探讨应用P53，Ki-67，P57免疫组化结合形态学鉴别诊断葡萄胎的方法

探讨应用P53，Ki-67，P57免疫组化结合形态学鉴别诊断葡萄胎的方法

王立坤

辽宁省瓦房店妇婴医院病理科116300

摘要：目的探讨葡萄胎显微镜下病理诊断及结合应用P57，P53，Ki-67蛋白在葡萄胎诊断中价值。方法收集有完整临床资料的流产病例包括30例完全性葡萄胎，22例部分性葡萄胎，15例水肿性流产病例，并以正常早期妊娠流产病例作为对照组。全部病例进行免疫组化P57，P53，Ki-67检测。结果30例完全性葡萄胎中26例P57（—）；所有部分性葡萄胎，水肿性流产及正常早期妊娠病例均为P57（+）。完全性葡萄胎，部分性葡萄胎，水肿性流产及正常早期妊娠P53阳性率分别95%，84%，15%，0，差异显著（P＜0.05）。完全性葡萄胎，部分性葡萄胎及水肿性流产Ki-67阳性率99%，84%，45%。差异显著（P＜0.05）结论P53；P57；Ki-67对于诊断葡萄胎有重要价值。P57（—）且P53和Ki-67（+）支持完全性葡萄胎，P57（+）且P53和Ki-67（—）提示水肿性流产

关键词：葡萄胎；P53；P57；Ki-67；免疫组化

葡萄胎亦称水泡状胎块（HM）是指伴有绒毛水肿及滋养细胞增生的发生异常的胎盘。WHO分类：完全性水泡状胎块（CHM），部分性水泡状胎块（PHM）及侵袭性水泡状胎块。葡萄胎发生于孕卵的滋养层，为绒毛基质微血管消失，从而绒毛基质积液，形成大小不等形似葡萄，故称为葡萄胎。两者临床处理及转归不同，鉴别诊断具有重要意义。

在实际工作中完全性葡萄胎与部分性葡萄胎在形态学上鉴别诊断存在很大困难，在诊断标准的把握上不易区分，病理诊断标准主观性比较强，病理医师间诊断重复性较差。虽然染色体核型分析可作为诊断葡萄胎金标准，但由于价格昂贵及资源稀缺，临床实用性较差，所以作者根据HE病理组织学改变结合免疫组化P57，P53及Ki-67蛋白的价值，探究葡萄胎鉴别诊断。

1材料与方法

1.1材料收集瓦房店妇婴医院2007—2014年间宫腔诊刮标本。共筛选出30例PHM，30例CHM，18例水肿性绒毛。10例正常早期妊娠流产。PHM患者年龄19—44岁，中位年龄26岁，CHM患者年龄17—53岁，中位年龄32岁。

1.2方法所有病例均经中性甲醛固定，石蜡包埋，4-5微米切片，常规苏木素-伊红染色和免疫组化，根据HE切片选择有代表性的蜡块行免疫组化染色。免疫组化采用SP法，单克隆抗体P57，P53，Ki-67购于福州迈新生物技术有限公司，行S-P染色步骤，DAB显色，苏木精复染。

1.3结果判定P57阳性定位于细胞滋养叶细胞及绒毛间质细胞核呈棕黄色，阳性细胞数＞30%判定为（+）；P53和Ki-67阳性定位于细胞滋养叶细胞核呈棕黄色，阳性细胞数＜10%为（—），11%--30%为（+），31%--60%为（++）

1.4统计学分析采用SPSS10.0统计软件进行数据分析，阳性率比较采用X2检验。

2.结果

2.1P5330例完全性葡萄胎中27例P53强阳性，30例部分性葡萄胎中26例阳性，18例水肿性流产中14例阴性，10例正常妊娠均阴性。完全性葡萄胎与部分性葡萄胎和水肿性流产比较，P53阳性率差异显著（P＜0.05），部分性与水肿性流产比较差异较显著（P＜0.05），而水肿性流产与早期妊娠流产比较差异不显著（P＞0.05）。其免疫组化结果与原诊断符合率85%。

2.2P5730例完全性葡萄胎中26例呈阴性，仅4例呈阳性，所有部分性葡萄胎，水肿性流产及正常早期妊娠均呈阳性

2.3Ki-6730例完全性葡萄胎均呈强阳性，30例部分性葡萄胎26例呈阳性，18例水肿性流产10例阳性。10例正常妊娠中9例阳性。阳性率在各组间差异显著。完全性葡萄胎的阳性率明显高于部分性葡萄胎及水肿性流产。

3.讨论

目前我们在葡萄胎病理诊断上主要靠组织学诊断，在显微镜下葡萄胎有以下三个特点：①绒毛因间质高度水肿而增大；②绒毛间质内血管消失，或见少量无功能的毛细血管，内无红细胞；③滋养层细胞有不同程度增生，增生的细胞包括合体细胞滋养层细胞和细胞滋养层细胞，两者以不同比例混合存在，并有轻度异型性。滋养层细胞增生为葡萄胎的最重要特征。完全性葡萄胎的囊泡比较圆，外层多数都是围绕整个囊泡而增生的滋养叶细胞。并且一般不会出现胎儿或者胚胎。部分性葡萄胎看到的滋养细胞增生的相对少，且面积不大，通常也就囊泡的一角，或者其中部分区域有增生现象。由大绒毛和小绒毛组成，这些绒毛具有扇贝形（又称海岸形）的特点，伴有滋养细胞包涵体，可有轻度的滋养细胞增生。并且可有胎儿或者胚胎的出现。

P57为依赖cyclin激酶（CDK）抑制剂和肿瘤抑制基因这个基因是母源等位基因表达，父源等位基因的表达因印记而被抑制，正常胎盘中，＞30%滋养叶细胞，绒毛间质及绒毛中央滋养层细胞岛细胞核表达该抗体，合体滋养层阴性。完全性葡萄胎均由父系DNA产生，P57不表达；部分性水泡状胎块为三倍体，由一个母源性及两个父源性单体基因构成，表达P57，故该抗体可以用于鉴别完全性及不完全性葡萄胎。

P53基因是与肿瘤相关性较强的抑癌基因之一，有野生型和突变型亚型，免疫组化检测为突变型P53，本研究发现完全性葡萄胎P53阳性率为90%，阴性更倾向水肿性流产，Ki-67是目前常用反映细胞增殖标记物与细胞周期相关的核抗原，很好反映肿瘤细胞增殖状态指标。22例完全性葡萄胎均呈阳性，本研究发现其阳性支持完全性葡萄胎，阴性更支持水肿性流产，综上，葡萄胎的鉴别诊断要建立在以显微镜下组织学诊断为根本，结合免疫组化，两者互为补充。同时结合临床HCG值水平变化，做出的病理诊断才能比较客观。P53，P57，Ki-67蛋白在诊断葡萄胎具有很高灵敏度和特异度。P57阴性，P53和Ki-67阳性支持完全性葡萄胎；P57阳性，P53和Ki-67阴性支持水肿性流产；P57阳性，P53和Ki-67阳性支持部分性葡萄胎。