无创产前基因检测胎儿染色体非整倍体的临床应用分析

无创产前基因检测胎儿染色体非整倍体的临床应用分析

李红玉周世豪胡兰萍

李红玉周世豪胡兰萍

长沙市妇幼保健院

【摘要】目的：探讨无创产前基因检测胎儿染色体非整倍体的临床应用分析。方法：选择2013年3月~2015年12月31日在我院遗传科进行无创产前DNA检测的孕妇3520例。应用高通量测序的技术检测母体外周血中的胎儿游离DNA，确定胎儿患染色体非整倍体疾病的风险值。对检测结果为阳性的孕妇再采取母体羊水或脐血进行染色体分析，对性染色体异常的病例同时抽取孕妇外周血做染色休检查，与无创产前DNA结果进行对照。结果：无创产前基因检测共检出染色体异常胎儿69例，其中21-三体综合征23例（假阳性1例），准确率95.6%；18-三体综合征6例，准确率100%；13-三体综合征3例，准确率100%；性染色体异常37例，确诊孕妇或胎儿性染色体异常为18例，准确率48.6%。检查结果阴性的孕妇，经过产后随访，无漏诊率。结论：无创产前基因检测胎儿染色体非整倍体中的临床应用卓有成效，尤其是21三体、18三体、13三体，可以提高产前诊断的效率，减少严重出生缺陷患儿的出生，是一种安全便捷的产前诊断方式，应该在临床上进行推广。

【关键词】无创产前基因检测；胎儿染色体非整倍体；临床应用

染色体数目的增加或减少不是单倍体的整数倍，即染色体非整倍体。在临床实践中常见的非整倍体有21-三体综合征、18三体综合征和13-三体综合征[1]。随着医疗技术的不断进步，一些染色体患儿的存活率增加，但是其生活质量非常低，在目前的医疗的水平下不能有效治疗，只能通过产前检查预防患儿出生。无创产前基因检测胎儿染色体非整倍体是目前一种简便且安全的检测方式[2]。本次选取13年3月~2015年12月31日在我院产科进行诊断的孕妇共3520例。

1.材料与方法

1.1研究资料

选择2013年3月~2015年12月31日在我院产科进行无创产前DNA检测的孕妇，共检测3520例。其中3258例是产前筛查高风险（含高龄孕妇）、临界风险或单项指标异常；262例是B超指标异常；其他因素占158例。

1.2研究方法

在通知孕妇知情并取得同意后，抽取孕妇外周静脉血5ml，采取EDTA抗凝采血管，采集后将采血管轻微颠倒八次，并放入4℃冰箱中存放。按照全血样本编号，写上对应血浆编号与分离的日期。在4℃离心机内以1600g离心10min，将上清液分装入两个已编号2.0ml的离心管，每个转入600μl血浆，在离心管上贴上对应条码，并密封。血浆分离后立即低温保存，一周内在20℃下暂存，长期保存需﹣80℃。构建DNA文库，采取最新的测序技术，通过统计每条染色体上序列条数的分布，计算染色体在其中所占的比率，并分析外周血中不同染色体差异，最终得出胎儿染色体非整倍体疾病的风险概率。对于检测结果中高风险的孕妇，应该进行遗传咨询，进行羊水、脐血穿刺，经过细胞培养后，确定胎儿染色体核型。检测结果为性染体异常的病例同时抽取母血确定孕妇核型。

1.3产后随访

对于所有检测结果呈阳性的孕妇，追踪妊娠结局。同时对于检测结果为阴性的孕妇做好观察随访，确定无漏诊率。

2.结果

所有样本根据试验方法进行测序，检出21-三体综合征23例，18-三体综合征6例，13-三体综合征3例，性染色体异常37例。对于低风险孕妇的产后随访，未发现染色体非整倍体异常。

以母体羊水、脐血染色体分析结果作为金标准来进行结果对照，21-三体综合征中有1例假阳性，故准确性为95.6%。23例21-三体综合征中高风险17例，临界风险2例，B超异常4例（产前筛查21-三体高风险切割值1：270；临界风险：1：270~1：1000）。检出18-三体综合征为6例（产前筛查18-三体高风险切割值1：350，临界风险：1：270~1：1000），其中高风险3例，临界风险1例，B超异常2例；检出13-三体综合征为3例，均确诊为18-三体综合征与13-三体综合征，准确性均为100%.，如表1。

检出性染色体异常37例，其中胎儿性染色体异常11例，孕妇性染色体异常7例综合评估对性染色体异常的准确率48.64%。

3.讨论

目前我国的出生缺陷的发生率仍然较高，虽然医疗技术在不断进步，但是对染色体病患儿的治疗手段非常有限，患儿得不到非常有效地治疗，只能通过产前检查预防患儿出生。常规产前诊断技术通常是采用穿刺技术，如羊膜腔穿刺、绒毛穿刺与脐静脉穿刺等获得胎儿组织，然后进行遗传检测，这类方法均属于介入性产前检查手段，造成的流产风险在1%~3%[3]。因此，医学工作者长期以来都致力于快速、无创、准确和经济的产前诊断方式的研究。无创产前基因检测胎儿染色体非整倍体是目前一种简便且安全的检测方式[3]。通过扩增孕妇血液中游离的胎位DNA片段，经高通量测序和计数，生物信息技术处理来判断胎儿是否存在染色体异常。该方法快速、准确，并且无创，逐渐应用到了产前检查中。21-三体综合症也被称为唐氏综合症，属于新生儿常见染色体疾病，发病率在1/800左右[4]，18-三体综合症、13-三体综合症也是较为常见的染色体疾病，其发病率在1/5000与1/7000，并且随着孕妇年龄的增长，染色体异常患儿的比例有可能增高[5]。

本次共检测孕妇3520例，其中3258例是产前筛查高风险（含高龄孕妇）、临界风险或单项指标异常；262例是B超指标异常；其他因素占158例。经测序检测并统计每条染色体上序列条数的分布，计算染色体在其中所占的比率，分析外周血中不同染色体差异，最终得出胎儿染色体非整倍体疾病的风险概率。以母体羊水、脐血染色体分析结果作为金标准来进行结果对照，69例高风险患儿中，经过统计，胎儿无创产前基因检测21-三体综合征中有1例假阳性，准确性为95.65%。而检测出的18-三体综合征高风险为6例，13-三体综合征为3例，准确性均为100%。在目前的国内外研究中，得出的研究结果说明无创产前基因检测胎儿染色体非整倍体具有非常高的敏感性与准确性。能发现几乎所有的21-三体综合征或18-三体综合征胎儿.。在极低的假阳性率下，无创产前检测在当前的产前诊断中，可以避免过度的产前诊断，且其孕期限制少[5-6]。大大的减少对于孕妇的身体伤害，降低孕妇在生理上与心理上的负担。随着高通量检测技术的不断发展，对其他染色体病、染色体微缺失/微重得综合征及一些基因组疾病的检出率也大大地提高，如本院的检测人群中就检出了性染色体异常病例18例，准确率达到了48.64%。

通过本次研究，对于21-三体综合征、18-三体综合征与13-三体综合征的诊断，采用无创产前基因检测胎儿染色体非整倍体可以缓解大量孕妇的焦虑，进一步降低流产风险以及胎儿感染。同时又兼具安全便捷的特点，具有很高的临床实用价值，值得在临床上进行推广，也是产前检查的大趋势。

参考文献：

[1]葛建民，孙波，赵卫华，等.无创产前基因检测胎儿染色体非整倍体的临床应用研究[J].中国妇幼保健，2014，（12）：1889-1892.

[2]梅瑾，王小华，王昊，等.无创产前基因检测在胎儿染色体非整倍体筛查中的应用[J].中国预防医学杂志，2014，（3）：238-240.

[3]何怡，余勋，赵颖，等.胎儿非整倍体产前无创基因检测的临床应用[J].广东医学院学报，2014，（3）：310-312.

[4]曹婧，乔福元，杨昀，等.胎儿染色体非整倍体无创基因检测在产前诊断的临床应用研究[J].中国优生与遗传杂志，2013，（4）：53-54.

[5]翁慧男，梁嘉颖，曾伟宏，等.无创产前基因测序在胎儿染色体非整倍体基因检测中的临床应用[J].国际检验医学杂志，2015，（16）：2386-2388.

[6]DanS，WangW，RenJ，etal.Clinicalapplicationofmassivelyparallelsequencingbasedprenatalnoninvasivefetaltrisomytestfortrisomies21and18in11105pregnancieswithmixedriskfactors[J].PrenatalDiagnosis，2012，32（13）：1225-1232.