疏肝和胃胶囊的质量标准研究

疏肝和胃胶囊的质量标准研究

张建萍

张建萍（郑州市骨科医院河南郑州450052）

【摘要】目的建立舒肝和胃胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱法对枳实、白芍进行鉴别；采用高效液相色谱法同时测定其中甘草苷和甘草酸铵。结果薄层色谱鉴别法专属性强，阴性无干扰。甘草苷、甘草酸铵分别在0.0826～0.7021μg，0.1872～1.5912μg范围中线性关系良好。平均加样回收率分别为99.97%（RSD＝1.74%），99.13%（RSD＝2.10%）。结论本法结果准确，灵敏度高，可较好地控制本品的质量。

【关键词】舒肝和胃胶囊甘草苷甘草酸薄层色谱高效液相色谱

【中图分类号】R927.11【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）46-0052-02

舒肝和胃胶囊由枳实、白芍、甘草、柴胡、黄芩等药物组成，有疏肝解郁，降逆制酸之功效，主要用于反胃，吐酸等症。白芍中的芍药苷具有舒张胃肠平滑肌[1]的作用，且对由于紧张刺激而诱发的大鼠消化溃疡有明显抑制作用。本品中甘草具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗变态反应、免疫调节等作用，又无明显副作用[2]，为更好地控制产品质量，本文建立了白芍和枳实的薄层色谱鉴别方法及甘草中甘草苷和甘草酸的含量测定方法。

1仪器与试药

ShimadzuLC-10ATvp型高效液相色谱仪（检测器SPD-M10Avp），工作站CLASS-VP；Sartoriuscp225D型电子天平；芍药苷对照品（批号：0833-9501，含量测定用），枳实对照药材（批号：120936-201005，TLC法鉴别用），甘草苷对照品（批号：111610-200604，含量测定用），甘草酸铵对照品（批号：110731-200615，含量测定用）均来源于中国药品生物制品鉴定所。舒肝和胃胶囊样品（郑州市骨科医院制剂室提供，批号：110616，110707，110821）。HPLC用甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯，水为纯化水。

2方法与结果

2.1舒肝和胃胶囊的薄层色谱鉴别

2.1.1白芍取本品10g，加乙醇40mL，振摇提取30min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。取缺白芍的阴性样品，同法制阴性对照溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1mL含1mg溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40：5：20:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝紫色斑点。而阴性对照无相应斑点。见图1。

图1白芍TLC

1缺白芍阴性对照；2芍药苷对照品；3，4，5供试品

2.1.2枳实取枳实对照药材粉末0.5g，加甲醇15mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，用甲醇2mL溶解，得对照药材溶液。取缺枳实的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。取本品5g,加甲醇30mL,超声处理30min，滤过，蒸干，残渣加甲醇1mL,即供试品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各2μL，分别点于同一用0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶Ｇ薄层板上，以醋酸乙酯－甲醇－水(100:17:13)为展开剂，展开约3cm，取出，晾干，再以甲苯－醋酸乙酯－甲酸－水(20:10:1:1)的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。而阴性对照无相应斑点。见图2。

图2枳实TLC

1枳实对照药材；2缺枳实阴性对照样品；3，4，5供试品

2.2舒肝和胃胶囊中甘草苷和甘草酸铵的含量

2.2.1色谱条件色谱柱：AgilentZORBAXXDB-C18柱（4.6×150mm，5?m）；采用流动相0.05%磷酸溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0～8min，81%A；8～35min，81%～50%A；35～36min，50%～0A；36～40min，0～81%A，流速：1.0mL/min；柱温35℃；检测波长为237nm)[3]。

2.2.2对照品溶液的制备取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1mL各含0.02mg、0.2mg的溶液，即得。

2.2.3供试品溶液的制备取本品粉末约2g，精密称定，置50mL容量瓶中,加入甲醇约45mL，称量重量,超声30min，放冷,用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4线性关系的考察精密吸取甘草苷对照品溶液（0.0413mg/mL）2、5、8、11、14、17μL，甘草酸铵对照品溶液（0.0936mg/mL）2、5、8、11、14、17μL，分别注入液相色谱仪，记录峰面积。以含量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。甘草苷和甘草酸铵标准曲线方程分别为Y＝1.79E+06X-17742.5，r=0.9998（n=6）和Y＝5.95E+06X-16798，r=0.9998（n=6）；表明甘草苷和甘草酸铵分别在0.0826～0.7021μg和0.1872～1.5912μg线性关系良好。

2.2.5阴性干扰试验按照工艺制备缺甘草的阴性样品，并照供试品溶液制备项下的方法制成缺甘草的阴性对照溶液。精密吸取甘草苷和甘草酸铵对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪，绘制色谱图(见图3)。结果表明，甘草苷和甘草酸铵的色谱峰与本品其他组分分离良好，阴性无干扰。

图3舒肝和胃胶囊HPLC图

a甘草苷和甘草酸铵对照品，b样品，c阴性对照品1.甘草苷2.甘草酸

2.2.6精密度试验精密吸取同一供试品溶液10μL，重复进样6次，分别测定峰面积。结果甘草苷，甘草酸铵峰面积积分值的RSD分别为0.39%和0.34%。

2.2.7稳定性试验精密吸取同一供试品溶液10μL分别于0、2、4、6、8、10、12h进样，分别测定峰面积。结果甘草苷，甘草酸铵峰面积积分值的RSD分别为2.12%和1.88%。

2.2.8重现性试验精密称取同一批号样品6份，制成6份供试品溶液，分别进样10μL。结果甘草苷，甘草酸铵峰面积积分值的RSD分别为3.49%和2.58%。

2.2.9加样回收率试验精密称取已知含量的样品9份，分别精密加入甘草苷和甘草酸铵对照品，按照供试品溶液的制备方法操作，测定结果见表3，4。

表3甘草苷加样回收率试验结果

2.2.10样品的含量测定取三批样品，分别制成供试品溶液，按照上述色谱条件进行测定，结果甘草苷含量分别为1.12、1.09、1.12mg；甘草酸铵含量分别为2.21，2.16，2.18mg。

3讨论

3.1采用超声提取法对同一批样品提取30、40、50min，测定样品中甘草苷和甘草酸铵的提取率，结果表明三种方法的提取率接近，无显著差异，因此选择较为省时的超声提取30min。

3.2本实验用梯度洗脱的方法同时测定本品中甘草苷和甘草酸铵的含量，大大节省了实验成本和时间。经方法学考察，证明方法准确、灵敏、简便、快速，可作为舒肝和胃胶囊质量控制的主要指标。

参考文献

[1]王浴生.中药药理与应用.2版.北京：人民卫生出版社，1998：346.

[2]吕小华,吴铁,覃冬云.甘草酸对肺纤维化模型大鼠羟脯氨酸、玻璃酸、层粘连蛋白的干预作用[J].中国药房,2008,(25).

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一）部.2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：96