MMP-2与C5在死后心肌梗死中的表达与分析

MMP-2与C5在死后心肌梗死中的表达与分析

苏丽娟1李峰2穆丽娜3全雪莹3杨越3肖瑞

（1内蒙古医科大学基础医学院法医学教研室内蒙古呼和浩特010050)

(2内蒙古呼和浩特市公安局内蒙古呼和浩特010010)

(3内蒙古医科大学基础医学院内蒙古呼和浩特010050)

（4内蒙古医科大学基础医学院分子病理学实验室内蒙古呼和浩特010050)

【摘要】目的：探讨MMP-2与C5在死后心肌梗死中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学SABC法检测MMP-2与C5在死后心肌梗死及正常心肌中的表达。结果：MMP-2与C5在死后心肌梗死组织中呈高表达，在正常心肌组织中呈低表达，差异显著，具有统计学意义（P<0.01）。结论：MMP-2与C5参与死后心肌梗死的发生发展，推测MMP-2与C5可以成为死后心肌梗死诊断的新指标之一。

【关键词】MMP-2；C5；心肌梗死；免疫组织化学

【中图分类号】R361【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2018）08-0140-02

引言

心肌梗死（MyocardialInfarction,MI）是在冠状动脉病变基础上发生冠脉血量急剧减少或中断，相应心肌严重而持久地缺血所致，属于冠心病的严重类型。法医学案例中，心肌梗死是心源性猝死的主要机制。因其发生迅速短时间内可导致死亡，故肉眼与显微镜下均缺乏典型的形态学改变，在死后组织自溶等因素的影响下，死后诊断尤为困难。研究表明，基质金属蛋白酶2（Matrixmetalloproteinases-2,MMP-2）主要裂解细胞外基质中的Ⅳ型胶原，协同胶原酶分解变性胶原，与心肌重构有关[1]。补体成分5（C5）是补体系统中一种重要组分，可以透过受损的心肌细胞膜进入细胞内，发挥细胞毒、溶菌与杀菌作用。本研究利用免疫组织化学方法检测MMP-2与C5在死后心肌梗死组织和正常心肌组织中的表达，探讨MMP-2与C5在心肌梗死发生与发展中的作用，从而为死后心肌梗死的诊断提供参考依据。

1.材料与方法

1.1材料来源

在内蒙古医科大学司法鉴定中心收集人体心脏心肌梗死石蜡包埋组织样本25例，正常心肌组织23例。所有死者经法医学诊断均具有不同程度的冠状动脉粥样硬化及陈旧性心肌梗死瘢痕，25例死者中男性20例，女性5例。

1.2免疫组织化学法

MMP-2抗体与C5抗体购于北京博奥森生物技术公司，免疫组化染色试剂盒购于上海酶联生物科技有限公司，DAB显色试剂盒购于福州买新生物技术公司。MMP-2与C5抗体浓度均为1:100。用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。按照免疫组织化学SABC法进行操作，实验步骤严格按照试剂盒要求进行。

1.3结果判定

阳性细胞表现为细胞质或细胞核出现棕黄色或棕褐色颗粒。阳性分级标准根据细胞染色强度及阳性细胞百分比两个方面综合判断。染色强度评分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。阳性细胞所占的百分比评分：0分为阴性，l分为阳性细胞≤10%，2分为11%～50%，3分为51%～75%，4分为＞75%。染色强度与阳性细胞百分比的乘积≤3分为阴性表达（-），4～6分为弱阳性表达（+），7～9分为中阳性表达（++），10～12分为强阳性表达（+++）。

1.4统计学方法

数据采用SPSS13.0统计软件。各构成比差异采用卡方检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1免疫组织化学结果

MMP-2在心肌梗死与正常心肌组织中的表达

MMP-2在心肌梗死与正常心肌组织中的阳性表达率分别为76.0%与21.7%，MMP-2在心肌梗死中的表达较正常心肌组织为高，差异显著，具有统计学意义（χ2=14.108，P＜0.01）。见表1及图1。

3.讨论

基质金属蛋白酶（Matrixmetalloproteinases,MMPs）是一类含Zn2+的降解细胞外基质的内切蛋白水解酶家族，在组织重构中起重要作用[2]。MMP-2属于MMPs家族中的明胶酶类，又称为明胶酶A，与血管发生、动脉粥样硬化具有相关性。心肌中的MMPs能够降解心脏中所有的基质成分，是心肌间质重构中基质降解的推动力量[3]。有研究显示，在充血性心力衰竭和心肌梗死后心肌组织中MMPs的表达和活性增加，而且与心室重构有关。另有研究认为，心肌梗死后心肌中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平增高，使蛋白激酶C（PKC）增加，从而使MMPmRNA表达增高。本研究表明，在25例心肌梗死死后石蜡包埋组织标本中，在心肌梗死周围区域的心肌细胞中MMP-2呈阳性表达，且阳性表达率为76%，表明MMP-2与心肌梗死具有相关性，提示MMP-2参与心肌梗死后心肌组织的基质分解活动。

补体成分5（C5）是补体系统中一种重要组分，由巨噬细胞产生，通过嵌入细胞膜的磷脂双分子层结构中，使细胞膜穿孔，细胞内容物渗漏而发挥细胞毒、溶菌与杀菌作用。心肌梗死的心肌细胞损害重，因此C5可透过损害的细胞膜进入胞内。胡丙杰等研究表明C5的稳定性较好，可用于死后4℃放置14天的尸体，初步证实C5作为心肌梗死死后诊断指标受死后自溶等因素影响较小，对诊断心肌梗死具有较好的特异性[4]。申成斌等研究表明，C5可以作为反映早期心肌梗死相对灵敏的形态学指标[5]。本研究结果发现,在25例心肌梗死死后石蜡包埋组织标本中，在心肌梗死尤其是心肌梗死周围区域的心肌细胞中C5呈阳性表达，且阳性表达率为72%，提示C5在心肌梗死的诊断上具有一定参考意义。

综上所述，MMP-2和补体C5的阳性表达与心肌梗死具有相关性，可以成为心肌梗死死后诊断的特异性指标，可为早期心肌梗死提供具有特异性的客观的病理形态学依据。

【参考文献】

[1]陈凤，杨淑娟，田智等.MMP-2和TIMP-2基因多态性与胃癌发病风险的研究[J].实验技术及其应用,2014,41(1):130-133.

[2]边素艳.基质金属蛋白酶及其组织抑制因子在心肌梗死后心室重构中的作用[J].现代诊断与治疗，2006，17(1):27-29.

[3]张军，贾国良，王海昌等.大鼠心肌梗死后心肌NF-KB、MMP-2和TIMP-2表达变化及其意义[J].心脏杂志,2006,18(1):54-59.

[4]胡丙杰,冯绮明,汪冠三等.心肌梗死6项免疫组化指标的死后稳定性比较[J].中国法医学杂志,2003,18(4):208-211.

[5]申成斌，王兆福，胡丙杰等.实验性早期心肌梗死的免疫组化研究[J].河南医学研究,2003,12(2):119-123.