白术挥发油抑菌及抗肿瘤作用研究

(整期优先)网络出版时间:2018-05-15
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白术挥发油抑菌及抗肿瘤作用研究

曹宇

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【摘要】白术挥发油抑菌及抗肿瘤作用的全面分析,不但能够基于反应效果和数据状况确定当前白术挥发油自身的药品市场价值,从而巩固后续临床医疗产业的药品选择环境,同时更能够依据其中作用效果进行细致分析,在确定作用流程和反应参数同时,更能够为后续药品的应用市场提供明显指向性,以满足当前城市患者在药品选择方面的经济性需求。故而,在落实作用研究过程中,应当秉承细致严谨的论述措施和条件确定白术挥发油的效能,这样才能够确保整体医疗环境构建完善。

【关键词】白术挥发油;抑菌;抗肿瘤;作用分析

一、试验材料和方法

1.试验材料的选用

细菌试验条件:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、表皮葡萄球菌、溶血性链球菌、鲍曼不动杆菌。

药品材料:白术(浙江地区产白术根茎部位)

细胞材料:人体肺部癌细胞株、人体宫颈癌细胞株。

2.试验试剂与仪器

试验试剂:培养基、胰蛋白酶、新生牛血清、吐温-80、二甲基四氦唑盐、二甲基亚砜、琼脂糖、溴化乙锭。

试验仪器:气相色谱-质谱仪、3111型CO2培养箱、1500型全自动酶联免疫检测仪、荧光显微镜。

3.细胞培养及药物处理条件

在落实试验过程中,应当基于观察环境进行细致分析。其中针对人体肺部癌细胞株与人体宫颈癌细胞株应进行培养基培养,其中添加10%的新生牛血清,而后再添加青霉素链霉素,以确保整体培养环境稳定同时,还应当确保室温、湿度和CO2条件满足连续培养的优势。

4.白术挥发油材料的萃取

依据药品材料特性,应当依据蒸馏法对白术进行挥发油提取,而后再以无水硫酸铜条件急性干燥处理,待经历过滤杀菌流程后进行配置,确保浓度满足5%同时,应当混入3%浓度的吐温-80,以便后续试验备用。

5.白术挥发油影响成分分析

在落实试验之前,应当确保上述制备条件中具备单一的审核条件,这样才能够确保整体药品效能能够被全面分析,并在后续试验中降低干扰影响。故而,基于白术挥发油材料的成本应当提供气相色谱-质谱法条件进行分析。

期间应当确定色谱条件:色谱柱:VF-Wax石英毛细管色谱柱(30mx0.25mm,0.25μmol/L);初始温度为60°C(保持2min),升至250°C(保持10min),升温速度为15°C/min;汽化温度为230°C;载气为He,流量为1.0mL/min;分流比为200:1;进样量为1.0μl..

质谱检测器:EI电离源,源温为200°C,电离电压为70eV质谱标准库为美国国家科学技术研究所出版的NIST库。

6.白术挥发油抑菌活性检测

此类试验选择比浊法,在标准细菌溶液浓度环境下,以单位容量比例确定挥发油加入条件,并针对相应数据检测提供多个阶梯式反应条件,以确保整体培养基内部环境反应参数能够被有效认知同时,还应当设置溶剂吐温-80组,在培养箱中孵育24小时后,在依据自动酶标仪条件进行吸光度测定,以此测算抑菌率状况,并将相应数据记录。

7.细胞活力检测措施

在落实检测功能过程中,应当明确MTT法的数值检测优势。而后,选取对应数量的细胞条件接种在培养皿环境中,在确保满足12小时后加入定量白术挥发油,并通过实验需求提供阶段性浓度环境,以此全面统筹白术挥发油的能力参数,并在24小时后加入MTT溶液条件,待4小时后进行溶液选取,通过二甲基亚砜将沉淀完全溶解,而后在避光15分钟后,进行吸光度测定,同时将空白对照组和吐温-80阴性对照组进行比对,如此计算相应抑制率。

8.癌细胞DNA损伤检测

此检测环境选用碱性单细胞凝胶电泳方法深入,将载玻片浸透后再取出对应琼脂溶液,在贴近人体温度的室温环境下干燥后,再进行载玻片搭载工作,而后针对细胞悬液和低熔点琼脂糖溶液条件均匀混合,在确定琼脂糖凝固后移走玻片。之后,加入裂解缓冲溶液(肌苷酸钠)与二甲基亚砜,确保反应环境1小时后,通过蒸馏水电泳液进行解旋,随后展开电泳20分钟,并通过中和液清洗三遍。最后,针对裂解中和措施,应当确保温度控制在4°C环境内,而后使用乙醇液进行脱水工作,再添加溴化乙锭溶液进行染色,如此才能够依据荧光显微镜条件确定数据获取条件。

二、试验结果论述

1.白术挥发油的抑菌效果

为了证实白术挥发油的抑菌活性,本实验采用比浊法检测挥发油对细菌生长的影响。由此可得知,一定浓度的白术挥发油作用于细菌24h后,各供试菌的生长均受到了显著抑制。其中:白术挥发油对鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌和草绿色链球菌的抑制作用较明显,抑菌率达95%以上;而对大肠杆菌、表皮葡萄球菌、摩氏摩根菌和溶血性链球菌的抑制作用相对较弱,在挥发油含量为5mg/mL作用24h后的抑菌率分别为29.74%,24.84%,27.10%和26.28%;1.25mg/mL挥发油作用于肺炎克雷伯菌24h后的抑制率为47.54%。

2.白术挥发油对亚细胞的抑制作用

为了检测白术挥发油的抗肿瘤活性,本实验利用MTT法检测肿瘤细胞的生长,结果显示:白术挥发油可以明显地抑制人肺癌细胞和人宫颈癌细胞的活性;而且,随着挥发油剂量的增加,对肿瘤细胞生长的抑制作用增强,呈剂量依赖性。并且,随着挥发油剂量的增加,肿瘤细胞生长抑制率增大。以上结果表明,白术挥发油能够明显地抑制人肺癌和宫颈癌细胞的增殖,并表现出一定的剂量依赖性。

三、试验结论分析

本文重点分析了白术挥发油对人肿瘤细胞体外增殖的影响。结果表明,白术挥发油可明显抑制人宫颈癌和肺癌细胞的增殖,从离体实验的角度证实了白术的抗肿瘤作用,为后续研究白术抑制肿瘤细胞生长的机制提供了一定的参考。随着白术抗肿瘤作用的进一步揭示,研究者对白术抗肿瘤的相关机制进行了一些初步的探讨,主要有以下几个方面:

(1)引起细胞凋亡或坏死。通过研究表明,白术通过调控凋亡抑制基因bel2、突变型P53基因的表达而诱导小鼠肉瘤细胞的凋亡;其他文献发现,白术内酯能够抑制细胞自我更新并通过阻止Notch信号通路影响胃癌细胞生长。

(2)阻遏细胞周期。白术阻遏大鼠小肠隐窝细胞IEC-6于G1/M期;通过相关文献研究表明,白术内酯能够诱导小鼠B16黑色瘤细胞G1期阻滯。

(3)抗肿瘤侵袭转移。研究表明,白术挥发油可能通过抑制MMP-9的分泌起到抗小鼠H22肝癌淋巴道转移的作用。

(4)炎症反应和免疫调节。依据相关文献发现,白术挥发油通过调节血清细胞因子异常表达抑制癌性恶病质,并可提高免疫球蛋白的水平;其次依据文献研究表明,白术可以有效提高小猪血清中lgG和IL-1的表达水平,从而提高机体免疫力。

四、结语

白术作为我国传统中医草药,在其实际药性方面虽然已经具备相对完善的药理分析条件,但在当前城市医药安全环境和临床医疗稳定性方面认知仍旧处于初级阶段,只有通过完善的实验环境确定白术自身的药性条件,才能够确保在后续药品环境构筑中具备稳定性延伸的优势,并为药品市场开发带来新的概念环境。故而,在展开研究过程中,应当基于白术挥发油特性和纯度进行精准提取,这样才能够确保整体试验论述条件完善,并满足药品经济发展的需求。

参考文献

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