HPLC法测定特制狗皮膏中盐酸苯海拉明的含量

HPLC法测定特制狗皮膏中盐酸苯海拉明的含量

李贤春范琳周国红牟新

（沈阳东陵药业股份有限公司辽宁沈阳11016）

【摘要】目的：采用HPLC法（高效液相色谱法）对特制狗皮膏中含有盐酸苯海拉明的量进行测定；方法：色谱柱选择ZorbaxSB-CN,流动相采用了乙腈：水：三乙胺（加入冰醋酸对PH值进行调节到6.5）=51:49:0.5，其流速是1.0ml·min-1，检测的波长是258nm，柱温设置成300℃。结果：进样量线性范围处于0.1～4.1ug；而平均回收率达到了98.4%，RSD为0.44%。结论：HPLC法灵敏、准确、可靠。

【关键词】HPLC法；盐酸苯海拉明；特制狗皮膏

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）35-0168-02

1.仪器和试药

1.1仪器

选用了Agileng1200型的高效液相色谱仪；色谱柱选用了资生堂C18（1504.65u）、AE-163型的电子天平、MettlerAE-240型电子天平。

1.2试药

对照品，含量测定用的盐酸苯海拉明，是由中国药品生物制品，检定所的批号为100066-200506。甲醇，分析纯度所用。

2.方法和结果

2.1色谱条件

选用了资生堂的C18色谱柱，规格为250×4.6mm,5um；流动相，甲醇：1%的硫酸铵溶液=47:53的流动相，而检测的波长为210nm，流速为1ml/min.

2.2考查线性关系

取对照品（盐酸苯海拉明）为0.05079g，采取精密称定，放置到100ml的量瓶之中，然后加入甲醇到刻度进行摇匀，之后把溶液稀释成0.5、0.1、0.05、0.02倍浓度溶液，并且将这些溶液各自取出10ul，把四种溶液分别加注到高效液相的色谱仪，对色谱图进行记录。而盐酸苯海拉明中线性关系采用了回归方程是y=30.6921x+2.7874r=0.9999。最终结果来看，盐酸苯海拉明进样的范围处于0.103——5.079内表现出良好线性关系。

2.3制备溶液

（1）对照品溶液；称取了冰片对照品大约为15mg，放置到25ml的量瓶中，加入了乙酸乙酯溶液且稀释到相应刻度，并摇均匀。

（2）供试品溶液；取出样品四张，将附膜除掉，剪切成为1cm*1cm小块，放置到锥形瓶中，加入甲醇为100ml，浸泡1个小时之后加热回流，提取出30min，取出上层的清夜通过大小为0.45um的微孔滤过，取出续滤液。

2.4精密度实验

对对照品溶液中精密吸取10ul，并且连续6次进样，计算出盐酸苯海拉明的峰面积RSD是0.91%。

2.5提取时间的考察

将试品种提取6份，分成3组，加入甲醇浸泡到1小时候，每一组都加热回流到30min,60min,120min。按照上面的实验方法测定，最终结果含量比较相近，但是加热回流的时间越长，液体中的橡胶含量就越明显，所以选择了加热回流时间为30min。

2.6稳定性的实验

就将把同一份试验品放置在室温环境下，记录0,1,2,4,8,12,16,20,24小时的色谱图，RSD是1.17%，说明了试验品溶液放置在室温环境下24小时内比较稳定。

2.7重复性实验

从同批的供试品种取样（批号为090613），分别称取样品4片，精密称定6份，测定这些样品中的盐酸苯海拉明的含量，最终得到其含量分别是1.28,1.34,1.29，1.33,1.31,1.32mg/片，其中的RSD是1.7%，从结果来看其重复性比较好。

2.8加样回收率的实验

取出本品两片，其中每片含有苯拉明的量为1.31mg(批号为060504)，总共为6份，放置到150ml的锥形玻璃瓶中，加入100ml的甲醇溶液，而甲醇溶液中含有0.02613mg/ml盐酸苯海拉明，按照相应方法进行测定。最终获得的结果分别是5.137mg,5.291mg,5.308mg,5.184mg,5.247mg,5.213mg。通过计算获得的回收率为96.3%，102.2%，102.8%，98.1%，100.5%，99.2%，可得出回收的平均值为99.8%，而RSD是2.5%。

2.9测定样品含量

取3批样品（批号分别为110101，110102,110203），按照上面的制备供试品溶液的方法对样品进行测定，计算出含量，其含量为1.31mg/片，1.27mg/片以及1.25mg/片。

3.讨论

3.1选择测定的波长

从测定结果来看，盐酸苯海拉明的最大吸收是198mm，在HPLC法测定时基线的波动性比较大，而重复性不好，所以参考了2010年版的药典中，狗皮膏中测定盐酸苯海拉明方法，将波长设定成了210nm。

3.2系统适应性的试验

选用了三家不同厂家的色谱柱，即为资生堂、安捷伦以及岛津，通过实验之后三根色谱柱的结果显示，其分离度、重现性都良好，含量的误差不大，测定的最终结果为RSD为0.93%。3.3选择样品溶解方法本文加入了适量的流动相之后，采取直接振摇或者加热帮助溶解，之后加入流动相到刻度上，将续滤液取出后进行测定。但是这种方法不能让原液中盐酸苯海拉明得到充分溶解，最终测出结果偏低，而采取了HPLC法所测结果比较满意。从研究结果来看，只要时间控制在5min,就能够让特制狗皮膏中含有的盐酸苯海拉明被完全溶出。

3.4选择适用的方法在HPLC法中的条件和系统中，能够极好的把盐酸苯海拉明从特制狗屁膏中分离出来，这样就能够比较准确的测定出盐酸苯海拉明含量，采取这种方法获得最终结果来看，重复性比较好、准确性高，可靠性好。因此，HPLC法灵敏、准确、可靠，通过这种方法测定狗皮膏中含有量（盐酸苯海拉明）比较实用，应该大力推广。

【参考文献】

[1]李兴,段立广,HPLC法测定冠心膏中盐酸苯海拉明的含量[J].中国实用医药,2012（4）：260-261.

[2]杨玉芳,黎远东,吴春晓,黄其春.HPLC法测定复方苯海拉明糖浆中盐酸苯海拉明的含量.广西医科大学学报,2013（5）:986-987.