高良姜有效成分测定方法的改良

高良姜有效成分测定方法的改良

马月琴

马月琴

（宁夏固原市药品检验所756000）

【摘要】目的：建立评价高良姜药材质量的含量测定方法；方法：采用DiamonsilTMC18柱（4.6mm×200mm，5μm），流动相为乙腈0.2％磷酸溶液，梯度洗脱，流速1mL/min，柱温30℃，检测波长为220nm；结果：高良姜素、山柰素4′甲醚、5羟基7(4羟基3甲氧苯基）1苯3庚酮、5羟基1,7双苯3庚酮的线性范围分别为0.267～1.328μg、0.1034～0.517μg、0.3108～1.5540μg、0.2473～1.236μg，平均回收率分别为100.9％、97.0％、96.8％、99.0％，RSD值分别为1.7％、1.4％、1.8％、0.6％；结论：该方法准确、简便，具有良好的重复性和稳定性，可用于高良姜药材的质量控制。

【关键词】高良姜；高效液相色谱法；黄酮；庚烷；质量控制

【中图分类号】R927.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）27-0028-02

高良姜为姜科山姜属植物高良姜的干燥根茎，其性热味辛，归脾、胃经,具温胃散寒、消食止痛的功效，用于脘腹冷痛、胃寒呕吐、嗳气吞酸等［1］。高良姜黄酮和庚烷均具有调节钙离子释放、抗氧化应激、抗炎、调节免疫、抗病原微生物、抑制平滑肌刺激收缩、镇痛止呕等药理作用［2］。高良姜含有十多种黄酮类成分［3］和十多种二苯基庚烷类物质，其中高良姜素、山柰素4′甲醚、5羟基7(4羟基3甲氧苯基)1苯3庚酮(DPHA)、5羟基1,7双苯3庚酮(DPHC)含量比较高，因此本文选择这4个成分作为监控指标，采用HPLC法同时测定不同批号和来源的高良姜药材中的以上的2种黄酮类成分和2种庚烷类成分的含量，为全面准确控制药材质量提供了可行的依据。

一、仪器、试剂与材料

Waters2695/2996高效液相色谱仪，Empower工作站；BP210D型电子分析天平(德国Sartorius公司)；高良姜素对照品、山柰素4′甲醚对照品、DPHA、DPHC对照品均为自制，经UV、NMR、MS确定化合物结构，以HPLC法按面积归一化法计，质量分数>98.0％；乙腈(色谱纯)；超纯水；高良姜药材为各地收集的市售产品。

二、方法与结果

1.溶液的制备

1.1对照品溶液的制备

分别精密称取高良姜素、山柰素4′甲醚、DPHA、DPHB、DPHC对照品，加甲醇制成每1mL含1.068、0.414、1.243、0.248、0.989mg的对照品储备液。分别精密量取上述对照品储备液各1mL，置20mL容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液。

1.2供试品溶液的制备

取不同批号的高良姜药材细粉约0.2g，精密称定，加甲醇约40mL回流提取2h，放冷，过滤，滤液加甲醇定容至50mL。摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.色谱条件

高良姜药材中4种有效成分的含量测定色谱柱：DiamonsilTMC18色谱柱(200mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈（A）0.2％磷酸水(B)，梯度洗脱［0～30min，A∶B（39∶42）；30～35min，A∶B（45∶55）］，检测波长：220nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃，进样量：20μL。

3.系统适应性试验

分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20μL注入液相色谱仪，计算理论板数及分离度。结果见表1

表1系统适应性试验结果

8.样品测定

对11批样品按上述方法进行含量测定，以外标法计算高良姜中各成分的含量。

三、讨论

1.提取方法的选择

比较了超声提取法、索氏提取法和回流提取法对药材中各成分的提取效果，并对不同的提取条件进行优化，结果发现回流提取法对两类成分的提取效果最好，操作简单，因此选用回流提取法提取高良姜药材制备供试品溶液。

2.测定波长的选择

PAD检测器全波长扫描发现，DPHA在220nm和285nm均有较大吸收峰，但是DPHC仅在220nm处有最大吸收峰，高良姜素和山柰素4′甲醚在267nm和360nm处有较大吸收峰，在220nm处也有末端吸收。所以选择220nm作为测定波长，在无PAD检测器的条件下也可以应用该法，便于推广。

3.色谱柱和流动相的选择

比较了DiomonsilTMC18柱、WatersTMC18柱和XterrexTMC18柱3种色谱柱的保留行为，发现WatersTMC18柱保留时间过长，XterrexTMC18柱对黄酮类物质存在严重的拖尾现象，而DiomonsilTMC18柱适用范围广，分离效果好，保留时间相对较短，所以选择DiomonsilTMC18柱。同时考察了甲醇水、乙腈水、乙腈磷酸溶液、甲醇磷酸溶液体系等，最终选用0.2％磷酸溶液乙腈体系进行梯度洗脱，取得较好峰形和较高的理论塔板数，效果满意。

4.指标成分的确定

7（4′羟基3′甲基苯基）1苯庚基4烯3酮（DPHB）是高良姜中二苯基庚烷类物质中的一种成分，药理作用与DPHA和DPHC的药理作用相似，但因其含量较低，不作为考察指标，所以未进行该成分的方法学考察和药材中的含量测定。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005年版一部［S］.北京：化学工业出版社，2005:212.

[2]吕玮,蒋伶活.高良姜的化学成分及药理作用［J］.药学专论，2006,15(3):19-20.

[3]周漩,梁汉明，冯毅凡.高良姜薄层色谱特定(指纹)图谱的研究［J］.药物分析杂志，2005，25(8)：916-919.