来氟米特对类风湿关节炎患者Th17细胞免疫调节的影响观察

来氟米特对类风湿关节炎患者Th17细胞免疫调节的影响观察

肖汉

肖汉

湖南省益阳中心医院湖南益阳413000

【摘要】目的：探究来氟米特对类风湿关节炎患者Th17细胞免疫调节的影响。方法：选取我院2013年9月-2015年2月期间收治的58例类风湿关节炎患者，并将CD4+T细胞和一定剂量的来氟米特（A771726）以及地塞米松进行一同培养，时间为48小时，选择流式细胞术对其患者的外周Th17/Th来进行检查。并选择荧光递给梁逆转录聚合酶对其相关水平进行最终检测。结果：经检测发现，来氟米特对CD4+T细胞并无显著影响，而地塞米松能够给有效的减少Th17/Th比例。结论：对患者采用地塞米松可以减少Th17细胞的Th中所占据的比例，而来氟米特则对其并不会形成影响。

【关键词】来氟米特；类风湿关节炎；Th17细胞免疫调节

类风湿关节炎主要病变为对称性外周多关节病，是一种自身免疫性疾病，此病的发病机理和T辅助细胞中的17存在直接关系[1]。其Th17细胞会分泌出IL-17、TNF（肿瘤坏死因子）以及IL-6等相关物质。此研究对来氟米特以及地塞米松对类风湿关节炎患者的外周CD4+T细胞进行相应的干预，选用流式细胞术对相关指标进行检测，探究此两种药物对类风湿关节炎患者Th17细胞免疫调节所形成的影响。

1资料与方法

1.1一般资料

选取我院2013年9月-2015年2月期间收治的58例类风湿关节炎患者，其中男性患者为38例，女性患者为20例，患者年龄均在33-54岁之间，平均年龄为（42.1±3.2）岁。将患者分为地塞米松组以及来氟米特（A771726）组，每组患者为29例。其地塞米松组药物浓度为10-6mol/L，来氟米特（A771726）组药物浓度为15μg/ml。

1.2方法

1.2.1对外周血辅助性T淋巴细胞进行分离培养

选取10ml患者的肝素抗凝静脉血，将其分离后，选择出CD4+T细胞，其细胞纯度均在90%。选择含有10%的FBS的培养液对细胞进行重悬之后，将其进行接种，并放置在相应的培养板中，按照分组向其中加入相关药物进行干预，随后将细胞放置在室温为37℃，二氧化碳培养箱中进行培养，时间为48小时。

1.2.2对Th17细胞百分比进行检查

在完成培养后，加入离子霉素、佛波酯以及莫能霉素在其中，随后进行4.5小时的培养，并将每个孔中收集100μl细胞悬液，随后在其中增加100μl固定剂A，并进行15分钟反应。再在其中增加2mlPBS进行离心弃上清，再增加100μl透膜剂B，随后进行5min反应，并在其中增加带PE的抗人IL-17，在18～25℃室温下进行避光反应，时间为30min，通过PBS进行2次清洗工作，在其中增加300μlPBS进行预，采用流式细胞法对其进行检测[2]。

1.3统计学处理

选用SPSS20.0统计学软件对所得数据进行分析以及处理，组间以P＜0.05为差异，表示具有统计学意义。

2结果

2.1A771726以及地塞米松对Th17细胞产生的作用

当来氟米特（A771726）组药物浓度为15μg/ml时，其Th17/Th的比例为（1.55±0.28）%；而地塞米松组药物浓度为10-6mol/L，其其Th17/Th的比例为（1.33±0.21）%，两组经比较，以P＜0.05为差异表示具有统计学意义。由此能够看出地塞米松能够有效的减少其CD4+T细胞。

2.2来氟米特（A771726）和地塞米松对其IL-17mRNA及ROR-γtmRNA所产生的作用

经地塞米松干预之后，其IL-17mRNA及ROR-γtmRNA所具有的表达量呈现下降趋势，而来氟米特（A771726）对其干预后，IL-17mRNA及ROR-γtmRNA所具有的表达量无显著变化，组间以P＜0.05为差异，表示具有统计学意义。

3讨论

就目前而言，Th17细胞是一类分泌IL-17、IL-6，和TNF-α的Th细胞新亚群，IL-17属于炎性因子，能够增强成纤维母细胞黏附分子（intercellularadhesionmolecule，ICAM—1）的表达，刺激上皮细胞、内皮细胞或成纤维细胞产生IL-6、IL-8、粒细胞集落刺激因子（granulo-cytecolony—stimulatingfactor，G-CSF）和前列腺素E-2（PGE-2），与多种炎症反应和自身免疫性疾病的发生发展相关胞是临床研究较多的一种辅助细胞。此种细胞对人体免疫具有重要的临床意义[3]。而多数临床研究说明Th17细胞和其自身的细胞分泌因子在RA以及系统性红斑狼疮等相关的免疫性疾病中存在重要意义。然而来氟米特现已用于治疗类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病等，均取得了良好的效果。，因此此两种药物对免疫性疾病可以进行相应的治疗，其效果显著。

此研究利用地塞米松对类风湿关节炎患者外周血CD4+T细胞进行干预，在进行干预的过程中可以发现地塞米松对Th17细胞具有显著的抑制性，与此同时，伴随药物浓度的加大其抑制作用更为显著[4]。但是此种药物的作用机理并不确定。地塞米松在进入到细胞质之后与细胞中的GC受体会出现结合现象，从而进入细胞核，对其核因子起到一定的抑制效果，并对IL-17以及mRNA等相关基因转录起到干扰现象，以此来减少IL-17的细胞因子。

来氟米特常用于类风湿关节炎等相关免疫性疾病的治疗中，此药物是一种抑制剂，采用其代谢产物A771726对类风湿关节炎患者外周血CD4+T细胞进行干预[5]。在进行干预之后发现，此药物对mRNA以及IL-17无显著的抑制作用。曾有报道说明来氟米特对Th1细胞起到一定的抑制效果，然而Th1细胞在类风湿关节炎中具有相应的位置。

综上所述，对类风湿关节炎患者采用来氟米特进行检测，对其免疫调节功能无显著影响，而对患者采用地塞米松进行检测，能够有效的减少其Th17细胞的Th中所具有的比例，具有临床应用价值。

参考文献：

[1]郑东海，李晶，吴玲等.来氟米特对类风湿关节炎患者Th17细胞免疫调节的影响[J].江苏大学学报（医学版），2012，22（1）：24-26，30.

[2]孙芳.甲氨蝶呤、来氟米特周期联合环磷酰胺对类风湿关节炎患者Th17、IL-21影响的研究[D].山西医科大学，2013.

[3]王梅，李鸿斌，托娅等.糖皮质激素或肿瘤坏死因子拮抗剂联合改善病情抗风湿药物治疗难治性类风湿关节炎的疗效和对Th17/调节性T细胞平衡影响的研究[J].中华风湿病学杂志，2013，17（11）：747-755.

[4]谭悦.芳香烃受体在类风湿关节炎患者外周血单个核细胞和CCR6+CD4+T细胞/CD4+CD25+T细胞中的表达及意义[D].安徽医科大学，2014.

[5]郑东海.来氟米特和地塞米松对类风湿关节炎外周血Th17细胞的影响[D].江苏大学，2012.