HHcy兔腹主动脉血管超声及病理变化的实验研究

HHcy兔腹主动脉血管超声及病理变化的实验研究

王国庆康爱英

HHcy兔腹主动脉血管超声及病理变化的实验研究

王国庆康爱英（南阳医学高等专科学校河南南阳473058）

【中图分类号】R543.1【文献标识码】B【文章编号】1672-5085(2009)12-0018-03

【摘要】目的观察高同型半胱氨酸血症（HHcy）兔腹主动脉血管超声及病理变化，探讨HHcy致动脉粥样硬化的机制。方法采用高L-蛋氨酸饮食方法建立兔HHcy血症模型，以正常家兔为对照，分别于实验0w、4w、8w检测血清同型半胱氨酸（Hcy）、丙二醛（MDA）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）的含量及超氧化物岐化酶（SOD）活力，并通过血管超声和组织学观察腹主动脉血管病理变化。结果Met组第4w、8w时血清Hcy、MDA、TG、TC含量显著高于同期NC组（P<0.01,P<0.05），而SOD活力则明显降低（P<0.01）；血管超声和光镜下发现，Met组与NC组比较，腹主动脉内膜明显增厚、血管平滑肌细胞增殖，并有大量的泡沫细胞产生和斑块形成。结论HHcy可通过氧化应激增强，损伤血管内皮细胞等机制，诱发动脉粥样硬化的发生。

【关键词】高同型半胱氨酸血症家兔腹主动脉血管超声病理

高同型半胱氨酸血症（HHcy）是诱发动脉粥样硬化（AS）性疾病的独立危险因素[1]，日益引起人们的重视。目前，有关HHcy兔腹主动脉血管超声检查的实验研究未见报道。本文采用高蛋氨酸饮食建立兔HHcy动物模型，观察家兔血清生化指标的

改变、腹主动脉血管超声及病理变化，探讨HHcy致AS形成机制。为HHcy的防治提供可靠的实验依据。

1材料与方法

1.1动物及分组筛选健康雄性家兔20只，月龄3～5个月，

中层结构紊乱，斑块深部的泡沫细胞有变性坏死、崩解,形成细颗粒状粥糜样物质,中膜变浅，浅层肌纤维分离断裂。见图5-8。

图1NC组4w图2NC组8w

内膜纤细、光滑内膜光滑

图3Met组4w图4Met组8w

内膜欠光滑、软斑管腔狭窄、斑块

图5正常对照组血管图6正常对照组血管

10×410×40

图7蛋氨酸组血管图8蛋氨酸组血管

10×410×40

3讨论

AS、脑卒中、冠心病是现代医学中最大的医学难题，由此而引起的致死率在中国乃至全世界都在直线上升。近年的研究证实HHcy是AS新的、独立的危险因子，引起HHcy的原因有营养因素或是遗传因素。

本研究给家兔喂高蛋氨酸饲料，分别在实验第0w、4w、8w时测定血清Hcy水平，Met组4w、8w时血清Hcy含量均显著高于NC组，表明兔HHcy模型制备成功。腹主动脉超声及组织学检查显示，Met组血管内膜明显增厚，中层结构紊乱，有大量的泡沫细胞及细颗粒状粥糜样物质；超声和光镜观查均发现有斑块形成，为动脉硬化改变征象，故我们认为，HHcy可引起动脉血管发生病理改变，是致AS的独立危险因素。

HHcy致动脉粥样硬化的机制目前尚未完全阐明，可能与血管内皮损伤和功能失调、刺激血管平滑肌增值等因素有关[2]。血管内皮细胞作为血管壁与血流之间的屏障,其损伤和功能的减退是动脉粥样硬化的重要始动因素。Hcy升高可通过氧化应激及活性氧基团导致内皮功能紊乱，引起血管内皮舒张功能损伤。实验中发现，Met组家兔血清MDA、TG、TC含量显著高于NC组，而SOD活力则明显降低。提示HHcy家兔体内氧化应激增强，Hcy是多功能损伤因子[3]，其分子中含自由的巯基，在自身氧化生成同型胱氨酸的同时，生成多种强氧化产物（如H2O2、氧自由基等），造成血管内皮细胞的损伤和强烈的毒性作用，并启动细胞膜脂质过氧化的链式反应，使MDA产生增多，消耗了SOD等自由基清除系统；而且Hcy的升高可抑制SOD的表达和分泌,导致内皮细胞抗氧化机制受损[4]，使血管内皮细胞骨架结构发生变化;Hcy还能促进脂蛋白的沉积，并被巨噬细胞吞噬形成泡沫细胞，加速低密

体重在1.5～2.0kg，以标准饲料适应性喂养一周后，随机分为对照组（NC）和蛋氨酸组（Met），每组10只。

1.2HHcy模型的制备动物饲料按100g/d·只计算，分笼饲养，自由饮水。NC组喂标准饲料，Met组喂蛋氨酸饲料（即标饲+2%蛋氨酸制成），L-蛋氨酸购自张家港市华昌药业有限公司。动物连续喂饲8周。

1.3生化指标检测分别于第0w、4w、8w末时,自兔耳缘静脉采血2ml，离心后在TBA-120FR生化分析仪上,用循环酶法检测血浆Hcy含量，MDA、SOD比色法测定,TG、TC酶法测定,Hcy、MDA、SOD、TC试剂盒由北京九强和南京建成公司提供。

1.4血管超声检查应用美国GELg-9彩色多普勒超声诊断仪，血管探头频率为4-10MHz，分别于第4w、8w末进行腹主动脉血管超声检查，动物用10%的乌拉坦4ml/kg腹腔麻醉，取仰卧位，剪去腹部兔毛，充分涂抹耦合剂，测量腹主动脉内-中膜厚度（IMT）、舒张末期内径（Dd）、收缩末期内径（Ds）和腹主动脉血流峰值（Vp）。同时观察血管内膜光滑程度、有无粥样斑块形成。

1.5病理学检查实验8w，处死动物，取降主动脉至腹主动脉分叉处血管，10％福尔马林固定、取材、石蜡切片、H-E染色，光镜观察。

1.6统计学处理各组数据用均数±标准差（x±s）表示，并用SPSS13.0统计学软件进行处理，组间差异用F检验判定，P<0.05有统计学意义。

2结果

2.1血浆Hcy含量变化

0w时各组血浆Hcy含量分布符合正态分布，其95%的可信区间为16.67-22.44μmol/L（即正常参考值），超过此值上限确定为兔高同型半胱氨酸血症（HHcy）。Met组在第4w、8w末时Hcy均显著高于同期NC（P<0.01）（见表1）。实验期间家兔一般情况良好，Met组有2只死亡。

表1血浆Hcy含量比较（x±s，μmol/L）

组别0w（只）4w（只）8w（只）

NC组18.15±1.71（10）18.12±1.33（10）19.09±1.20（10）

Met组19.34±1.65（10）62.92±2.26（9）＊＊65.23±1.12（8）＊＊

注：与NC组比较＊＊P﹤0.01；

2.2血清TC、TG、MDA、SOD含量变化

Met组与NC组同期比较，血清TG、TC、MDA含量显著升高（P<0.05，P<0.01），SOD活力明显降低（P<0.01）；随着时间延长Met组TG、TC、MDA含量继续升高（见表2）。

表2血清TG、TC、MDA、SOD含量比较（x±s）

组别时间nTG（mmol/L）TC（mmol/L）MDA（μmol/L）SOD（U/ml）

NC组4w101.05±0.131.56±0.1121.83±7.32368.32±25.14

8w101.06±0.091.57±0.1222.32±6.02370.28±23.46

Met组4w91.21±0.03＊1.74±0.08＊40.06±9.03＊＊311.58±24.38＊＊

8w81.41±0.09＊1.93±0.14＊45.27±8.16＊＊285.35±26.30＊＊

与NC组同期比较＊P<0.05,＊＊P<0.01

2.3腹主动脉超声检查结果比较

实验4w时，NC组血管内膜线细、光滑、连续性好；Met组血管内膜欠光滑，边缘不整齐，有中等偏低回声团块（即软斑形成）。8周末，Met组血管IMT明显增厚（P<0.01），有偏强回声团，斑块边界不清，Vp显著增快（P<0.01）。见图1-4。

2.4腹主动脉血管病理变化

大体观察:NC组无斑块形成，Met组可见不规则隆起斑块。光镜下观察：NC组血管内膜薄而光滑，与外膜平行，连续性好，中膜平滑肌细胞排列整齐，管壁厚薄均匀。Met组：血管内膜明显增厚,斑块突出于内膜面,内膜下大量排列不规则的平滑肌细胞，

度脂蛋白氧化,损伤血管内皮细胞,引起动脉粥样硬化斑块形成。

综上所述，高蛋氨酸饮食可诱发家兔Hhcy,Hcy升高可通过氧化应激增强，损伤血管内皮、促进血管平滑肌增殖等机制，导致AS的发生。若能降低Hcy的含量或对抗其作用，就可能减少Hhcy所致心、脑血管疾病的发生。

参考文献

[1]穆红，陈欣.亚甲基四氢叶酸还原酶基因突变与心脑血管

梗死发生的关系.国外医学临床生物化学与检验学分册，2005，26(3):145-147.

[2]刘娜，张书平，曹治宸等.高同型半胱氨酸血症对老年人血管疾病的影响.临床荟萃，2003，18(19):1139-1141.

[3]耿彬,常林，杜军保等.防止高同型半胱氨酸血症的新策略.北京大学学报，2005，37(2):215-219.

[4]刘晓军.高同型半胱氨酸血症致动脉粥样硬化机制研究进展.肠外与肠内营养，2007,14(2):120-125.