５６例自体干细胞肝移植术后肝细胞组织病理的临床观察

５６例自体干细胞肝移植术后肝细胞组织病理的临床观察

唐海峰袁翠云蔡水泽谢鸣剑

唐海峰袁翠云蔡水泽谢鸣剑河南开封市传染病医院河南开封４７５００１

【摘要】目的了解对肝脏肝细胞组织病理变化观察.方法将５６例自体干细胞肝移植术完成了术前、术后肝穿刺检查的病例资料总结.结果移植患者中未发现严重不良反应及并发症.术前分级均在G３S４以上.术后病理平均分级G３S３.结论我们认为补充足够的肝细胞、控制肝纤维化的进展甚至逆转纤维化过程,证实干细胞移植能够改善肝细胞病理变化,进而影响肝细胞功能,缓解临床症状.【关键词】自体干细胞,肝移植,肝穿刺,病理【中图分类号】R３４２【文献标识码】B【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０１７２－０１

目前,临床上对肝硬化缺乏特异的治疗方法,主要是抗病毒和对症支持治疗.肝硬化是一种不同病因引起的慢性进行性弥漫性肝病,病理特点为广泛的肝细胞变性、坏死、再生结节形成,结缔组织增生,致使正常肝小叶结构破坏和假小叶形成,主要表现为肝功能损害和门静脉高压,晚期出现消化道出血、肝性脑病、感染等并发症.目前,传统的治疗缺乏有效的治疗手段,仅靠内科保守治疗患者治疗效果不佳,而干细胞移植是当今世界上最前沿,最热门的医疗技术之一.干细胞就是人体中尚未分化,具有多种分化潜能,有自我更新能力的原始细胞,把相应的干细胞移植到病患器官,可以有效促进受损器官组织的恢复.我院于２０１２年６月以来,共进行了１５８例肝干细胞移植.其中５６例完成了术前、术后肝穿刺检查.现将资料总结如下.

１资料与方法

１．１一般资料选择２０１２年６月－２０１５年５月在我院行干细胞移植的患者５６例,其中女性２１例,男性３５例,中位年龄５８岁.其中丙肝肝硬化１２例,乙肝后肝硬化３４例,酒精性肝硬化１０例.１．２方法采用自体骨髓干细胞,利用介入方法,通过股动脉移植到患者肝内.术前及术后８周、２４周分别进行肝穿刺病理检查.１．２．１抽取骨髓干细胞术日在无菌条件下从病人髂后上棘抽取骨髓１５０mL~２００mL,按密度梯度离心法在体外分离和扩增骨髓干细胞１５mL~３０mL,送介入室备用.

１．２．２骨髓干细胞经股动脉移植所有病人均在局部麻醉下经右侧股动脉穿刺,通过导管将骨髓干细胞悬浊液缓慢经导管分次注射到肝左右动脉分支,术毕退出导管,术后右侧腹股沟穿刺部位加压包扎.１．２．３肝穿刺,经B超定位,选取右腋前线第九、十肋间为穿刺点.局部麻醉,应用安装了一次性肝活检针的肝活检枪沿麻醉路线穿刺,至肝被膜,按动机关,成功获取长约１５mm的线状完整肝组织,装入福尔马林固定液中送检病理.标本检验由郑州金域检验中心进行.

２结果移植患者中未发现严重不良反应及并发症.术前肝穿刺结果均符合肝硬化标准,分级均在G３S４以上.术后８周病理较术前比较:肝细胞数目增多,肝小叶形态失常.肝小叶内炎性细胞浸润增多,肝细胞广泛水肿,部分空泡样脂肪变.汇管区炎性细胞浸润,纤维增生.平均分级G３S４术后２４周病理较术前比较:肝细胞数目略增多,肝小叶形态大小不一.肝小叶内炎性细胞浸润减少,肝细胞部分水肿,部分空泡样脂肪变.汇管区炎性细胞浸润,纤维增生.平均分级G３S３.

３讨论前期大量的动物实验结果表明,移植的干细胞部分定植于肝脏并分化为肝细胞,增加了肝细胞数量,肝功能明显改善.目前,国内外已经初步将该技术应用于临床.Terai等将自体骨髓血干细胞通过外周静脉输注给９例肝硬化患者,在移植２４周后,发现患者的血清白蛋白、总蛋白水平以及Child－Pugh分级明显改善(P＜０．０５),并且未观察到任何副作用[１].日本Lyra等进行的一项随机对照非盲临床试验首次对等待肝移植的３０例晚期肝硬化患者通过肝动脉途径进行了自体骨髓干细胞移植.干预组接受自体骨髓干细胞移植,对照组给予安慰剂,随访９０天后,移植组１６％的患者血清白蛋白水平显著升高,而对照组仅有２％患者白蛋白水平升高;同时,移植组Child－Pugh评分比基线水平降低８％,而对照组比基线水平升高４％,国际标准化比值两组间无显著差别.郭晓钟等通过肝动脉途径进行了７８例自体骨髓干细胞移植的自身对照研究,结果表明,移植后４周,患者血浆白蛋白水平显著升高(P＜０．０１),凝血酶原时间明显缩短(P＜０．０１),纤维蛋白原明显降低(P＜０．０１),证明骨髓干细胞移植是治疗失代偿期肝硬化患者安全、有效的方法.近年来,肝移植技术日臻成熟,已经成为治疗终末期肝病的重要手段,常规的内科治疗措施不能从根本上恢复患者的肝功能.原位肝移植是最有效的治疗方法,但由于受到供肝缺乏、创伤大、费用昂贵、且需长期使用免疫抑制剂等诸多因素的限制,使其无法在临床广泛应用.干细胞是一种具有多项分化潜能和自我复制功能的未分化细胞,在特定条件下,它可分化为不同的功能细胞,形成多种组织和器官.伴随着干细胞研究和认识的深入及分子生物学和细胞生物工程技术的发展,在肝病方面,通过干细胞移植治疗肝硬化逐渐成为研究的热点,[２]以肝干细胞为种子细胞的基因工程、干细胞工程乃至组织工程作为替代方法越来越显示出良好的应用前景,为肝病的治疗提供了一种崭新方法.大量研究发现,骨髓干细胞是肝干细胞重要的肝外来源,所以提取患者的骨髓千细胞移植到患者的肝脏组织中,就等于直接补充了这种来源.而且骨髓干细胞还有着很强的“因地分化’特性,就是在什么样的环境条件导引下可以分化为什么样的细胞,所以当骨髓干细胞被移植到患者肝脏组织后,就像种入肝脏的种子,在肝脏微环境调节下成长发育为骨髓源性肝干细胞、肝细胞及胆管细胞,再通过分化增殖长出新的肝脏组织,来修复旧的肝组织.王娟、邵丽春等通过对接受自体骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化患者的观察,认为自体骨髓干细胞移植于病肝治疗失代偿期肝硬化,是一种安全有效的新方法.[３]张莉,赵彩彦观察到:移植１２周后,６９．４％患者谷丙转氨酶逐渐降低:６１．１％患者总胆红素逐渐下降;７５％患者白蛋白逐渐升高;移植后全部患者凝血酶原活动度不同程度升高.[４]我们认为补充足够的肝细胞、控制肝纤维化的进展甚至逆转纤维化过程,是目前及未来肝硬化治疗的热点.其对肝硬化的治疗作用主要有两个方面,一是促进肝细胞再生,二是控制肝纤维组织形成.[５]本组试验结果表明,通过自体干细胞移植术前、术后肝穿刺病理变化,证实干细胞移植能够改善肝细胞病理变化,进而影响肝细胞功能,缓解临床症状.但由于开展此项工作病例数尚少,随访时间不长,虽然近期取得了一定效果,但其远期疗效如何尚在观察中,对于干细胞移植治疗肝硬化总的疗效评价还需大量的病例数和多中心严格的对照研究.

参考文献[１]Shuji,Terai,Naoki,Yamamoto,Anewcelltherapyusingbonemarrowcellstorepairdamagedliver．Journalofgastroenterology２００２年３７Suppl１４卷１６２－３页.[２]郭晓钟,干细胞技术在消化系统疾病治疗中的应用,中华消化杂志２０１１年３１卷１１期７８３－７８５页.[３]王娟,邵丽春等,自体骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化,中国组织工程研究与临床康复,２００７年１１卷４６期９３９５－９３９７页.[４]张莉,赵彩彦,肝干细胞移植治疗重症肝病,肝脏,２０１２年１７卷０２期１２９－１３１页.[５]姚鹏,肝损伤的干细胞治疗,肝脏,２０１４年１２期９８６－９９０页.