化学发光、时间分辨和酶免三种方法学测定HBsAg

化学发光、时间分辨和酶免三种方法学测定HBsAg

曾嫚妮1陈浩全2

曾嫚妮1陈浩全2

（1广西玉林市第一人民医院检验科广西玉林537000；2广西玉林市骨科医院检验科广西玉林537000）

【中图分类号】R575【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）17-0173-02

【摘要】目的酶联免疫化学发光法、时间分辨荧光免疫法和酶联免疫吸附试验法，探讨这三种方法用于检测乙型肝炎病毒血清标志物的临床意义。方法采用酶联免疫化学发光法（CLIA）、时间分辨荧光免疫法(TRFIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)同时对655例患者HBV血清标本进行HBsAg检测。结果CLIA法检测患者标本乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg阳性率分别为16.64%，TRFIA阳性率分别为16.48%。结论化学发光法测定乙肝病毒血清标志物的相对灵敏度高、特异性好，且为定量检测，可为临床用药疗效观察及乙肝病毒感染的转归提供科学依据。

【关键词】HBV化学发光法时间分辨荧光免疫法酶联免疫吸附试验

1资料与方法

HBV感染呈世界性流行，但不同地区HBV感染的流行强度差异很大。据报道，全球约3.5亿人为慢性HBV感染者，每年约有100万人死于HBV感染所导致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌(HCC)。检测乙肝感染和机体免疫状态的常见指标为乙肝表面抗原（HBsAg）、表面抗体（抗-HBs）、e抗原（HBeAg）、e抗体（抗-HBe）和核心抗体（抗-HBc），即通常所说的“两对半”。表面抗原（HBsAg）为乙肝病毒的膜蛋白，是乙肝病毒感染最直接、最重要的标志物，随着研究的深入和新的抗病毒药物的问世，灵敏度高且又可以进行定量检测的化学发光定量检测试剂盒，满足了检测要求。

1.1一般资料选取我院2011年10～12月门诊患者共655例。乙型肝炎诊断参照2000年中华医学会传染病与寄生虫学会，肝病学分会联全修订的《病毒性肝炎防治方案》慢性乙型肝炎诊断标准[1]。分别取其静脉血5ml并分离血清后，于-20℃保存待测。

1.2仪器与试剂CLIA法使用郑州安图绿科生物工程有限公司生产的，LUMO化学发光检测仪及配套试剂检测HBV-M定量；TRFIA法使用上海新波生产的Anytest2000型时间分辨荧光免疫检测仪及配套试剂；ELISA法使用上海科华生物药业技术有限公司提供的试剂，应用郑州安图绿科生物工程有限公司生产的PHOMO酶标仪检测HBV-M定性。

1.3检测方法同时采用CLIA和TRFIA严格按照操作说明对655份标本的HBV-M进行检测。CLIA设定乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)≥0.15ng/ml。TRFIA和ELISA法阳性判定标准按说明书和作业指导书的规定进行。

1.4统计学处理应用SPSS17.0统计软件进行分析，CLIA和TRFIA不同组别计数资料比较，采用配对计数资料χ2检验法，以P<0.05为有统计学意义。

虽然统计学计算显示无显著差异，但通过五项标志物的模式分析，仍需要用ELISA测定不符标本。

2结果

CLIA法检测患者标本HBsAg阳性率分别为16.64%。TRFIA法检测患者标本HBsAg阳性率分别为16.48%。x2值通过校正为0，P>0.05，显示两组数据无显著差异，详见表1。

表1

CLIA合计+-

HBsAg+1062108

TRFIA-3544547

合计109546655

x20

P>0.05

结果显示TRFIA法检测的HBsAg阳性率略高于CLIA法，但通过模式分析，TRFIA都为少见或罕见模式，使用ELISA两步法测定TRFIA与CLIA不符的标本。ELISA结果与CLIA一致。详见表2：

表2CLIA、TRFIA、ELISA三种方法学测定不符血清

浓度值模式OD值

TRFIACLIATRFIACLIAELISAS/CO

1#0.150.224.51.4.50.3513.05

2#0.198.964.51.4.53.12227.14

3#0.660.031.2.4.52.4.50.0110.09

4#0.8210单1单50.0150.13

5#0.247.424.51.4.53.11427.08

2.1模式

模式数量比例

TRFIACLIATRFIACLIA

1.3100.15%0.00%

1.50100.00%1.53%

1.3.530294.58%4.43%

1.4.5696310.53%9.31%

1.2.3.5100.15%0.00%

1.2.4.5320.46%0.31%

单1100.15%0.31%

合计655655//

3讨论

化学发光免疫分析技术配套全自动加样、检测装置，能提供稳定均一的试验条件，避免加样误差，具有较高的特异性和灵敏度。并且待测物的浓度计算，是根据已知的标准品标示浓度来测定。化学发光作为一种新型检测方法，具有线性范围宽，信号持续时间长，准确性高等特点。宽的检测限使得低浓度的HBsAg也能被检出，而且CLIA对于HBsAg的检测灵敏度可达0.1IU/ml，甚至更低，低浓度的HBsAg是乙肝病毒早期诊断的重要指标，高的灵敏度能够缩短窗口期，使患者能够尽早接受治疗。CLIA定量测定乙肝病毒血清标志物给临床提供了量化指标，在监测病毒复制，评价拉米夫定等核苷类药物的治疗效果，监测应用alpha-干扰素治疗病人的乙肝病毒复制，治疗慢性乙肝病人的预后进行预测，指导肝移植病人免疫球蛋白的使用剂量，等方面发挥着极为重要的作用。

ELISA是以酶标记的抗原或抗体为主要试剂的标记免疫技术中最常用的一种技术，此方法简便易操作，并且经过强制规定，延长反应时间后，ELISA法的灵敏度相比以前有了显著提升。但是由于吸光度范围的局限，ELISA只能定性检测标本，测定范围受到一定限制。

TRFIA采用镧系元素螯合物为示踪物，用时间分辨荧光分折仪测定免疫反应产物的荧光强度[2]。环境中的尘埃粒子、金属粒子会对实验结果产生严重的影响。TRFIA对于HBsAg的检测下限偏低，使得出现过多的单HBsAg模式标本，给临床判断造成一定的干扰。

化学发光是一种快速准确的定量检测方法，在临床上对HBV感染后病情的转归以及药物疗效的评估具有重要的指导意义[3]。本研究三种方法检测HBsAg结果显示化学发光法检测的灵敏度、特异性符合率最好。同时说明CLIA法在特异性、灵敏度、准确性(阴、阳性预示值)、可靠性方面要优于TRFIA法。

参考文献

[1］中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案(试行)[J].中华传染病杂志，2001，19(8):55－56.

[2］覃小梅.时间分辨荧光免疫法定量检测乙肝病毒血清临床研究标志物的临床意义[J].临床和实验医学杂志，2011，10（10）:775.

[3］胡达拜尔迪.国产化学发光表面抗原诊断试剂亚型检测评估[J].国际检验医学杂志，2010，31（12）：1478.