溶血和带血细胞标本对HBsAg结果的影响研究

溶血和带血细胞标本对HBsAg结果的影响研究

柳富成

柳富成（宁夏固原市人民医院756000）

【摘要】目的：探讨溶血标本对HBsAg结果的影响并提出针对性预防措施。方法：选择我院30例HBsAg（+）和30例HBsAg（—）临床资料作为研究对象，分别记为观察组及对照组，两组标本均进行常规检测及溶血后检测，观察溶血对HBsAg检测结果的影响。结果：观察组两次检测均为（+），对照组非溶血检测为（—），溶血检测HBsAg（+）10例，HBsAg（—）20例。结论：标本溶血后对HBsAg（+）检测结果无影响，但是会导致HBsAg（—）出现假阳性，溶血标本不宜进行HBsAg检测。

【关键词】标本检测；溶血；乙肝表面抗原；ELISA

【中图分类号】R446.1【文献标识码】B【文章编号】1007-8231（2011）11-1877-01

乙肝表面抗原（HBsAg）检测是诊断乙型肝炎的主要指标，随着检验技术的不断发展酶联免疫法因其简便，灵敏度高，不需要特殊设备，被广泛应用，虽然检测时标本要求不能溶血，但是在实际工作中［1]，会遇到各种原因造成标本溶血，溶血标本中非特异性物质对试验结果会造成一定的影响。本文介绍溶血标本对HBsAg检测结果的影响。

1资料和方法

1.1一般资料

选择我院30例HBsAg（+）和30例HBsAg（—）临床资料作为研究对象，分别记为观察组及对照组，观察组男性19例，女性11例，年龄在19~56岁之间，平均35.5±4.4岁；对照组男性20例，女性10例，年龄在20~54岁之间，平均34.4±4.8岁。

1.2方法酶联免疫试剂盒由浙江艾康生物技术有限公司提供，制备溶血标本，受检血清置于低温冰箱（—40℃）冷冻20min，取出融化以3000r/min离心10min，分离溶血血清。反应条每孔加入待检测标本50μl，设阴阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照或阳性对照各1滴，设置空白对照1孔，每孔加入酶结合物1滴，空白对照除外，摇匀，封板，置于37℃避光孵化30min，弃孔内液体，洗板5次晾干，每孔加显色剂A、B各1低，置于37℃避光孵育15min，目测比色，肉眼观察无色为HBsAg（—），显蓝色为HBsAg（+）［2]。

1.3统计学处理使用SPSS13．0对各项资料进行统计分析，各项参数以均值±标准差(x±s)表示，使用X2,t检验，P<0．05为差异有统计学意义。

2结果

两组标本检测结果见表1

表1两组标本检测结果

观察组两次检测均为（+），对照组非溶血检测为（-），溶血检测HBsAg（+）10例，HBsAg（-）20例。

3讨论

用ELISA检测HBsAg有快速简便、特异性强、灵敏度高等优点，是各级实验室常用的试验方法，溶血标本应用ELISA法检测易产生假阳性，其原因可能为溶血血清中含有过氧化酶物质，红细胞或血红蛋白中亚铁血红素，HBsAg产生假阳性，溶血的原因较多［3]，主要是体外溶血及体内溶血两种，体内溶血是物理因素造成的，如人工心脏瓣膜或大血管手术后，生物因素如恶性疟疾、药物毒性反应引起的，体外溶血是代谢性因素如遗传性疾病引起血细胞脆性增加、机械性破坏、冷冻、血液接触表面活性剂等［4]。此外采集过程中注射器或容器不干燥、不清洁，淤血时间过久，抽血消毒时消毒剂未擦干就采集血液标本，出血速度过快等。

在本组患者中HBsAg（-）溶血患者出现10例假阳性，其原因可能为溶血血清中含有过氧化物酶物质，血红蛋白亚铁血红素、红细胞与聚乙烯孔被抗原或抗体结合［5]，在洗涤过程中不能完全被洗涤，谷胱甘肽等过氧化物酶有明显相关性，谷胱甘肽广泛存在于人体组织及细胞中，发生溶血时，过氧化物酶进入血浆，大量吸附在细胞碎片及纤维蛋白上［6]，增加了洗涤的难度，可使过氧化氢释放出原生态氧，催化底物，甲苯胺生产可溶性物质显色，易出现假阳性。检测一般采用一步检测法，往往难以洗脱残留的过氧化物酶催化底物四甲基联苯胺显蓝色，并产生假阳性，有研究表明对标本进行二部法检测［7]，首先将血清清洗掉，残留的过氧化物酶含量极微，温育过程中不会与酶结合物所含的抗体、抗原结合，经过两次洗涤，降低了残留的可能性，保证检测结果准确。溶血标本在临床检验中一般不进行检测，要求退回重新采集标本，增加了患者的痛苦，延长了检验时间。溶血标本能使未感染乙型肝炎病毒的健康患者出现假阳性，增加了临床诊断的困难［8]，同时也给患者带来很大的心理压力。为避免溶血对HBsAg检测结果的影响，要采取积极的预防措施，医务工作者熟练操作，避免人为因素导致溶血的发生，要从标本采集、检测过程、试剂选取、设备选取、检测方法的选择都要做要一丝不苟，龙宪和等采用二部法操作能排除溶血释放的Hb对HBsAg检测影响说明洗板质量指ELISA检测中有重要作用。对于乙肝表面抗原阳性的溶血标本，其结果一定要慎重，务必做好准确无误，否则会给患者带来极大的痛苦，造成精神压力。标本溶血后对HBsAg（+）检测结果无影响，但是会导致HBsAg（-）出现假阳性，溶血标本不宜进行HBsAg检测。

参考文献

［1］孙正伟，薛瑞贤，王键．酶联免疫法一步法检测乙肝表面抗原前带现象的初步探讨［J]．中华医学检验杂志，2009，2(1)：25．

［2]张小洁，刘建芝．真空采血标本溶血原因分析及预防措施［J]．护士进修杂志，2008，16(3)：11．

［3]许彬，朱虎定．酶联免疫法检测乙肝表面抗原影响因素的探讨［J]．临床检验杂志，2007，18(10)：20．

［4]陆仁飞．溶血标本对乙型肝炎病毒表面抗原检测结果的影响［J]．检验医学与临床，2008，5(17)：1065—1066．

［5]周峰，宋忠琴．不同程度的溶血标本和带血球标本对酶联免疫吸附试验一步法检测乙肝病毒血清标志物的影响［J]．实用医技杂志，2006，13(22)：3966—3967．

［6]牛利茹，毕亚丽，李金伟．血标本溶血对检验结果的影响及防范对策［J]．临床误诊误治，2005，18(9)：691—692．

［7]岳献荣，孟毓．酶联免疫吸附试验检测各环节中应注意的问题［J]．中国临床研究，2010，23(2)：150—151．

［8]李穗芬．标本溶血对乙肝表面抗原的影响［J]．广州医药，2003，32(5)：65．