IL-4,IL-12在宫颈病变中的表达及意义

IL-4,IL-12在宫颈病变中的表达及意义

马雅茹徐冰戴淑真姚勤杨红娟吕腾王丽

马雅茹徐冰戴淑真姚勤杨红娟吕腾王丽李燕

(青岛大学医学院附属医院妇科山东青岛266000)

作者简介：*通讯作者：戴淑真,青岛大学医学院附属医院妇科266003。

【摘要】目的:探讨IL-4,IL-12在宫颈病变发生发展中的作用以及对机体免疫功能的影响。方法:应用RT-PCR技术检测IL-4mRNA,IL-12p35以及IL-12p40mRNA在正常宫颈组、CINⅠ、CINII-III和宫颈癌组中的表达。结果:在宫颈癌组中IL-4表达高于CIN和正常宫颈组，CINII-III组高于CINⅠ和正常宫颈组(P<0.05),IL-12p35和IL-12p40mRNA表达均低于CIN和正常宫颈组，CIN各组均低于正常宫颈组(P<0.05)。结论体内IL-4,IL-12水平与肿瘤的发生密切相关，体内IL-12降低和（或）IL-4升高可促进宫颈癌的发生发展。

【关键词】白细胞介素-4;白细胞介素-12;宫颈病变;免疫

【中图分类号】R737.33【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2010）10-0146-02

IL-4,IL-12作为细胞因子中两种活性蛋白，在机体抗肿瘤过程中发挥了重要作用[1]。体内IL-4,IL-12的变化对机体的免疫水平、肿瘤的发生有着极为密切的关系。本试验通过半定量RT-PCR技术检测正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中IL-4mRNA,IL-12mRNA的表达，探讨IL-4,IL-12对宫颈病变发生发展的影响。

1材料与方法

1.1材料:收集2007年1月-2009年6月青岛大学医学院附属医院妇科宫颈石蜡标本共60例，[患者年龄（42.73±9.02）岁]。其中，CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ级、宫颈癌以及子宫肌瘤或其他妇科良性疾病患者的正常宫颈组织标本各15例，所有病例获取标本前均未接受过放疗及化疗，已经病理检查证实诊断。

1.2试剂:石蜡包埋组织切片核酸抽提试剂盒及RT-PCR试剂盒（均为TaKaRa公司产品），所有引物设计见（表1），由上海生工生物技术有限公司合成，PAGE纯化等。

表1引物序列及扩增参数

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1.3方法

1.3.1蜡块总RNA的提取:从病理科检验合格的蜡块共60例，切片厚度8μm5张，按RNA抽提试剂盒说明进行紫外分光光度计检测RNA纯度。放置-80℃冰箱保存。

1.3.2RT-PCR:取1μg总RNA，按照TaKaRa试剂盒说明书进行。其RT反应条件：42℃30min,95℃5min,4℃5min.cDNA20℃保存。PCR反应为20μl体系，除各个引物不同的退火温度及循环次数外，均按94℃3sec变性，72℃40sec和72℃10min延伸。PCR扩增参数见（表1）

1.3.3电泳:取4μlPCR反应产物，在2％琼脂凝胶上电泳，用AlphaImager2200凝胶图像扫描仪进行扫描，以UVlband软件对电泳条带进行灰度扫描，并计算扩增引物/内参比值计算所测细胞因子的相对含量。

1.3.4统计学方法:采用SPSS12.0统计学软件包进行分析。以均数±标准差（x±s）记录，多组比较采用χ2检验，以P<0.05表示有显著意义差异。

2结果

将所得PCR产物在2%琼脂糖凝胶电泳后，紫外灯下在110bp,121bp,209bp以及269bp处可见扩增的条带。在电泳图中可以看出，从正常宫颈组-CIN组-宫颈癌组中，IL-4mRNA表达呈逐渐增亮趋势，而IL-12p35和IL-12p40mRNA与之相反见(图1)，其结果显示宫颈癌组中，IL-4mRNA表达高于CIN和正常宫颈组，CINII-III组高于CINⅠ和正常宫颈组，其差异有统计学意义(P<0.05)，而在CINⅠ和正常宫颈组中，差异无统计学意义(P>0.05);IL-12p35和IL-12p40mRNA表达均低于CIN和正常宫颈组，CIN各组均低于正常宫颈组，CINII-III组中IL-12p35mRNA低于CINⅠ，其差异有统计学意义(P<0.05),而IL-12p40mRNA在CINI与CINII-III组之间无统计学差异(P>0.05)见(表2)。

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图1IL-4mRNA和IL-12mRNA逆转录扩增产物

在各宫颈病变组中的电泳图

注：纵坐标为marker，用来标记扩增产物长度，其下方第一条带用来代表100bp,依次向上增加100bp;1代表正常宫颈组；2代表CINⅠ组；3代表CINⅡ-Ⅲ组；4代表宫颈癌组

表2IL-4和IL-12在宫颈病变各组中表达的数据统计

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注：*CINI与正常组织比较χ2=1.331,P>0.05**CINII~III与CINI比较χ2=1.517,P>0.05余各组间比较χ2=3.875~5.817,P<0.05

3讨论

宫颈癌作为女性常见的恶性肿瘤，其发病率及病死率在我国呈上升趋势。肿瘤的发生发展与机体的免疫功能密切相关[2]，机体的抗肿瘤机制主要是以CTL和Thl细胞为主细胞免疫机制。Thl/Th2细胞比例失衡[3]可能是宫颈癌发生发展机制之一。细胞因子(cytokine)是由机体分泌的小分子蛋白质，通过结合细胞表面的特异性受体发挥抗细菌，抗病毒，调节特异性免疫反应等多种生物学活性。其中白细胞介素（interleukin,IL）在参与免疫调节以及炎症反应过程中发挥了极其重要的作用。体内IL-4，IL-12的变化对机体的免疫水平、肿瘤的发生密切相关。IL-12[4]是目前已知激活NK细胞和CTL细胞生物活性最强的细胞因子，可诱导Th1促进IL-2,TNF-β等抗癌细胞因子分泌，抑制IL-4等Th2型细胞因子的产生，加强抗肿瘤的作用。IL-4可参与Tho向Th2转化，抑制Thl细胞的增殖以及Thl型细胞因子的分泌，具有抑制抗肿瘤作用。而IL-l2的生物学活性需要40KD和35KD两个亚基(p40、p35)组成异二聚体后才发挥作用。Khatri,Zijlmans[5-6]等研究发现IL-l2在体内可抑制多种肿瘤生长和转移,Bais[7]等研究发现Th2型细胞因子与宫颈病变的发生有关。因此，体内IL-4,IL-12的变化可以间接地反映机体的抗肿瘤能力。本研究发现，从宫颈正常组织到CIN到宫颈癌的发展中，随着宫颈病变严重程度增加，患者体内IL-12表达逐渐降低，两者呈负相关，IL-4逐渐升高，两者呈正相关，换言之，体内IL-12降低和（或）IL-4升高可导致Thl/Th2细胞比例失衡，机体抗肿瘤细胞免疫功能下降，从而促进了宫颈病变的发生发展。

宫颈癌患者，由于机体免疫功能低下，不能及时的对其内环境中出现的突变细胞和早期肿瘤进行监督并给与清除，导致机体内环境紊乱，促进了宫颈癌发生发展。随着肿瘤病变程度的增加以及局部浸润和远处转移，可进一步促使机体的抗肿瘤作用降低，形成恶性循环，从而引起Th1/Th2比例失调，使Th1细胞下降，IL-12分泌减少，Th2细胞及其分泌的IL-4等因子增加，促使Th1进一步向Th2漂移。我们希望在今后的研究工作中可以进一步的深入研究IL-4及IL-12在宫颈癌中的生物学功能和其影响因素，有助于更加完善地阐明机体抗肿瘤的免疫过程，发挥其抗肿瘤的最大优势，使其在宫颈癌的临床转归及治疗起到重要意义。

参考文献

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[2]MurphyJF.Trendsincancerimmunotherapy.ClinMedInsightsOncol.2010Jul14;4:67-80

[3]ZhaoWH,LiL,ZhangB,etal.EnhancementofCD4+TcellactivitiesandmodulationofTh1/Th2lineagedevelopmentinradiatedtumor-bearingratstreatedwithmalezooidofAntheraeapernyiextracts.WorldJGastroenterol.2008Apr7;14(13):2094-9

[4]KlinkeDJ.Amultiscalesystemsperspectiveoncancer,immunotherapy,andInterleukin-12.MolCancer.2010Sep1;9(1):242

[5]KhatriA,KhatriA,HusainiY,etal.Cytosinedeaminase-uracilphosphoribosyltransferaseandinterleukin(IL)-12andIL-18:amultimodalanticancerinterfacemarkedbyspecificmodulationinserumcytokinesClinCancerRes.2009Apr1;15(7):2323-34

[6]ZijlmansHJ,FleurenGJ,BaeldeHJ,etal.Roleoftumor-derivedroinflammatorycytokinesGM-CSF,TNF-alpha,andIL-12inthemigrationanddifferentiationofantigen-presentingcellsincervicalcarcinoma.Cancer.2007Feb1;109(3):556-65

[7]BaisAG,BeckmannI,LindemansJ,etal.AshifttoaperipheralTh2-typecytokinepatternduringthecarcinogenesisofcervicalcancerbecomesmanifestinCINIIIlesions.JClinPathol.2005Oct;58(10):1096-100