DPPH法对红景天的发酵条件的筛选

DPPH法对红景天的发酵条件的筛选

潘立东崔香淑

潘立东崔香淑

（延边大学卫生毒理教研室吉林延边133000）

【摘要】目的探讨发酵红景天提取物清除1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH）自由基能力的最佳发酵条件。方法实验用活性酵母发酵红景天后60%乙醇提取，并用80%乙醇去除鞣质、蛋白质和多糖，减压浓缩，采用DPPH自由基能力的方法比较不同发酵条件下的红景天提取物对DPPH自由基的清除能力。结果发酵红景天提取物清除DPPH自由基能力的最佳发酵条件为酵母含量为总质量0.5%、葡萄糖含量为总质量0.5%和发酵时间24h。

【关键词】红景天发酵条件1,1-二苯基苦基苯肼自由基

【中图分类号】R927【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2014）09-0375-02

发酵是指利用生物体（包括微生物、植物细胞等）的代谢功能，使有机物分解的生物化学反应过程。以适宜的培养基为营养，通过微生物的生长代谢和生命活动产生丰富的次生代谢产物。[1]中草药经发酵、生化转化后，其有效成分能被充分分离、提取；经生化转化后更具有生物活性，在中药现代化过程中具有重要地位。

人体内在氧的利用过程中，会因各种内在或外在的因素而产生各种活性氧和自由基。大量研究表明活性氧和自由基攻击人体细胞组织，可引发心脑血管、肿瘤等多种疾病，并促进机体的衰老。[2]摄食具有抗氧化作用的物质可有效预防和治疗有关疾病。[3]由于天然抗氧化剂比人工合成的抗氧化剂安全，因此越来越受到人们的关注。[4]

我国红景天属植物约占世界红景天种资源总量的80%。分布广泛，一般生长在高寒、干燥、缺氧、强紫外线照射、昼夜温差大的高海拔地带，具有极强的环境适应性和顽强的生命力。因其生长环境恶劣，使其具有抗氧化、抗疲劳、抗辐射、抗衰老、抗病毒，调节神经系统、心脑血管系统和提高免疫力等功效。[5][6]近年来国内外对红景天进行化学成分分析研究先后分离40多种化学物质。[7]由此可见，红景天在药用和功能性食品开发方面具有广阔的发展前景。本文探讨红景天抗氧化作用最佳提取工艺，为红景天药用和功能性食品开发方面提高生物利用度提供依据。

1材料与方法

1.1材料、主要试剂及仪器

红景天栽培药材由延边红景天药材基地提供。粉碎，过60目筛备用。DPPH为WAKO公司产品，无水乙醇等试剂均为国产分析纯。DL-180超声仪为浙江产，DG5033A型酶联免疫检测仪：南京华东电子集团医疗装备有限责任公司，JD-300型电子天平：沈阳龙腾电子称量仪器有限公司，TG-328B型分析天平：上海天平仪器厂，恒温箱：上海跃进医疗器械一厂。

1.2提取物的制备

准确称取一定量的红景天粉与三角烧瓶中，加入一定比例的酵母、葡萄糖，加入适量的双蒸水，放入37℃恒温箱中发酵的一定的时间后按药材与60%乙醇1∶8比例超声提取30min，提取2次，合并提取液，浓缩至一定量，用80%乙醇沉淀，上清液减压浓缩定容。

1.3DPPH自由基标准溶液的配置与清除率的计算

DPPH自由基标准溶液的配置：准确称取DPPH试剂0.0256g，用无水乙醇定容到100mL，4℃冷藏备用，使用前无水乙醇稀释10倍使用。

DPPH自由基清除率的计算：清除率按下面公式计算，其中Ai、Aj和A0以无水乙醇作为空白，在波长490nm处测定吸光度，每组平行3次，取平均值。

公式中：A0为0.1mLDPPH自由基溶液+0.1mL无水乙醇的吸光值；Ai为0.1mLDPPH自由基溶液+0.1mL样品的吸光值；Aj为0.1mL无水乙醇+0.1mL样品的吸光值。

1.4提取物清除DPPH自由基的测定方法

分别配置质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6和0.8mg?mL-1的发酵红景天提取物溶液作为待测液，吸取0.1mL待测液，加入96孔板中，再加入0.1mLDPPH自由基溶液，反应30min，测定吸光度A值。

1.5提取物清除DPPH自由基能力评价

评价抗氧化剂清除自由基的能力，经常选择自由基清除率达到50%是抗氧化及的质量浓度作为评价标准，即半数抑制浓度IC50值。IC50值越小，表示抗氧化剂清除自由基的能力越强，而IC50值越大，则表示抗氧化剂的清除自由基能力越弱。根据清除率公式计算出发酵红景天对DPPH自由基的清除率，以样品的质量浓度对DPPH自由基的清除率作图，得到清除率曲线，计算出IC50值。

2结果与分析

对酵母、葡萄糖和发酵时间采用三因素三水平正交试验，从而选择最佳提取条件。

表1发酵红景天提取正交试验因素水平表

Table1Factorsandlevelsfororthogonalarraydesign

由表2结果和方差分析可以看出，发酵红景天提取效果最好的是A1B2C3一组，即酵母含量为总质量0.5%、葡萄糖含量为总质量0.5%和发酵时间为24h。各因素对提取效果影响由大到小依次为A＞B＞C，即酵母含量＞葡萄糖含量＞发酵时间。

表2发酵红景天提取的L9(34)正交试验设计及结果

Table2Orthogonalarraydesignandresults

3结论

通过正交试验得出乙醇提取发酵红景天最佳发酵条件为酵母含量为总质量0.5%、葡萄糖含量为总质量0.5%和发酵时间为24h。

参考文献

[1]秦琴.发酵在中药研究中的应用概况《中国西部科技》.2010年21期.

[2]王福海,黄成华活性氧自由基的研究进展《广州化工》.2013年16期.

[3]黄翠丽,刘赛扇贝的生理活性物质和药用价值《中国海洋药物》2001年02期.

[4]孙亚男天然抗氧化剂在油脂中应用的研究进展《食品工程》.2011年03期.

[5]李凤林红景天苷药理作用的研究现状《现代食品科技》.2013年04期.

[6]刘明成,张得钧红景天药理作用研究进展《亚太传统医药》.2013年06期.

[7]朱曼萍大花红景天的化学成分及质量研究《北京中医药大学》.2007年.