XRCC1和RASSF1在食管鳞癌中的表达及其临床意义

XRCC1和RASSF1在食管鳞癌中的表达及其临床意义

王燕霞王新森周福有

王燕霞王新森周福有（河南科技大学第四附属医院/安阳肿瘤医院，河南安阳455000）

【摘要】目的探讨XRCC1和RASSF1在食管鳞癌（ESCC）组织中的表达及临床意义。

【关键词】食管鳞癌；XRCC1；RASSF1【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】2095-9753（2016）4-0067-021

资料与方法1.1一般资料选取安阳市肿瘤医院2008年5月2日-2009年10月16日接受食管癌根治术的患者60例，所有患者均为R0，术前均未行辅助放化疗，分别选取每例患者的癌组织、食管旁转移淋巴结及距切缘5cm的癌旁组织标本。其中男39例，女21例；年龄46～78岁，中位年龄为62岁；参照TNM(UICC，2002版)分期：Ⅱ期5例，Ⅲ期55例；中高分化26例，低分化34例；术后病理均为鳞癌。

1.2SP法检测ESCC中蛋白的表达所有标本常规用甲醛固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片；光镜观察分级和分期。采用SP法，以已知阳性组织做阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。所用鼠抗人XRCC1单克隆抗体和兔抗人RASSF1A单克隆抗体均购于美国Abcam公司，严格按照说明书操作。

1.3SP法判读标准由2位病理科主任医师采用双盲法阅片。

XRCC1蛋白表达阳性细胞表现为细胞核内有棕黄色颗粒沉着。

RASSF1蛋白表达阳性表现为细胞质和（或）细胞膜内由棕黄色颗粒沉着。XRCC1和RASSF1表达水平采取半定量的判读标准：参照Kim等的评价方法，观察肿瘤细胞染色强度和阳性细胞比例，取全组评分的中位数为cutoff点，评分大于此中位数为高表达组，小于或等于此中位数为低表达组。肿瘤细胞染色强度评分为：0分，阴性（无染色）；1分，弱染色（淡黄色）2分，中染色（淡棕色）；3分，强染色（深棕色）。阳性细胞比例评分：0分，无阳性细胞；1分，1%～25%；2分，26%～50%；3分，51%～75%；4分＞75%。总评分为阳性细胞染色强度评分+阳性细胞比例评分。阴性：1-2分；阳性：3-7分。

1.4统计学处理采用SPSS19.0进行统计分析。采用χ2检验或确切概率法(Fisher检验)，Spearman等级相关分析法。检验水准ɑ=0.05。

2结果2.1XRCC1蛋白在不同食管组织中的表达阳性细胞表现为细胞核内有棕黄色颗粒沉着。在癌组织、转移淋巴结及癌旁组织中的阳性表达率分别为50%（30/60）、50%（30/60）、81.7%(49/60)。XRCC1在癌旁组织中呈高表达，在癌组织与转移淋巴结中阳性表达有下调的趋势；在癌组织与转移淋巴结中的阳性表达率差异无统计学意义（P>0.05)。在癌组织、转移淋巴结两者中的表达均与癌旁组织中有显著差异。（P均<0.05)。

2.2RASSF1蛋白在不同食管组织中的表达阳性细胞表现为细胞质和（或）细胞膜内由棕黄色颗粒沉着。在癌组织、转移淋巴结及癌旁组织中的阳性表达率分别为60%(36/60)、55%(33/60、93.3%(56/60)。RASSF1在癌旁组织中呈高表达，在癌组织与转移淋巴结中阳性表达有下调的趋势；在癌组织与转移淋巴结中的阳性表达差异无统计学意义（P>0.05)；在癌组织与癌旁组织中的阳性表达差异有统计学意义(P<0.05)；在转移淋巴结与癌旁组织中的阳性表达差异有统计学意义(P<0.05)。

2.3XRCC1蛋白的表达与临床病理参数的关系XRCC1蛋白表达与pTNM的关系：II期中的阳性表达率为80%（4/5），高于III期的58.2%（32/55），但差异无统计学意义（P>0.05）。与T分期的关系：T2期的阳性表达率为73.3%，高于T3的阳性表达率：45.2%，但差异无统计学意义（P>0.05）。同样的方法，依次检测与性别、年龄、病理分化程度之间的关系。综上所述，XRCC1蛋白表达与患者的性别、年龄、病理分化程度、T分期及pTNM分期均无明显相关性(P均>0.05)。。

2.4RASSF1蛋白的表达与临床病理参数的关系RASSF1蛋白表达与pTNM的关系：II期中的阳性表达率为60%（3/5），低于III期的78.2%（43/55），但差异无统计学意义（P>0.05）。与T分期的关系：T2期的阳性表达率为73.3%（11/15），高于T3的阳性表达率：45.2%（31/45），但差异无统计学意义（P>0.05）。同样的方法，依次检测与性别、年龄、病理分化程度之间的关系。综上所述，RASSF1蛋白表达与患者的性别、年龄、病理分化程度、T分期及pTNM分期均无明显相关性(P均>0.05)。。

3讨论食管癌的发生、发展是多基因改变、多阶段变异累积的复杂病理过程，患者就诊时多属中、晚期。因此，要改善食管癌患者的预后，早期诊断是相当重要的。RASSF1A是2000年报道从3号染色体短臂克隆出来的肺癌新型候选抑癌基因，其作为抑癌基因的具体机制尚不清楚。目前已证实，Ras-GTPase是调节增殖与凋亡的分子开关超家族一员，它的不同功能取决于细胞外的信号分子；由此，活化的Ras可能因与一系列不同的下游效应分子相互作用而发挥两种截然不同的功能，既可以促进细胞生长和分化，又可通过诱发细胞休眠，诱导终末分化和凋亡来抑制细胞生长。研究表明，RASSF1在所有的正常组织中均表达，但在绝大多数肿瘤中却表达沉默。秦艳茹等[14]报道采用免疫组化法检测RASSF1A蛋白在ESCC组织中的阳性表达率低于正常黏膜组织中的阳性表达率，差异有统计学意义，且RASSF1蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期有关。郑秋青等报道RASSF1AmRNA在ESCC组织及相应的癌旁正常组织中的表达存在显著统计学差异（P＜0.05），RASSF1AmRNA的表达缺失与ESCC患者的淋巴结转移、临床分期及不良预后均存在显著相关性（P＜0.05）。本实验中癌组织与转移淋巴结中的表达明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05），提示RASSF1蛋白表达缺失或降低可导致肿瘤的发生。

XRCC1位于人19号染色体的长臂区(19q13．2—19q13．3)。

XRCC1通过与多聚ADP核糖聚合酶、DNA连接酶Ⅲ和DNA多聚酶B等作用，来修复包括氧化、应激在内的各种损害引起的各种DNA损伤。多数正常哺乳动物细胞XRCC1皆是低水平表达。

莫丽等报道XRCC1在食管癌、Barrett食管与正常食管组织的阳性表达率分别为89.2%、59.1%与57.1%（P＜0.05）。刘珊珊等报道XRCC1在ESCC组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为52.5%和13.0%(P=0.001)。本实验中肿瘤组织与转移淋巴结中的表达明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05），提示XRCC1可能在食管癌的发生发展过程中起着重要的作用。

已有大量研究表明XRCC1基因多态对DNA损伤修复能力有影响，XRCC1基因及其表达产物也可能通过影响肿瘤进展、转移相关基因突变的修复能力，而与肿瘤TNM分期、淋巴结转移等存在相关性。

本研究中不同分期、病理分型、病理分化程度及性别、年龄组之间，XRCC1和RASSF1在癌组织与癌旁组织蛋白表达比较，差异均无统计学意义(P>0．05)，与研究设计时理论预测结果不一致，这一结果可能系本研究采用实验技术较单一，样本量较少所致。今后将扩大样本量，使用不同检测方法，在不同层面上进行进一步实验，使今后的研究中对XRCC1和RASSF1在癌组织的表达水平与临床分期、病理类型、淋巴结转移、分化程度间的关联更加明确。

大量研究证明，食管癌发病中XRCC1可能是很重要的修复损伤的参与基因，其在肿瘤发生过程中被提示有重要的影响作用。同时大量研究证明，RASSF1A蛋白表达与食管癌TNM分期、浸润深度、淋巴结转移相关(P均＜0．05)。因此，该基因有望在多种肿瘤的早期诊断和筛选中发挥重大作用，为消化道肿瘤早期诊断、预后判断和干预治疗提供新思路。食管癌的发生是多环节，多因素的，对这两个基因表达的研究与临床诊疗相结合，将为食管癌的早期发现及制定治疗方案提供一些参考。

参考文献:[1]郑秋青,凌志强,李沛,等.RASSF1A在食管鳞癌组织中的表达、甲基化状态及其与预后之间的关系[J].世界华人消化杂志,2010,18(29):3134-3139.[2]刘珊珊,穆克代斯?伊力亚斯,张瑾熔,等.XRCC1和ERCC1在食管鳞状细胞癌中的表达与放疗疗效及预后的相关性研究[J].新疆医科大学报,2010,33(5):477-481.[3]莫丽.DNA修复基因MGMT-XRCC1在食管癌中表达的研究[J].广西医学,2009,31(3):436-438.