两种不同试剂检测乙型肝炎病毒前S1抗原结果比较

两种不同试剂检测乙型肝炎病毒前S1抗原结果比较

李妙羡吴晓康王香玲赵丽华耿燕卢洁

李妙羡吴晓康王香玲赵丽华耿燕卢洁

（西安交通大学医学院第二附属医院检验科陕西西安710004）

【摘要】目的通过检测血清乙型肝炎前S1抗原（PreS1Ag）、乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)及乙型肝炎五项(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)标志物（HBV-M），评价两种国产乙型肝炎病毒前S1抗原试剂对检测结果的影响。方法用两种PreS1Ag试剂对88例HBV-M阳性患者血清中的PreS1Ag进行了检测，PreS1Ag及HBV-M应用酶联免疫（ELISA）技术；HBVDNA采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)。结果88例HBV-M阳性患者血清中，HBVDNA阳性(+)81例，阳性率为92.0%(81/88)；Pre-S1-Ag试剂1阳性(+)87例，阳性率为98.9%(87/88)；Pre-S1-Ag试剂2阳性(+)85例，阳性率为96.6%(85/88)；Pre-S1-Ag试剂1与HBVDNA符合率为92.0%；Pre-S1-Ag试剂2与HBVDNA符合率为91.0%；Pre-S1-Ag试剂2敏感度为96.6%，特异性为98.9%，两种Pre-S1-Ag符合率为96.6%，Pre-S1-Ag试检测结果与HBVDNA检测结果有很好的相关性。结论Pre-S1-Ag试剂2能满足临床诊断需要。

【关键词】PreS1AgHBV-MHBVDNAELISA同步检测

【中图分类号】R446【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2012）22-0301-02

目前乙型肝炎仍是全球最常见的传染病之一,据报道每年约有100万人死于乙型肝炎病毒(HBV)感染所致的肝功能衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌[1]。前Ｓ１抗原是乙型肝炎病毒（HBV）外膜的重要组成部分，在病毒感染、装配、复制和刺激产生免疫应答等方面,前S1抗原具有十分重要的作用[2]。近年来随着对前Ｓ1抗原的深入研究，发现它可以反HBV在体内的复制情况以及传染性强弱，对乙型肝炎的诊断、治疗、预后评估有一定的价值[3]。但不同厂家的试剂检出率及特异性各不相同，为了取得更好的临床结果，本文对88例不同HBV标志物模式的标本前S1抗原用两种不同ELISA试剂同时进行检测。并将结果进行比较及分析，现报告如下:

一、材料和方法

（一）材料

收集2012年1月至2012年3月西安交通大学医学院第二附属医院门诊及住院患者128例，其中HBV-M阳性患者血清88例(HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性30例；HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性40例；HBsAg、HBcAb阳性16例；HBsAg、HBeAg、2例)，男55例，女38例，年龄13～71岁，平均35.5岁；正常对照40例，男18例,女22例，年龄7～63岁，平均40.3岁，GPT、GOP、HBV-M、HBVDNA及Pre-S1-Ag均为正常。所有血清标本均于-80℃保存。

（二）方法

1.HBVDNA检测：采用实时荧光定量聚合酶链反应技术(PCR)检测，仪器为美国ABI公司7500型扩增仪，试剂盒(YZB/国0371-2009)购自广州中山大学达安基因公司，操作严格按照试剂盒说明书进行。HBVDNA阳性判断标准标准：HBVDNA含量≥103IU/ml为阳性。

2.乙型肝炎病毒Pre-S1-Ag检测：采用酶联免疫(ELISA)技术，试剂1(YZB/国0371-2009)购自上海阿尔法生物技术有限公司(采用两步法）；试剂2(YZB/国0301-2011)购自厦门英科新创科技有限公司(采用一步法）。仪器为雷杜6100型酶标仪及3900型洗板机，操作严格按照试剂盒说明书进行。Pre-S1-Ag阳性判断标准：S/CO≥1为阳性。

3.HBV-M检测：采用酶联免疫(ELISA)技术，试剂盒(YZB/国0371-2009)购自于北京万泰生物技术有限公司，仪器为雷杜6100型酶标仪及3900型洗板机，操作严格按照试剂盒说明书进行。HBV-M阳性判断标准：HBsAg、HBsAb、HBeAg为S/CO≥1为阳性；HBeAb、HBcAb为S/CO≤1为阳性。以上试剂均在有效期内并有试剂盒内、外质控。

（三）统计学方法

采用X2检验。

二、结果

（一）HBVDNA与Pre-S1-Ag阳性率比较

HBVDNA与Pre-S1-Ag阳性率比较见表1。88例HBV-M阳性患者血清同步检测HBVDNA和Pre-S1-Ag，结果：HBVDNA阳性(+)81例，阳性率为92.0%(81/88)；Pre-S1-Ag试剂1阳性(+)87例，阳性率为98.9%(87/88)；Pre-S1-Ag试剂2阳性(+)85例，阳性率为96.6%(85/88)；Pre-S1-Ag试剂1与HBVDNA符合率为92.0%；Pre-S1-Ag试剂2与HBVDNA符合率为91.0%；二种Pre-S1-Ag试剂检测结果与HBVDNA检测结果有很好的相关性。用Pre-S1-Ag和HBVDNA为判断病毒复制指标，无显著性差异。

表1HBVDNA与Pre-S1-Ag检测结果

HBV-DNAPre-S1-Ag(1)Pre-S1-Ag(2)

阳性（+）阴性（－）阳性（+）阴性（－）

阳性（+）811802

阴性（-）6060

合计871862

（二）Pre-S1-Ag(1)与Pre-S1-Ag(2)阳性率比较

Pre-S1-Ag(1)与Pre-S1-Ag(2)阳性率比较见表2。88例HBV-M阳性患者血清同步用Pre-S1-Ag(1)与Pre-S1-Ag(2)试剂进行检测，结果：Pre-S1-Ag(1)阳性(+)87例，阳性率为98.9%(87/88)；Pre-S1-Ag(2)阳性(+)85例，阳性率为96.6%(85/88)；二者无有显著性差异(X2=0.67,P﹥0.05）。

表2Pre-S1-Ag(1)与Pre-S1-Ag(2)检测结果

Pre-S1-Ag(1)Pre-S1-Ag(2)

阳性（+）阴性（-）合计

阳性（+）85287

阴性（-）011

合计85388

（三）敏感度、特异性、符合率Pre-S1-Ag(2)试剂敏感度为96.6%，特异性为98.9%，与Pre-S1-Ag(1)试剂检测阳性符合率为96.6%。

（四）正常对照40例GPT、GOP、HBV-M、HBVDNA、Pre-S1-Ag(1)与Pre-S1-Ag(2)检测均为阴性。

三、讨论

近年来，国内外不少研究证明乙型肝炎病毒前S1抗原是病毒存在和复制的又一指标[4，5]，本实验结果也证明了这一点。HBV-DNA是定量检测HBV复制程度准确而重要的检测指标,但因其操作复杂、成本较高、试验条件严格,基层医院较难开展，加之在某些情况下,当病毒DNA与宿主肝细胞整合到一起时,会导致外周血HBV-DNA检测阴性，同时,由于HBV-DNA定量检测技术需要引物,即便选择待测目的基因的保守区序列来设计引物,也有一些突变频率较高的区域或位点,导致在检测中出现假阴性[6]，该研究HBVDNA检出阳性率较Pre-S1-Ag稍低的主要原因就在于此，而Pre-S1-Ag作为病毒复制指标,能弥补HBVDNA假阴性的不足。

目前国产试剂也逐渐成熟，无论从灵敏度和特异性都已达到国家规定的标准，本研究应用两种Pre-S1-Ag检测试剂，对88例HBV-M阳性患者血清中Pre-S1-Ag进行了检测，结果显示：两种试剂的检测结果无显著性差异，且与HBVDNA有恨很好的相关性。用试剂1检测，有2例OD值均在2.2以上，而试剂2未检测出，笔者认为可能为HOOK效应所致漏检(由于试剂1采用两步法而试剂2采用一步法），但从试剂2的敏感性、特异性以及两种试剂的符合率来看，试剂2能够满足临床需要。现国产试剂也较多，技术也比较成熟，在选择使用前只要严格做好比对，评价其特异性和敏感性等，优选出价格适宜又保证检测质量的试剂就可以使用。随着国产试剂质量的提高、价格的降低，越来越多基层单位都可使用，使PreS1-Ag检测得到进一步普及，它对基层单位来说可作为HBVDNA的替代方法应用于临床诊断，所以PreS1-Ag检测对乙型肝炎诊断、治疗和疗效观察都有很重要的临床意义。

参考文献

[1]中华医学会肝病分会,中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南[J].中华传染病杂志,2005,23(6):421-431.

[2]李桂珍，徐云芳，江雪.三种乙型肝炎基因检测方法的比较与评价[J].中华检验医学杂志，2010，5（9）：1052－1058.

[3]徐友文，李飞.血清Ｓ１抗原检测对判断乙肝病毒复制的意义[J].中华检验医学杂志，2010，6（4）：86－89.

[4]李步荣，李丽华，李妙羡.乙肝病毒PreS1抗原的临床应用[J].第四军医大学学报，2007，28（5）：442-444.

[5]SUGAUCHIF，OHNOT，ORITOE，etal.InfluenceofhepatitisBvirusgenotypesonthedevelopmentofpresdeletionsandadvancedliverdisease[J].JMedVirol，2003，70（4）：537-44.

[6]李咏梅,佟宣,陈浩.乙肝患者前S1抗原与HBVDNA的检测及其临床意义[J].细胞与分子免疫学杂志,2004,20(3):33.