Girdin在胶质瘤中的表达及其与血管生成的关系

Girdin在胶质瘤中的表达及其与血管生成的关系

贾世磊1曲晓媛2黄飞1张璐萍1

（1滨州医学院烟台校区山东烟台264000；2山东中医药高等专科学校山东烟台264000）

摘要:目的：研究胶质瘤中Girdin的表达及其与胶质瘤血管生成的关系，探讨Girdin在胶质瘤血管生成中的作用。方法：应用免疫组化Envision法检测Girdin在正常脑组织和不同级别胶质瘤中的表达情况；同时应用CD34抗体标记胶质瘤血管内皮细胞，计数肿瘤微血管密度（MVD），并分析Girdin与MVD之间的关系。结果：1.Girdin在正常脑组织中不表达，在胶质瘤中表达高于正常脑组织，且随着胶质瘤WHO分级的升高，Girdin表达呈升高趋势，差异均有显著性意义(P＜0.05）。2.随着胶质瘤WHO分级的升高MVD计数呈上升趋势，高、低级别胶质瘤之间的MVD计数比较，差异有显著性意义(P＜0.05）。3.胶质瘤中Girdin表达与MVD呈正相关（r=0.468，P＜0.01）。结论：胶质瘤中Girdin高表达，且其表达与胶质瘤血管生成之间均存在较好相关性，提示Girdin可促进胶质瘤新生血管的形成，有利于胶质瘤细胞增殖、侵袭及转移，从而促进胶质瘤的发生发展。

关键词：胶质瘤；Girdin；VEGF；血管生成；MVD

胶质瘤是最常见的恶性程度极高的中枢神经系统肿瘤，高度血管化，侵袭性强、易复发、难切除，传统的放化疗及手术治疗效果较差。瘤细胞恶性增殖和浸润[1，2]侵袭破坏局部脑组织是造成胶质瘤患者死亡的首要原因。

肿瘤的发生、发展、增殖、侵袭及转移均依赖于肿瘤血管生成[3]。

肿瘤血管生成活跃程度对组织病理分级、放射治疗以及在预后判断上都具有重要的评估价值。

Girdin是一种新发现的肌动蛋白结合蛋白，在肿瘤的起始进展过程中扮演着重要角色[4]，可作为抗肿瘤转移的新靶点。本研究旨在探索与肿瘤血管生成关系密切的Girdin在胶质瘤中的表达情况其与胶质瘤血管生成的关系，以明确Girdin在胶质瘤血管生成中的作用，为胶质瘤的血管生成和治疗提供新的认识。

1资料和方法

1.1一般资料

选择烟台毓璜顶医院2013年8月至2015年11月经手术病理证实的胶质瘤患者52例，作为实验组。所有患者均首次发病，术前未行任何治疗。病理分级按照2000年WHO颅脑肿瘤的分类标准，进行病理组织学评估：I～II级16例，III～IV级36例。为方便统计分析，将WHOI～II级归为低级别胶质瘤组，WHOIII～IV级归为高级别胶质瘤组。另选择同期在该院因脑外伤行颅内减压术并经病理证实为正常脑组织的标本20例，作为对照组。

1.2主要试剂

兔抗人Girdin多克隆抗体，鼠抗人CD34单克隆抗体。

1.3方法

1.3.1标本处理术中取新鲜标本，10%甲醛固定，常规石蜡包埋。每例组织连续切片4μm×3片，一片行HE染色以明确病理诊断，其余两张行免疫组化染色。

1.3.2免疫组化（Envision二步法）染色实验步骤严格按照操作方法说明进行，Girdin多克隆抗体浓度1：120，CD34单克隆抗体浓度1：60。阴性对照采用PBS代替一抗，阳性对照采用结肠癌组织。

1.3.3免疫组化结果判定

1.3.3.1Girdin判定标准Girdin阳性结果为细胞浆内出现棕黄色颗粒。每张切片随机观察10个高倍镜视野，计数100个胶质瘤细胞中阳性细胞数目，根据胞浆染色强度和阳性细胞百分比评定。胞浆染色强度：无染色计0分，浅黄色计1分，棕黄色计2分，深棕色计3分。阳性细胞百分比：无染色细胞为0分，染色细胞≤25%为1分，染色细胞26%～50%为2分，染色细胞>50%为3分。上述两项相乘，按乘积分4级：0分为阴性（－），1～2分为弱阳性（＋），3～5分为中等阳性（＋＋），≥6分为强阳性（＋＋＋）。

1.3.3.2MVD计数CD34标记肿瘤组织血管内皮细胞。以清晰棕黄色单个或数个血管内皮细胞围绕成簇作为1个血管标记。低倍镜选择MVD热区，转高倍镜下计数，取5个视野MVD平均值作为MVD。

1.4统计学方法

采用SPSS17.0统计软件。计量数据用均数±标准差表示。各参数值之间比较用x2检验及相关系数检验，相关性采用Spearman等级相关检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1Girdin在正常脑组织和胶质瘤中的表达

Girdin在正常脑组织中不表达。胶质瘤中Girdin阳性率65.4%(34/52)。其中，16例低级别胶质瘤中Girdin阳性率37.5%（6/16），以弱阳性为主；36例高级别胶质瘤中Girdin阳性表率77.8%（28/36），多呈中—强度阳性。Girdin在胶质瘤中表达高于正常脑组织，且随着胶质瘤WHO分级升高，Girdin表达亦升高，差异均有显著性意义（P＜0.05）。

2.2不同WHO分级胶质瘤中的MVD计数

正常脑组织中MVD19.3±2.99，16例低级别胶质瘤中MVD29.63±4.94，36例高级别胶质瘤中MVD49.08±5.33。随着胶质瘤WHO分级升高，MVD计数亦升高，高、低级别胶质瘤之间MVD计数比较，差异均有显著性意义(P＜0.05）。

2.3胶质瘤中Girdin与MVD之间的关系

胶质瘤中Girdin表达与MVD呈正相关（r=0.468，P＜0.01）。

3讨论

3.1Girdin在胶质瘤中的表达

Girdin是日本学者于2005年首次发现并报道的一种细胞内大分子蛋白，普遍表达于哺乳动物细胞中，由1870个氨基酸组成，分子量220～250kDa，在维持肌动蛋白的结构、调控肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移、血管生成、创伤修复及细胞自噬等方面发挥重要作用。

研究显示[5]，Girdin在乳腺癌、结肠癌等多种恶性肿瘤组织中均高表达。本研究显示，Girdin在正常脑组织中不表达，在胶质瘤中高表达，且随着胶质瘤WHO分级的升高，Girdin表达呈上升趋势，提示Girdin与胶质瘤的发生发展密切相关。

在出生后神经发育的形成阶段，Girdin调节海马区域轴突萌芽和神经祖细胞迁移。表皮生长因子受体信号被激活时，Akt可直接激活Girdin[6]，活化的Girdin在细胞内重新分布，募集肌动蛋白、促进片状伪足形成，最终促进细胞移行[7]。Girdin和Akt可相互激活，因此，胶质瘤的发生发展过程中很可能存在这一信号通路的活化，从而促进瘤细胞的存活和发展。但Girdin在胶质瘤中的具体作用机制尚不清楚，有待于进一步探索。

3.3胶质瘤中Girdin表达与血管生成的关系

本研究结果显示，胶质瘤中CD34表达明显增高，胶质瘤中MVD明显高于正常脑组织，且随着胶质瘤WHO分级的升高，MVD升高。从中可看出，胶质瘤中新生血管丰富，印证了胶质瘤的富血管性，同时也说明胶质瘤的发生发展与微血管密度之间可能存在某种关系，提示胶质瘤的新生血管生成可以为胶质瘤细胞提供充足的营养和血供，从而促进胶质瘤的恶性生物学行为，有利于胶质瘤细胞的恶性增殖、侵袭性及转移。胶质瘤中新生血管的生成促进了胶质瘤的发生发展。我们同时发现，胶质瘤中Girdin表达与MVD呈正相关，提示Girdin高表达可促进胶质瘤新生血管的形成，从而促进胶质瘤细胞的增殖、侵袭，促进了胶质瘤细胞的转移。内皮细胞移行是组织血管再生最主要的一环。Girdin广泛分布于内皮细胞和血管平滑肌细胞中，是出生后血管形成不可或缺的蛋白，在细胞迁徙和重组肌动蛋白骨架中起着关键作用，提示Girdin可能与血管生成相关。然而，对于Girdin在胶质瘤血管生成中的具体作用机制，目前尚不清楚。

综上所述，Girdin与胶质瘤血管生成之间具有较好的相关性，提示Girdin在胶质瘤的血管生成中起重要作用，为胶质瘤的血管生成提供了新的认识，同时也为胶质瘤的临床治疗和预后评估提供了新的靶点。

参考文献：

[1]EnomotoA，PingJ，TakahashiM.Girdin，anovelactin-bindingprotein，anditsfamilyofproteinspossessversatilefunctionsintheAktandWntsignalingpathways[J].AnnNYAcadSci，2006，1086:169-184.

[2]DisanzaA，SteffenA，HertzogM，etal.Actinpolymerizationmachinery:thefinishlineofsignalingnetworks，thestartingpointofcellularmovement[J].CellMolLifeSci，2005，62(9):955-970.

[3]HanahanD，FolkmanJ.Patternsandemergingmechanismsoftheangiogenicswitchduringtumorigensis[J].Cell，1996，86：353-364.

[4]WengL，EnomotoA，Ishida-TakagishiM，AsaiN，TakahashiM.Girdingformigratorycues:rolesoftheAktSubstrateGirdinincancerprogressionandangiogenesis.CancerSci.2010，101(4):836-42.

[5]JiangP，EnomotoA，JijiwaM，etal.Anactin-bindingproteinGirdinregulatesthemotilityofbreastcancercells[J].CancerRes,2008,68(5):1310-1318.

[6]Jin，LiuC，GuoY，ChenH，WuY.ClinicalimplicationsofGirdinandPI3Kproteinexpressioninbreastcancer.OncologyLetters.2013，5(5):1549–1553.

[7]AnaiM，ShojimaN，KatagiriH，etal.AnovelproteinkinaseB（PKB）/AKT-bindingproteinenhancesPKBkinaseactivityandregulatesDNAsynthesis[J].BiolChem，2005，280（18）：18525-18535.

作者简介：贾世磊，男，山东省烟台市莱山区，1979年7月出生，山东省烟台护士学校工作，现滨州医学院在职研究生，人体解剖与组织胚胎学专业，研究方向为神经系统肿瘤发生机理及基因治疗。

通讯作者：曲晓媛，山东中医药高等专科学校（山东省烟台市滨海东路508号）免病教研室（综合楼1327房间），264000.18353521100.