荧光定量PCR技术在痰结核菌中的检测评价

荧光定量PCR技术在痰结核菌中的检测评价

宋朝宾周真珍

宋朝宾周真珍(河南省郑州市中医院450000)

【中图分类号】R52【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2013)26-0257-02

【摘要】目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测技术，厚片涂片抗酸染色，改良罗氏培养法在检测结核病患者痰标本中的结核杆菌的灵敏性和特异性。评价FQ-PCR检测技术在痰结核菌中的意义。方法对我院感染科收治的临床确诊的210例肺结核病患者的同一份痰标本分别进行FQ-PCR法，痰厚片涂片抗酸染色法，改良罗氏培养法检测结核杆菌。结果FQ-PCR法，痰厚片涂片抗酸染色法，改良罗氏培养法检测结核杆菌的阳性率分别为78%，60%，23%。结论FQ-PCR法检测结核杆菌灵敏性和特异性比厚涂片法和培养法高。

【关键词】FQ-PCR痰厚涂片痰培养结核杆菌

我国的结核病患者排行世界第2位，其中肺结核患者500万，且每年新发肺结核病例和死亡病例人数有逐年上升趋势[1，2]。我科对临床确诊的210例肺结核病患者的痰标本进行FQ-PCR法，痰厚片涂片抗酸染色法，改良罗氏培养法检测结核杆菌，具体如下。

1材料与方法

1.1一般资料自2011年1月至2013年月我院感染科收治的根据患者临床症状，胸部影像学检查，临床病理及治疗后综合分析等确诊的住院病例210例[3]。其中男110例，女100例，年龄12-77岁，平均48岁。

1.2痰标本采集全部患者在清洁口腔后咳出支气管深部的痰液2-3ml，分成3份分别置于无菌标本盒里备用。

1.3方法①一份痰标本行齐-尼(Ziehl-Neelsen)抗酸染色厚涂片镜检，油镜下每100个视野有3-9条抗酸杆菌为阳性。②一份痰标本做改良罗氏培养，操作和鉴定参考《结核病诊断实验室检查规程》进行[4]。③一份痰标本做荧光定量PCR检测，以阴阳性质品控及阳性定量参考品的Ct值进行结果判定。

1.4统计方法采用SPSS16.0统计学软件进行统计学分析，两组间比较采用t检验，以P≤0.05为差异有统计学意义。

2结果

三种检测方法阳性率比较

备注：P<0.05

3讨论

痰厚涂片抗酸染色检查结核杆菌是一直来应用最广泛的检查方法，但其受痰标本杆菌浓度，实验操作人员技术水平和实验室条件影响较大，且无法辨别死菌还是活菌。改良罗氏培养法检查效果要比厚涂片法要好，其能鉴定死菌或活菌，能提供药物敏感方面的指导，但培养所需时间漫长，一般为6-7周，所以此方法不能满足临床诊断结核病细菌学方面的要求。本组培养法的125例和涂片法的60例阳性者FQ-PCR法亦阳性，表现出FQ-PCR法的灵敏性和特异性，符合了陈红兵等[5]和盛青等[6]的观点,痰标本中少量细菌即可被FQ-PCR法检出并呈现为阳性。FQ-PCR法灵敏度特异性叫传统PCR更高，污染更低，自动化程度更高[7,8]。FQ-PCR技术对诊断结核杆菌的诊断具有快速、特异、敏感等特点成为结核病分子诊断的最有力的工具。为临床应用有重要前景。

参考文献

[1]卫生部殷大奎副部长在2001年“3.24”世界防治结核病日专家座谈会上的讲话[J].中国防痨杂志,2001,23(4)：207.

[2]张东浩，李影.荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌DNA的应用价值[J].中国医药指南，2012,1(10)：90.

[3]肖东楼，赵明.中国结核病防治规划实施工作指南[S].2008:25-26.

[4]中国防痨协会基础专业委员会.结核病诊断实验室检查规程[M].北京：中国教育文化出版社，2006:34-36.

[5]陈红兵，周志红，贺润年等.荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的应用[J].实用医学杂志，2008,24(27)：3765-3767.

[6]盛青，唐林国，肖梵.荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用价值[J].现代医学，2007,7(7)：11-13.

[7]余春开，冯瑞娥.结核分枝生物学诊断技术的研究进展[J].中华肺部疾病杂志，2011,4(4)：324-329.

[8]凌显桢，罗建文.结核分枝杆菌实验室检测方法的研究进展[J].中国当代医药，2013,1(20)：21-22.