三七总皂苷含量时，对照品的选择对含量测定结果有影响。

【关键词】紫外分光光度法对照品三七血塞通皂苷

【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）19-0074-02

血塞通软胶囊是从传统活血化瘀药物三七根中提取的三七总皂苷加适量赋形剂制成的软胶囊。具有活血祛瘀、通脉活络、抑制血小板聚集和增加脑血流量作用。用于脑路瘀阻、眼底病变、中风偏瘫、心脉瘀阻、胸痹心痛、脑血管病后遗症、心绞痛等症候的治疗上疗效显著。国家拟采用紫外分光光度法及高效液相色谱法对血塞通软胶囊中三七总皂苷含量进行控制。但在实验过程中发现，采用不同对照品测定总皂苷含量时，其结果有显著性差异。因此，本文针对常用的几种对照品就血塞通软胶囊中三七总皂苷含量检测对照品选用问题展开较系统的研究，比较不同对照品对测定结果的影响，为含有三七总皂苷的制剂紫外含量测定时对照品的选择提供依据。

1仪器、试剂、材料

仪器、试剂：TU-1901普析双光束紫外可见分光光度计；必能信BRANSONBUG25-12超声仪；赛多利斯BSA224S-CW、CPA225D天平。香兰素、冰醋酸、高氯酸、石油醚等试剂采用分析纯。对照品：人参皂苷Rg1(110703-201128，93.4%，简称Rg1)、人参皂苷Re(110754-201224，92.7%，简称Re)、人参皂苷Rb1(110704-201223，95.9%，简称Rb1)、三七皂苷R1(110745-201318，94.0%，简称R1)、三七总皂苷1(870-200001)、三七总皂苷2(110870-201002，R16.9%、Rg128.0%、Re3.8%、Rb129.7%、Rd7.3%)，以上对照品供含量测定用，购于中国药品生物制品检定所。

血塞通软胶囊：本品每粒含三七总皂苷60mg，批号：20140306、20140307、20140308、20140401、20140402、20140403，由昆明圣火药业(集团)有限公司提供。

2方法与结果

2.1对照品溶液的制备

2.1.1三七总皂苷对照品溶液：取60℃减压干燥2小时的三七总皂苷对照品1、2适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1ml约含74μg的溶液，即得三七总皂苷对照品溶液。2.1.2Rg1、Re、Rb1、R1对照品溶液：分别精密称取Rg1、Re、Rb1、R1对照品适量，各加甲醇制成每1ml溶液含1mg的溶液。

2.2供试品溶液的制备：取装量差异项下的内容物适量(约相当于含三七总皂苷20mg)，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚(30～60℃)20ml，置60℃水浴上加热回流30min，放冷，石油醚液轻轻倾出，滤过，弃去石油醚液，滤纸用15ml石油醚(30～60℃)洗涤，洗液弃去，滤纸晾干，用40ml甲醇分次洗涤滤纸和残渣，洗液滤入同一锥形瓶中，轻轻振摇，使锥形瓶中残渣溶解(必要时超声溶解)，溶液转入50ml量瓶中，锥形瓶加甲醇适量，分次洗涤，并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。低温(0℃以下)放置2h，迅速滤过，弃去初滤液，续滤液放至室温，精密量取续滤液2ml，置于25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

2.3检测波长的确定：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置于10ml具塞试管中，同时做一空白管，于水浴上蒸干，冷却至室温，加5%香兰素冰醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，于70℃热水浴中显色15分钟，冷却至室温，加冰醋酸5ml，摇匀。于400-700nm进行全波长扫描，结果对照品及供试品溶液的吸收光谱图基本相同，在550nm波长处均有较大吸收，所以选择550nm为检测波长。

2.4标准曲线的制备：精密吸取上述制备的对照品溶液各0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分别置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按2.3项下方法处理，分别于550nm处测定吸光度，以吸光度(y)为纵坐标，对照品质量浓度(x)为横坐标，制定标准曲线，其结果见下表：

3讨论

3.1根据国家药典委对血塞通软胶囊标准中三七总皂苷的检测方法要求，含量测定方法为紫外分光光度法和高效液相色谱法相结合。由于三七药材不同产地，生长周期的差异，不同厂家按工艺制备的三七总皂苷中5指标Rg1、Re、Rb1、R1、Rd高低不一，高效液相色谱对每个单一指标及5指标总和进行最低限度的要求，为保障单一指标既符合要求，又能控制投料，采用紫外含量测定对投料的上下限度进行控制。因此，本文对此方法展开研究，希望能对质量标准的制定和研究工作更好的服务。

3.2针对血塞通软胶囊供试品溶液的制备方法中不同的除杂方法对含量测定结果影响较大，必须根据不同厂家制剂配料的特点对待测成分进行前处理，尽可能避免辅料等对含量测定造成的干扰，导致含量测定结果偏高。

3.3采用紫外分光光度法测定总皂苷含量时，发现以不同皂苷类成分为对照品所得结果并不一致，且组间具有显著性差异。虽然，三七总皂苷中人参二醇型和人参三醇型含量相差不大，且制剂中有效成分为三七总皂苷，其显色反应与三七总皂苷对照品机理相似。但不同批次三七总皂苷对照品，对同一样品测试结果不同。这可能与不同批次的三七总皂苷对照品中每个指标含量与纯度等不尽相同，而根据标示均以100%的纯度计算测定制剂中的三七总皂苷含量有失偏颇。而Rg1、Re、Rb1、R1对照品不会因为对照品批次的不同对结果产生影响，故以Rg1、Re、Rb1、R1对照品较三七总皂苷对照品作为对照测定制剂中三七总皂苷的含量更为稳定可靠。本文对我公司生产的6批血塞通软胶囊含量进行测定，以Rg1为对照含量接近标示量，在90%～110%范围以内，较接近实际生产情况，而且相对其它3个对照稳定。同时，也对另外厂家的血塞通、血栓通系列产品进行对比，考察结果一致。但具体以何种对照品作为血塞通系列产品中三七总皂苷紫外测定对照品，科研工作者和国家监管部门还需结合更多因素制定出较为合理的对照品标准。

参考文献

[1]中国药典委员会编，《中华人民共和国药典》2010年版一部，化学工业出版社

[2]“血塞通软胶囊”质量标准WS3???–182(Z–25)–2002(Z)

[3]陈旭等，三七中总皂苷含量测定的对照品筛选，中国实验方剂学杂志2013.4，19(7)

[4]刘旭等，三七总皂苷含量的紫外分光光度法测定，实用医药杂志，2008，25(4)