野菊花总黄酮提取方法研究

野菊花总黄酮提取方法研究

田甜许忠

田甜许忠（乌鲁木齐市中医医院新疆乌鲁木齐830001）

【摘要】目的优选野菊花总黄酮的最佳提取工艺。方法采用正交实验法，以提取液中的总黄酮含量为考察指标，对影响野菊花提取工艺的因素进行了研究。结果实验设计四因素中提取次数有显著影响。结论野菊花总黄酮最佳提取工艺为：用10倍量的75％乙醇回流30分钟，回流两次。

【关键词】野菊花总黄酮正交实验提取工艺

野菊花为菊科植物野菊（ChrysanthemumindicumL.）的干燥头状花序，是中医常用的清热解毒药，具有疏风清热、消肿解毒的功效[1]。现代药理研究表明野菊花有抗毒、改善血液循环、抑制血小板聚集和增强吞噬细胞等功能[2]，现临床将野菊花水提醇沉制成栓剂，对慢性盆腔炎、宫颈糜烂和慢性前列腺炎等具有显著的临床疗效[3]，其主要成分为总黄酮，目前国内对野菊花的研究尚未见对其总黄酮提取工艺的报道，为了更好的开发的利用野菊花这一传统中药材，我们对野菊花总黄酮的提取工艺进行了研究，以便优选出简便有效、安全可行的提取工艺。

1仪器与药品

SPectrumlab54紫外可见分光光度计（上海棱光有限公司）；KQ—400DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电子天平（sartorius德国产）；DZF一6021型真空干燥箱（上海精密实验设备有限公司）；DRT一SX型恒温电热套。

芦丁标准品（中国药品生物制品检定所，批号0080—9705)；野菊花购于新疆参茸药业；其他试剂均为分析纯。

2试验方法与结果

2.1野菊花总黄酮的含量测定依照文献[4]进行测定

2.1.1对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品20mg置100ml容量瓶中，加甲醇70ml，置水浴上微热使溶解，放置室温，加甲醇至刻度，摇匀，即得（1ml含无水芦丁0.2mg）。

2.1.2标准曲线的制备精密量取对照品0.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml与6.0ml，分别置25ml容量瓶中，各加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，使混匀，放置6分钟，加1既硝酸铝溶液1ml，混匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，混匀，放置15分钟，照分光光度法（附录VB)，在512nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，标准曲线为A=13.1607C+0.00533r=0.9999

2.2提取方法的选择

2.2.1水提取方法：称取野菊花1g，加蒸馏水60ml，浸渍10分钟，煎煮60分钟，过滤，再加入蒸馏水40ml，煎煮30分钟，过滤，合并滤液，定容于100ml容量瓶中，从中吸取20ml定容于50ml容量瓶中，精密量取5ml，照标准曲线项下方法“加水至6ml”依法测定吸收度，测定野菊花总黄酮含量。

2.2.2乙醇取方法：称取野菊花1g，加乙醇60ml，浸渍10分钟，煎煮60分钟，过滤，再加入乙醇40ml，回流30分钟，过滤，合并滤液，定容于100ml容量瓶中，从中吸取20ml定容于50ml容量瓶中，精密量取5ml，照标准曲线项下方法“加水至6ml”依法测定吸收度，测定野菊花总黄酮含量。结果见表1。

表1野菊花提取方法选择结果（n=3）

由表1结果可知：乙醇提取法优于水提取法。

2.3乙醇提取工艺的考察

2.3.1选择乙醇浓度、提取时间、提取次数和乙醇用量4个因素，在进行单因素试验的基础上对每个因素选择3个水平，编制因素水平表（表2）。

表2野菊花乙醇提取工艺因素水平表

2.3.2试验与结果：称取野菊花1g，按L正交表设计方案进行试验，以野菊花总黄酮含量为指标进行方差分析，结果见表3、表4。

注：F0.05（2，2）=19.00

由表3、表4结果说明各因素对提取效果的影响程度依次为C＞A＞D＞B。提取次数C因素有显着性的差异（P<0.05）；而乙醇浓度、乙醇用量和提取时间在所考察的范围内则影响很小。因此，各因素的最佳水平组合为A2B1C2D1。即野菊花用10倍量75%乙醇回流两次，每次时间为30min。

3讨论

3.1野菊花分别用水和乙醇提取，测定野菊花的黄酮含量，后者较高，说明用乙醇为提取溶剂较为理想。

3.2我们对乙醇提取方法进行了预试，采取平行试验对渗漉法、超生法、回流提取法进行了比较，结果表明，回流法提取，野菊花总黄酮的提取量最高，故本工艺采取回流法提取。

3.3正交试验结果的极差分析和方差分析表明，提取次数对野菊花总黄酮的提取有显著性的差异。综合考虑，最终确定野菊花总黄酮的最佳提取工艺为：野菊花用10倍量75%乙醇做溶媒，回流提取两次，每次30min。

参考文献

[1]《中药大辞典》编写组.中药大辞典（下册）上海：上海科学技术出版杜，1979.21444-2145

[2]北京市野菊花协作组.野菊花制剂临床观察一附430例疗效分析。中药通报[J]，1983，8（4）：39-40.

[3]北京第六制药厂.野菊花药理研究及栓剂临床疗效观察.中药通报[J]，1985，10（7）：45-46

[4]林春蕊.野菊花总黄酮的含量测定.广西植物[A]，2002,22（5）：467-468