丹皮降糖活性及化学成分研究

丹皮降糖活性及化学成分研究

叶宇高森

大连医科大学附属第一医院116600

摘要：目的：研究丹皮降糖活性部位及化学成分。方法：以糖尿病小鼠为动物模型，对丹皮不同提取物进行降糖活性评价。通过硅胶柱色谱、反相柱色谱等方法对牡丹皮有效成分进行分离，通过1H-NMR、13C-NMR、薄层色谱对分离的3个化合物进行结构解析。结果：丹皮水提取降糖活性明显，50%及95%乙醇提取物降糖活性较弱。得到化合物分别为（+）-儿茶素、丹皮酚、没食子酸。结论：丹皮水提物具有降糖活性。

关键词：丹皮；糖尿病；化学成分

丹皮为毛茛科芍药属植物牡丹（PaeoniasuffruticosaAndr.）的于燥根皮，有清热凉血、活血消瘀的功效，主要用于治疗温毒发斑，疮疡痈肿，经闭痛经，跌打损伤等症。近年来，国内外对该植物的药理活性研究发现其在降糖、抗菌、消炎、治疗心血管疾病等方面具有较好疗效[1]。本研究对牡丹皮的活性部位进行确定，并进行化学成分分离及结构鉴定

实验

1仪器与材料

四氧嘧啶（Fluka公司），葡萄糖试剂盒（北京北化康泰临床试剂有限公司）实验动物：健康昆明种小鼠，♂，体重25-33g，购于沈阳药科大学实验动物中心。离心机（长沙湘仪离心机有限公司）、紫外分光光度计（Unico-2100）。牡丹皮购于沈阳天益堂大药房；柱色谱硅胶及薄层色谱硅胶购于青岛海洋化工有限公司；其它化学试剂均购于天津四友化学试剂有限公司。

2实验方法

2.1牡丹皮粗提物的制备

取干燥的牡丹皮约500g，共三组，分别以蒸馏水、50%乙醇、95%乙醇回流提取三次。过滤，蒸干，真空干燥后得丹皮粗提物。

2.2降糖评价方法

取100只健康的昆明种雄性小鼠，体重25-33g。分为五组：正常组、阴性对照组、蒸馏水提取组、50%乙醇提取组、95乙醇提取组，每组20只分笼饲养3天。各组小鼠隔夜禁食不禁水12h。尾静脉注射1%四氧嘧啶的生理盐水溶液，注射容量为0.07ml/mg，注射后恢复正常饮食，并观察造模小鼠体重变化。注射后72h，再次让所有小鼠禁食不禁水6h。眼眶取血，按GOD法测定血糖值。筛选FPG≥11.0mmol/l者作为糖尿病小鼠。

将造模成功小鼠重新分组。正常组不给药，阴性组为0.5%CMC-Na液，各提取物组分别给药200mg/kg。药物以5%CMC－Na为助悬剂。连续给药两周，每周测定一次空腹血糖值FPG。每次测定FPG前均禁食禁水6h，并于取血前1h末次给药。

2.3提取与分离

干燥的丹皮（6.0kg），水回流提取3次，每次2小时，提取物回收至无醇味后补加水至2L通过大孔树脂，先用水洗脱至样品流出量减少，再用95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部分，回收溶剂，得浸膏。浸膏经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇梯度洗脱，继以正相硅胶分配柱色谱、反相ODS柱色谱等方法，分离得到3个化合物，

3结果

3.1丹皮提取物降糖活性测定

造模后小鼠食量明显增加，鼠笼垫料易湿，说明小鼠出现了“三多一少”现象。造模后部分小鼠空腹血糖值FPG>11.1mmol/l，表明造模成功，采用糖尿病病理模型小鼠进行丹皮不同提取部位进行降糖活性评价，结果见表1。

3.2化合物结构确定

化合物1：白色粉末。13C-NMR（CD3OD）δ：83.0（C-2），69.1（C-3），28.9（C-4），157.3（C-5），95.8（C-6），156.9（C-7），96.5（C-8），101.1（C-4a），157.4（C-8a），132.5（C-1’），115.6（C-2’），146.5（C-3’），146.5（C-4’），116.4（C-5’），120.3（C-6’）。13CNMR数据与文献[2]对照一致，鉴定化合物1为（+）-儿茶素。

化合物2：白色针状结晶（氯仿），与三氯化铁反应显蓝黑色。ESI-MSm/z：167[M+H]+，189[M+Na]+，205[M+K]+。与标准品TLC的Rf值及显色行为一致，故化合物2鉴定为丹皮酚。

化合物3：白色固体，ESI-MSm/z：209[M+K]+。1H-NMR（CD3OD）δ：7.04（2H，s，H-2，6）。13C-NMR（CD3OD）δ：121.9（C-1），110.3（C-2，6），146.4（C-3，5），139.6（C-4），170.4（CO）。与标准品TLC的Rf值及显色行为一致，故化合物3鉴定为没食子酸。

4讨论

实验结果表明，丹皮不同溶媒提取物均具有一定降糖作用，以水提取物降糖效果最为明显。酚酸类化合物及单萜类化合物是牡丹皮的主要有效成分，本研究对牡丹皮有效成分进行分离活性追踪并分离出3种化合物，儿茶素、没食子酸、丹皮酚。丹皮酚是牡丹皮主要有效成分之一。通过本研究，为以后更好的研究牡丹皮有效成分的分离以及丹皮酚抗肿瘤活性奠定了基础。

参考文献：

[1]简秀梅.牡丹皮的药理研究与临床新用.中国误诊学杂志.2008，22（8）：5521-5522.

[2]MorimotoS，NonakaGI，NishiokaI，eta1.Tanninsandrelatedcompounds.XXIX.sevennewmethylderivativesofflavan-3-olsanda1，3-diarylpropan-2-olfromCinnamomumcassia，C.obtusifoliumandLinderaumbellatevar.membranacea[J].ChemPharmBull，1985，33（6）：2281.