联合检测甲状腺乳头状癌组织中

联合检测甲状腺乳头状癌组织中

赵洪涛赵春清闫威高立学范立壮

赵洪涛赵春清闫威高立学范立壮

保定市第二医院(河北保定071051)

【摘要】目的探讨甲状腺乳头状癌中CD44v6和BRAF的表达及其与淋巴结转移的关系。方法应用免疫组化SP法对50例甲状腺乳头状癌(其中35例有颈淋巴结转移，15例无颈部淋巴结转移)和40例甲状腺腺瘤组织进行了CD44v6和BRAF的检测。结果癌肿组的CD44v6和BRAF阳性率显著高于甲状腺腺瘤组(p＜0.05)；伴有淋巴结转移的病例中CD44v6和BRAF的阳性率也显著升高(p＜0.05)。结论CD44v6、BRAF可以作为甲状腺乳头状癌的鉴别诊断指标；CD44v6、BRAF与颈淋巴结转移密切相关,可作为甲状腺乳头状癌预后的评估指标。

【关键词】CD44v6，BRAF，甲状腺乳头状癌，甲状腺腺瘤

［中图分类号］R581［文献标识码］A［文章编号］1810－5734(2012)10－02-03

TheclnicalsignificanceofdetectionCD44v6andBRAFinPapillaryThyroidCarcinoma.

ZhaoHong-tao，ZhaoChun-qing，YanWei，GaoLi-xue，FanLi-zhuang

(TheNO.2HospitalofBaoding，GeneralSurgeryDept，BaodingofHeibei，071051)

【Abstract】ObjectiveToexploretheexpressionofCD44v6andBRAFinpapillarythyroidcarcinomatissueandtherelationshipwithlymphmetastasis.MethodCD44v6andBRAFof50patientswiththyroidcarcinoma(PTC),35patientswithlymphnodemetastasis(PTC+LNM),40patientswithThyroidAdenoma(TA),weredetectedbyimmunohistochemicalSPmethod.ResultsThelevelsofCD44v6andBRAFofthePTCgroupweresignificantlyhigherthanthatofTA.TheCD44v6andBRAFlevelsofPTC+LNMgroupweresignificantlyhigherthanPTC-LNMgroup(P<0.05).ConstructionThepositiveexpressionofCD44v6andBRAFofpapillarythyroidcarcinomahascloserelationshipwithnecklymphnodemetastasis,itcanbeadifferentialdiagnositicindexofPTC.

【keywords】CD44v6，BRAF，PapillaryThyroidCarcinoma，ThyroidAdenoma

甲状腺乳头状癌(PapillaryThyroidCarcinoma,PTC)是甲状腺恶性肿瘤最常见的病理类型，约占70%-80%,绝大部分发生于年轻女性,极易发生颈部淋巴结转移,且相当一部分患者是无临床症状的隐性淋巴结转移。淋巴结转移是确定甲状腺乳头状癌临床分期和治疗的主要因素。最近来学者们在甲状腺乳头状癌中检测到高频率的基因突变。实验研究推测,肿瘤相关癌基因促进肿瘤淋巴道转移中起重要作用[1,2]。为了正确诊断和及时有效治疗甲状腺乳头状癌患者，需要我们进一步阐明甲状腺乳头状癌的发病机制，了解基因突变在甲状腺乳头状癌的发生过程中占有的地位。作为有价值的肿瘤分子标记物CD44v6，进入了研究视线，作为与免疫相关的膜整合糖蛋白多形性家族，其参与了细胞基质的黏附、淋巴细胞的激活和靶向以及肿瘤的生长和转移[3]。BRAF基因突变在PTC发生发展中的作用机制是研究的热点问题。在体外甲状腺细胞模型中的研究已表明,作为甲状腺特异性蛋白表达和增殖能力中心调控因子,相对于其他RAF亚型,有其独特而重要的作用[4，5]。现已被普遍认同的是其突变对信号传导通路的影响促进肿瘤转移。在本研究中，对甲状腺肿瘤患者血清中CD44v6、BRAF的水平进行检测，旨在探讨其与甲状腺癌的关系及意义,并初步探讨甲状腺乳头状癌的发病机制。

1材料与方法

1.1病例与分组:取自保定市第二医院2008～2011年手术切除标本例。分为2组：

111甲状腺腺瘤组40例,男15例,女25例；年龄23～60(平均52.5)岁。

112按照WHO标准组织学分类:甲状腺乳头状癌50例,男22例,女28例；年龄24～68(平均57.6)岁。所有病例术前均未经任何治疗。

1.2试剂:CD44v6和BRAF抗体和SP试剂盒均购自福州迈新公司。

1.3方法:所有标本均以10%福尔马林固定,并以石蜡包埋,每例4Lm连续切片,分别作HE染色及SP免疫组化染色,SP染色法按照SP试剂盒说明书进行，染色系统对照每例用TBS代替第一抗体作阴性对照,用已知CD44v6和BRAF阳性的组织作阳性对照。

1.4结果判断标准:CD44v6阳性表达位于细胞膜呈棕黄色颗粒，阳性表达超过肿瘤细胞数10%定义为阳性，否则为阴性。BRAF染色以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性.

1.5统计学处理:应用SPSS11.5统计软件，计数资料进行χ2检验，当n≥40，且某一个理论数1＜T≤5时，须对χ2进行连续性校正，避免假阳性结论。p＜0.05,差异有统计学意义。

2结果

2.1CD44v6和BRAF的表达

CD44v6在胞浆呈现片状或散在分布，未见有胞核的表达。40例甲状腺腺瘤组织中5例表达。50例甲状腺乳头状癌中有45例表达(见表2),差异性明显(p＜0.05)。在35例发生淋巴结转移的标本中，32例表达。在15例未发生淋巴结转移的乳头状癌标本中，3例表达(见表1),差异性明显(p＜0.05)。

BRAF在细胞浆呈现片状或散在分布。40例甲状腺腺瘤组织中6例表达。50例甲状腺乳头状癌中有47例表达(见表2),差异性明显(p＜0.05)。在发生转移的35例标本中有31例表达。未发生转移的15例乳头状腺癌标本中有4例表达(见表2),差异性明显(p＜0.05)。

表1CD44v6与BRAF在甲状腺乳头状癌的表达与临床病理特征关系

癌肿组的CD44v6和BRAF阳性率显著高于甲状腺腺瘤组(p＜0.05)；伴有淋巴结转移的病例中CD44v6和BRAF的阳性率也显著升高(p＜0.05)。

CD44v6和BRAF在甲状腺乳头状癌中的表达均比良性甲状腺组织高。CD44v6和BRAF基因蛋白往往在同一病例中共同表达，有一定的协同性。

3讨论

近几年来，通过对肿瘤浸润与转移的机制进行的研究，发现细胞黏附分子CD44v6在肿瘤的转移中起重要作用。CD44v6是作为分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，具有多种生物学功能。高表达CD44v6分子的肿瘤细胞通过与血管内皮细胞和细胞外基质中透明质酸的黏附，增强肿瘤细胞的易侵袭性和转移性。高表达的CD44v6与肿瘤的进展与转移密切相关[6]。本次实验中甲状腺癌组织中CD44v6表达明显高于甲状腺腺瘤（P<0.005），对判断甲状腺病变良恶性具有参考价值；伴淋巴结转移组CD44v6的表达明显高于无转移组（P<0.05），对判断甲状腺癌的转移趋势具有重要意义，对临床诊断有一定的帮助。我们认为检测甲状腺癌组织中CD44v6蛋白表达,可作为PTC的肿瘤标志物。

近年来学者们[7]在甲状腺乳头状癌中检测到高频率的BRAF基因突变，并认为癌基因事件与甲状腺乳头状癌的发生、发展有密切关系。BRAF癌基因编码的BRAF蛋白是有丝分裂原活化的蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)途径蛋白,是MAPK激酶家族里最高效的磷酸化剂,在凋亡和增殖过程中起着重要作用,位于MAPK通路入口处,它将细胞表面的受体和RAS蛋白通过MEK和ERK与核内的转录因子相连接,调节细胞的生长、增殖和凋亡。人类的许多恶性肿瘤中都有BRAF基因突变。因此，该突变可作为一个诊断和预后的分子生物学标记及开发治疗乳头状癌的基因靶。其基因突变与甲状腺癌的关系已成为目前研究的热点。

由于CD44v6和BRAF往往在同一病例中有共同表达。结合本文资料分析,我们认为：联合检测CD44v6和BRAF两种癌基因蛋白对甲状腺肿瘤患者的良恶性鉴别、判断有无转移,估测患者的预后有一定的价值。

参考文献：

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［３］张健.分子肿瘤标记物在甲状腺癌诊断中的意义［J］.中国实用内科杂志，2007，（17）：279.

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