高压蒸汽灭菌柜验证中需注意的几个问题探讨

高压蒸汽灭菌柜验证中需注意的几个问题探讨

曾令震

海南海灵化学制药有限公司570311

摘要：本文对高压蒸汽灭菌柜验证实施过程中，需要注意的几个问题进行讨论，可为灭菌柜验证工作提供了参考。

关键词：高压蒸汽灭菌柜；性能验证；热穿透

随着对药品生产制造工艺技术和辅助设备的验证要求提高，灭菌柜验证已经得到药品生产管理人员的重视，原来的验证工作通常是交给灭菌柜生产企业或者具备资质的验证机构来完成，使得药品企业的验证需要支出较多的费用。为了做好对灭菌柜的日常验证工作，我们采用温度验证仪对灭菌柜按批准方案进行多批次灭菌情况进行验证，所有的验证结果均符合要求。

1设备、检测用仪器及物料

1.1设备

山东新华XG1.DT-0.6m3脉动真空灭菌柜，该设备安装于符合GMP标准设计的针剂车间C级功能间。环境温度18～26℃，相对湿度45～65%。该设备用于灌装器具、滤芯、胶塞等物品的灭菌。

1.2检测用仪器

Kaye温度验证仪系统(包括其温度测试探头)及其配套的IRTD标准探头、温度干井和电热恒温培养箱等。

1.3物料

待灭菌物品为冻干胶塞装载物料，指示剂使用到了B-D测试包和嗜热脂芽孢杆菌生物指示剂。

2验证方法

2.1仪器和仪表

待验证设备山东新华XG1.DT-0.6m3脉动真空灭菌柜压力表和温度表已校准并在校准有效期内。

Kaye温度验证仪的测试探头经IRTD标准探头在温度干井中进行前校准，温度测定点为（90℃、121.1℃、130℃），检测点为121.1℃，致死率设定参考温度为121.1℃、Z值为10和D=1。纠偏前允许偏差为1.0℃，纠偏后可接受偏差为0.5℃，IRTD的校准通过标准为0.012℃保持2min，温度探头的校正通过标准为0.2℃保持3min，设定文件记录间隔为20秒。校准结果都达到规范要求，可以进行后续的验证测试工作。

2.2热分布

灭菌柜首次验证应进行空载热分布以证明设备性能符合要求。可利用满载热分布的方式开展试验，结合探头分布情况，把12支Kaye测试探头在灭菌柜腔内中进行均匀地分布，但不得与装载物或灭菌柜硬件（如灭菌车、支架、腔室内表面）等相接触。用图表或图形描述每个温度探头的放置部位并布好点，继而开展热分布的测试工作，以对可能存在的冷点进行分析和确定。

2.3热穿透

热穿透确认的目的是证明待灭菌物品内部（如液体）或固体材料的表面，在灭菌过程中获得所需的杀灭效果（通常用F0表示）。热穿透温度探头尽可能放置于装载中的冷点，如果一个装载中混有热穿透特性不同物品，探头应置于每种类型中具有代表性的装载物中。需要对灭菌过程中的形成的热穿透能力进行检查和分析。

2.4生物指示剂（BI）挑战试验

采用嗜热脂芽孢杆菌微生物指示剂作为指标药剂，可与热穿透同步完成。具体实施可在12支温度测试探头每支探头的尾部（一般在距探头末端4～6cm处），用耐高温胶带固定绑上生物指示剂，并投入至待灭菌物品中，按其装载的包装形式给予密封。试验完成之后，把指示剂样品提取出来，按规定要求送样到化验室内，生物指示剂（BI）按产品说明书（COA）进行恒温培养；没有经过灭菌处理的生物指示剂须一同培养，从而用于对阳性检测结果的对比。

对于以上确认项目，在首次验证试验中往往需要连续开展3次，需要对试验结果的重现性进行检查和验证；在日常再验证确认试验中，往往需要进行不少于1次试验并且合格。

3结果

3.1仪器仪表校准

灭菌柜设备上的关键仪器仪表校准合格，并在有效期限内；验证用检测使用到的温度探头前校准均符合规定。

3.2热分布试验

采用热分布试验主要是对灭菌过程中的最大装载热分布情况进行分析，对灭菌柜内腔室温度分布的均匀性进行研究，从而确定腔室内可能存在的冷点。所有的温度探头在热穿透试验前、后都必须进行前校准工作，校准结果均须达到规范要求。在灭菌的过程中，同一时刻各点之间的差值不允许超过2℃。Kaye温度测试探头数量、安放的位置与空载时的布点相同的，具体见表1、图1所示，几何中心和角落都设置有代表性测温点，冷凝水排放口放置探头。热电偶探头不可以与固体表面进行接触，也不要安放在任何容器内。

3.3热穿透试验

试验结果为F0Min＝33.42，SALMin＝10.56，最小SAL值≥6，符合规定要求。

3.4微生物挑战试验

与热穿透试验可同步进行，以确认灭菌周期所提供的工艺达到灭菌效果。每个生物指示剂（BI）相应写上相关的标识信息，以便追溯该指示剂在验证中的放置位置、验证运行次数等信息。将生物指示剂对号绑定在kaye测温探头上，同步热穿透试验一起进行，并在工作表中记录生物指示剂号。试验完毕，将每个生物指示剂连同对照品送到QC培养，检验结果。测试后的生物指示剂产品说明书要求，在60±2℃下培养24h后，应呈阴性（保持紫色），阳性对照生物指示剂呈黄色（有菌落生长）。

将BD测试包置于灭菌柜底部，排气口的上方，测试包必须平放，标签向上。BD测试脉动次数为3次，灭菌时间及其设定的灭菌温度（一般按使用到的温度比如121.1℃）应按BD产品说明书之规定进行设定，干燥处理时间可设为180S。测试完后，检查整张纸的中间与外围的颜色的变化，基本测试纸变为均匀的暗棕色或黑色，符合规定要求。

4讨论

4.1关于验证前的校验

验证之前，灭菌柜的压力表、温度表等已进行校验，12支Kaye温度测试用探头验证前校准结果须显示全都达到规范要求，这是开展验证工作的前提条件。压力表可以由所在城市的质监部门来完成校验工作，达到合格标准后可以出具检定证书。Kaye温度验证仪系统（含IRTD标准探头）的校验，应定期送制造厂商校验并出具相关证明文件。验证完成后，Kaye测试温度的探头须进行后校验，只有这些热电偶后校验顺利通过后，方可证明所有的验证测试温度数据是准确的、可靠的。

4.2空载热分布试验

灭菌柜内不放置任何待灭菌物品，只把空灭菌车投入到腔体中。对于热分布布点的工作，一般考虑包括在纯蒸汽进入口（一般温度最高点）、在冷凝水排放口（一般温度最低点）进行布点，温度控制探头也需要放置好，其它的探头需如图均匀布置在灭菌柜腔体中，从而使获取到分布温度具备可代表性。测温探头注意不可与灭菌车金属部件产生接触。新购或发生变更进行大修后的灭菌柜应进行空载热分布测试，再验证过程可不进行此项实验。

4.3满载热分布试验

根据灭菌柜具备的最大装载能力，按冻干胶塞装载模式摆放放置到灭菌车内，然后把测温探头按要求放置到待灭菌物品外侧，从而可以获取到如冻干胶塞等待灭菌物品附近温度的变化情况。12只测试探头经布线器从验证孔洞中穿入，验证孔应该保持良好地密封，避免产生漏气现象。测试探头线绝缘层可以采用聚四氟乙烯材料，探头部位应保证达到密封要求，避免在灭菌时受到温度和压力的影响，使水汽进到测量探头内造成对温度测定结果产生不利影响。

4.4热穿透力的计算

满载条件下热穿透实验，要把测温探头放置到带灭菌物中，从而对待灭菌物内部温度进行测量，Kaye温度验证仪将自动按公式：，即在温度为121℃、Z=10和D=1作为计算依据自动算出。试验结果为F0Min＝33.42，SALMin＝10.56，符合规定要求。

4.5微生物试验

试验完成之后，把指示剂样品提取出来，按规定时间要求内送样到化验室内进行恒温培养。测试后的BI培养后结果呈阴性（保持紫色），阳性对照BI呈黄色（有菌落生长）。所有BI挑战培养结果为阴性，可以判断达到了合格标准。

参考文献：

[1]李豪.灭菌器的温度、压力检测测量方法的研究及验证[D].南昌大学,2013.

[2]陈琦.湿热灭菌及验证综述性探讨[J].机电信息,2016(11):1-9.

[3]]国家食品药品监督管理局药品认证管理中心编写.无菌药品：药品GMP指南-北京：中国医药科技出版社，2011.08