FHIT基因在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达

FHIT基因在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达

张长青修丽娟殷善红李靖王晶

FHIT基因在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达

张长青1修丽娟1殷善红1李靖1王晶2

（1哈尔滨市第五医院150040；2哈尔滨医科大学附属肿瘤医院150040）

【中图分类号】R737.33【文献标识码】B【文章编号】1672-5085(2009)06-0090-02

【摘要】目的检测脆性组氨酸三联体（FHIT）基因在宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌中的表达状况和临床意义。方法采用免疫组化SP法检测70例CIN和60例宫颈癌中FHIT表达，并以正常宫颈组织和慢性宫颈炎症组织共20例作为对照。结果（1）FHIT基因在正常宫颈及慢性炎症宫颈组织中无阴性表达，在CIN组中阴性率为34.3%（P<0.01）。(2)CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组中FHIT阴性率分别为5.0%、38.1%、51.7%，CINⅢ组、CINⅡ组与CINI组比较差异有统计学意义（P<0.01、P<0.05）。（3）宫颈癌组中FHIT阴性率为73.3%，明显高于对照组和CIN组(P<0.01)。结论FHIT基因阴性表达是宫颈癌发生的重要原因。在CIN中FHIT蛋白表达异常可作为高危型CIN筛选的生化指标。免疫组化检测FHIT蛋白是诊断高级别CIN和早期宫颈癌有用的生物学指标。

【关键词】脆性组氨酸三联体基因宫颈上皮内瘤变宫颈癌免疫组化

早期诊断、治疗高危CIN是降低发病率、防治宫颈癌的有效途径。目前临床上缺乏能够反映CIN演进为浸润癌可能的CIN形态学标准和分子标记物。1996年Ohta发现了脆性组氨酸三联体基因（fragilehistidinetriad，FHIT），发现它在多种与外界接触的肿瘤中发生异常，本研究通过免疫组化SP法检测FHIT在宫颈上皮内瘤样病变（CIN）、宫颈癌组织中的表达，希望为宫颈癌的防治提供依据。

1资料与方法

1.1资料

标本选自2002年1月至2008年5月哈尔滨医科大学附属肿瘤医院保存的石蜡包埋组织。宫颈癌组60例，宫颈CIN组70例，8例正常宫颈组织和12例炎症宫颈组织共20例作为对照组。其中CIN组均为官颈锥切或子宫全切标本，CINIII期包括原位癌，对照组是子宫良性病变而行子宫全切的宫颈组织标本。全部标本均经病理学专家再次复查确诊。病例取材前均未进行放化疗或免疫

等特殊治疗。

1.2试剂与方法

兔抗人FHIT多克隆抗体（美国ZYMED公司），过氧化物酶标记的链霉素、卵白素染色试剂盒、DAB显色剂（北京中山生物技术公司）。恒温箱、微波炉、石蜡切片机、显微镜等。蜡块标本均已经中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，石蜡切片机4um切片。

采用免疫组化SP法检测：载玻片经多聚赖氨酸预处理，标本切片脱蜡至水：3%过氧化氢卵育10分钟。柠檬酸盐缓冲液中微波热修复抗原15分钟以暴露抗原位点，自然冷却15分钟。10%正常山羊血清封闭孵育20分钟后倾去。加FHIT一抗工作液，4℃冰箱过夜。PBS冲洗，加二抗生物素工作液，37℃温箱孵育30分钟。PBS冲洗。加三抗辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃温箱孵育30分钟。PBS冲洗。DAB显色8分钟，终止显色反应。苏木素复染，正丁醇脱水。干片后中性树胶封片。实验条件严格一致。以

PBS缓冲液代替一抗做阴性对照。FHIT的阳性对照片为已知FHIT表达阳性的正常乳房组织。

1.3结果判定

FHIT蛋白定位于细胞浆。DAB染色阳性结果：细胞浆有棕黄色颗粒，在400倍显微镜下选10个视野，共计数1000个细胞。参照Greenspan的方法进行全面评估，即包括染色强度和染色范围。FHIT表达的判断标准：(1)根据染色强度：无染色或低度染色(浅黄色)：1分；中度染色(棕黄色)：2分；强染色(棕褐色)：3分。(2)根据染色范围：显色的细胞数占总数比例<10％为1分，10％～50％为2分，>50％为3分。两种得分相乘的积为综合得分，1～3分者是FHIT蛋白减低或缺失，为FHIT阴性，提示FHIT基因表达异常。4～9分为FHIT阳性，即FHIT基因正常表达。由2位病理学专家分别独立阅片，如果某片评估结果不同则重新再评至意见统一。

1.4统计学方法

采用SPSS11.0统计软件包，FHIT与临床各参数间的相关分析及各组间比较运用χ2检验。P<0.05，有统计学意义。

2结果

2.1FHIT蛋白在正常子宫颈组织中的表达

FHIT蛋白定位于正常子宫颈鳞状上皮、子宫颈内膜腺上皮以及淋巴细胞等细胞质中，是呈弥漫性或局灶性分布的棕黄色颗粒。正常宫颈及慢性子宫颈炎组织中FHIT蛋白全部呈强阳性表达，无表达减低或缺失。

2.2FHIT蛋白在CIN组织中的表达

70例CIN组中FHIT阴性率34.3％，与正常子宫颈比较，差异有显著统计学意义，P<0.01。FHIT表达阴性率随CIN级别升高而增加。CINⅡ、CINⅢ分别和CINI级组间比较，差异均有统计学意义（P<0.05、P<0.01），CINI组和正常对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）见表1，

2.3FHIT蛋白在宫颈癌组织中的表达

宫颈癌组中FHIT阴性表达率高于正常对照组（P<0.01），宫颈癌组高于CIN组（P<0.01），宫颈癌组高于CINⅢ组（P<0.05），见表1。其中磷癌组FHIT阴性率高于腺癌组（P<0.01）。1例腺鳞癌FHIT阳性表达。见表1。

表1FHIT基因在子宫颈组织中的表达

分组例数FHIT表达（%）

阴性阳性

对照组200(0.0)20(100.0)

正常子宫颈80(0.0)8(100.0)

慢性子宫颈炎120(0．0)12(100.0)

CIN7024(34.3)▲46(65.7)

CINⅠ201(5.0)19(95.0)

CINⅡ218(38.1)☆13(61.9)

CINⅢ2915(51.7)▲▲14(48.3)

宫颈癌6044(73.3)▲16(26.7)

与对照组比较，▲P<0.01；与CINⅠ组比较，▲▲P<0.01，☆P<0.05；

与宫颈癌组比较，▲▲P<0.05，▲P<0.01；

表2FHIT表达与宫颈癌临床病理参数的关系

临床特征nFHIT表达

阴性（%）阳性（%）P值

临床分期Ⅰ-Ⅱ5137（72.5）14（27.5）>0.05

Ⅲ-Ⅳ97（77.8）2（22.2）

病理类型

鳞癌5041(82.0)9(18.0)▲<0.01

腺癌82（25.0）6（75.0）

其他△21(1/2)1(1/2)

△其他包括腺鳞癌1例、透明细胞癌1例。与腺癌组比较，▲P<0.01；

3讨论

3.1FHIT与宫颈癌发生的关系

宫颈癌自然病程有一个从CINⅡ、CINⅢ到浸润癌的一个连续发展的过程，FHIT基因是抑癌基因，它跨越了人类染色体最常见的脆性部位FRA3B、t（3；8）断裂点及HPV16整合位点。FHIT在3P14.2区域等位基因杂合性丢失在子宫颈癌是频发事件[1]。

本实验中正常组、CIN组、宫颈癌组FHIT蛋白异常表达率分别为0%、34.3％、73.3％，随宫颈CINI、CINⅡ、CINⅢ期级别的增高而FHIT蛋白异常表达率逐渐增加（5.0%、38.1%、51.7%），然而FHIT基因异常表达率并不随宫颈癌临床期别的进展而升高。由此可以推断FHIT基因在宫颈癌前病变阶段就已开始出现异常，FHIT蛋白表达减低和缺失是宫颈癌及癌前病变发生中的早期事件，FHIT异常是宫颈癌的发生的原因之一。这与Butler[2]等的报道一致，Butler推断FHIT异常是宫颈癌发生的原因和始动事件。FHIT在鳞癌组、腺癌组中的异常率分别为82.0%、25%，显示FHIT状况与宫颈癌病理类型相关，提示FHIT基因异常可能与肿瘤的组织起源相关。

3.2FHIT蛋白表达测定的临床应用价值

Terry等[3]报道FHIT异常转录表达与CIN级别渐增关联的。多项研究显示，在癌前病变CINⅡ、CINⅢ及早期宫颈癌阶段，FHIT蛋白表达均出现较高程度的异常率[4]。本实验中随CINⅡ、CINⅢ到浸润癌的发展过程，FHIT表达异常率也逐步升高，两者密切相关，在FHIT蛋白表达的缺失和FHIT异常转录之间有非常强的相关性，FHIT蛋白表达的减低或缺失可以是体现3p区域遗传不稳定性的好指标，应用免疫组化方法发现FHIT蛋白表达异常是反映FHIT基因状况可靠的指标。由此可见，在中高级别CIN中FHIT蛋白的减低或缺失可以作为一个判定其有可能发展为浸润性癌的有用指标，在预示重度CIN恶变潜能中有重要价值，可作为筛查高危CIN的指标。FHTT蛋白的免疫组化检测操作简单，经济、高效，因此有广阔的应用前景。

参考文献

[1]HuangLW，ChaoSL，ChenTJ．ReducedFhitexpressionincervicalcarcinoma：correlationwithtumorprogressionandpoorprognosis[J].GynecolOnco1，2003，90(2):33l-337.

[2]ButlerD，CollinsC，MabrukM，BarryWalshC，LeaderMB，KayEW.DeletionoftheFHITgeneinneoplasticandinvasivecervicallesionsisrelatedtohigh-riskHPVinfectionbutisindependentofhistopathologicalfeatures[J].JPathol，2000，192(4):502-510.

[3]TerryG，HoL，LondesboroughP，CuzickJ.AbnormalFHITexpressionprofilesincervicalintraepithelialneoplastic(CIN)lesions[J].BrJCancer，2002，86(3):376-381.

[4]CampiglioM，BlanchiF，AndrianiF，SOZZIG，TAGLIABUEE，MENARDS，ROZL.DadenosinesasFHIT-NessInstructors[J].JCellPhysiol，2006，208（2）:274-281.