降糖补气胶囊的质量标准研究

降糖补气胶囊的质量标准研究

夏德豪马灵丽罗学科

湖南省邵阳市药品不良反应监测中心湖南邵阳422001

【摘要】目的：建立并分析降糖补气胶囊的质量标准。方法：采用TLC法对葛根、黄芪、当归进行定性分析；采用HPLC法测定葛根中葛根素的含量。结果：TLC图谱斑点清晰，阴性样品无干扰；葛根素在0.092-1.846μg范围内线性关系良好（r=0.9999，n=6），平均回收率99.63%，RSD为0.96%（n=9）。结论：该方法专属强，灵敏度高，重现性好，可用于降糖补气胶囊的质量控制。

【关键词】降糖补气胶囊；葛根素；薄层色谱法；高效液相色谱法

降糖补气胶囊为邵阳市中西医结合医院院内自制制剂，基础方包括葛根、黄芪、当归等，方内包括7味中药，其功效在于降糖活血、气血双补。用于糖尿病等，多年实践证实具有良好疗效[1]。加强制剂药物质量控制，本实验选择方中葛根、黄芩及当归作为研究对象，经薄层色谱法、HPLC对有效成分分别鉴定，报道如下。

1仪器与试剂

本次研究主要使用仪器及试剂主要包括：（1）Waters1525型高效液相色谱仪：①1525泵。②2996紫外检测器；③1500柱温箱，④717自动进样器，⑤AG-135型电子天平（梅特勒-托利多上海有限公司）。对照品：（1）葛根素（批号为110752-201511，供含量测定用），（2）黄芪甲苷（批号为110781-201512），（3）当归（批号为120927-201513）供应处中国药品生制品检定院提供；药品来源：降糖补气胶囊（邵阳市中西医结合医院自制）；硅胶G来源：青岛海洋化工厂；甲醇→色谱纯；水→重蒸馏水。

2方法与结果

2.1TLC鉴别

葛根鉴别，取5g，研细后，与石油醚（60～90℃）30ml混合，经超声10min进行滤过处理，与乙醇30ml混合，经超声处理10min，滤过处置，并将其滤液蒸干，而获得的残渣则需加乙醇1ml进行溶解，此为供试品溶液，供实验用。取方中除葛根外的其他药材按照常规方法制成阴性样品、溶液。另取葛根素，与乙醇混合，制成1ml：1mg溶液，即对照品。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，取上述三种溶液（10μl），置于硅胶H薄层板上，其粘合剂为羧甲基纤维素钠，展开剂为三氯甲烷－甲醇-水（7：2.5：0.25）[1]，开展开，取出，晾干。检测365nm，结果显示供试品与对照品色谱相应的位置上，阳性显示同色荧光点，无阴性显示。（见图1A）。

黄芪5g，研细后与甲醇50ml混合，加热回流60min，经滤过挥干后，残渣与水混合50ml，溶解后提取3次，合成正丁醇液（30ml），与1%的氢氧化钠溶液混合2次，以正丁醇饱和的水将其洗至中性，蒸干正丁醇液，+甲醇1ml；其他处方药材，制成阴性样品、溶液。取黄芪甲苷，+甲醇1ml：1.0mg溶液，照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，取上述三种溶液（10μl），置于硅胶H薄层板上，其粘合剂为羧甲基纤维素钠，展开剂为三氯甲烷－甲醇-水（7：2.5：0.25）[1]，开展开，取出，晾干。检测365nm，结果显示供试品与对照品色谱相应的位置上，阳性显示同色荧光点，无阴性显示。（见图1B）。

当归5g，研细乙醚提取2次，30ml/次，与乙醚液混合，蒸干，残渣+乙酸乙酯，作为供试品溶液。其他药材取50ml同发制成阴性样品溶液。当归1g+乙醚10ml，经超声震荡10min，滤过蒸干，+乙酸乙酯1ml溶解，此为对照溶液。经薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，置于紫外光灯（365nm）下检测。结果显示供试品与对照品色谱相应的位置上，阳性显示同色荧光点，无阴性显示。（见图1C）。

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ABC

1.阴性对照品溶液2.对照品（对照药材）溶液3-5.供试品溶液

A.葛根B.黄芪C.当归

图1层色谱图

2.2含量测定

2.2.1谱条件

（1）色谱柱KromasilC18（4.6mm×250mm，5μm）；（2）流动相为乙腈－甲醇－0.1%磷酸溶液（10：5：85），检测波长：250nm[2]；（3）流速1.0mL?min-1；（4）进样量10μL；（5）柱温：35℃。

2.2.2溶液制备

对照品溶液制备精密称取葛根素11.54mg，将其放入25ml量瓶内，与甲醇混合，并将其稀释，直至抵达刻度为止，再精密吸取20ml，将其放入100ml量瓶内，与甲醇混合，并将其稀释，直至刻度为止，此为对照品（内容液浓度为0.09232mg/ml）[3]。

供试品溶液制备取供试品10粒，经测量后其重量为5.0211g，再次精密（0.5026g），将其送入100ml量瓶内，与甲醇70ml混合，经超声震荡处置（功率250W，频率50kHz）没持续30min，待其冷却，加甲醇混合，直至抵挡刻度为止，震荡摇匀，滤过，此为供试品溶液备用[4]。

阴性对照溶液制备取除葛根外的其他处方量药材，按照常规方法制成无葛根阴性样品、阴性对照溶液。

2.2.3方法学考察

系统适用性、阴性干扰实验：

对照品/阴性对照品，以及供试品溶液各精密吸取10μL，将三种溶液注入液相色谱仪，并测定，结果显示葛根素、葛根外其他组分，二者色谱峰达到基线分离标准，且相邻峰分离度超过1.5，这表明按葛根素峰值4000以上。供试品/对照品溶液可在色谱峰相应位置上检出其色谱峰，阴性对照/对照品溶液则无法在色谱峰相应的位置检出色谱峰，这表明阴性对照品无法测定产生干扰（见图2）

ABC

A.对照品溶液B.阴性对照品溶液C.供试品溶液

图2高效液相色谱图

线性关系考察精密获取浓度为0.09232mg.ml-1的葛根素对照品溶液，分别以不同浓度（1、2、5、10、15、20μl）依次注入色谱仪，测定并计算峰面积，面积图横坐标对照品质量浓度，其纵坐标则设置为峰面积积分值，绘制ROC曲线，而相应的回归方程则为A=4.35×106C+2.38×104，r=0.9999（n=6）。这表明葛根素进样量范围0.092-1.846μg，并在此范围内与峰面积积分值呈现良好线性关系。

精密度考察取葛根素对照品溶液（相同质量浓度），连续进样5次测定，结果显示，其测定后获得的峰面积积分值为229823，而RSD则为0.82%（n=5），这显示表明次测定方法精密度良好。

稳定性试验精密吸取相同供试品，每个供试品溶液10μL，分别在不同时间点进样（1/2/4/6/8/12/24h），测定后取平均值，结果显示葛根素峰面积积分（平均值）为226925，而RSD结果为0.91%（n=8），这表明供试品溶液于24h内稳定性较好。

重现性试验取葛根素同一样品5份（批号为20160901），并测量平均含量为1.58mg.粒-1，而RSD则为1.02%（n=5），这表明该方法具备良好重现性。

加样回收率试验取已知含量的样品（葛根素含量为1.58mg.粒-1，平均粒重0.5021g）9份0.50g/份，精密称定后，将其送入50ml量瓶内，加入对照品溶液（0.162mg.ml-1）8/10/12ml，并按照常规方法制备、测定含量后，计算回收率。

样品测定取对照品/供试品溶液各10μl，观察并记录色谱图，按照外标法计算葛根素含量。结果显示，葛根素（源自批号为20160901，20160902，20190903供试品）含量平均值1.58，2.56，2.33粒-1（n=3）。

3讨论

本文中采用薄层色谱法对葛根、川芎、黄芪进行分别检测并及鉴定，结果显示本次试验具备较强专属性，而阴性溶液对其无任何干扰。同时经HPLC法测定葛根素含量（此为葛根主要有效成分），提示可有效对产品质量进行控制。

在葛根素含量测定试验中，经50/95%乙醇对实验对供试品（20160901）溶液进行提取、持续60min，从而满足测定葛根素条件，测定含量结果为（mg.粒-1）1.43、1.52、1.57；另选用95%/50%乙醇以及甲醇，经超声处置（功率250W，频率50kHz）持续20分钟后；同时检测葛根素，其含量测试结果为1.45、1.52、1.59mg?粒-1；另用甲醇分别超声提取10/20/60min；测定结果显示其含量为1.42、1.57、1.56mg?粒-1；测定结果显示利用甲醇作为试验溶剂，而超声提取时长为20分钟，此时提取效果相对较好。

该质量标准方法简单，但具备良好专属性，而且重现性良好，可作为控制该制剂质量的方法。

参考文献：

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2010：312.

[2]李红琴，齐莉莎，钱一帆.高效液相色谱法测定人参补气胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量[J].中国中医药信息杂志，2013，20（2）：62-64.

[3]周晶.薄层扫描法测定六味补气胶囊中黄芪甲苷的含量[J].安徽医药，2013，17（1）：37-38.

[4]王成阳，干磊，季乔雪，等.中药六味补气胶囊对COPD肺气虚证预防作用的机制研究[C]//中华中医药学会内科分会学术发展论坛.2015.