盐酸氨溴索注射液杂质稳定性研究

盐酸氨溴索注射液杂质稳定性研究

江兆英常建晖马宏伟周忠山

江兆英常建晖马宏伟周忠山

(山东阿如拉药物研究开发有限公司山东济南250101)

【摘要】目的研究盐酸氨溴索注射液的已知杂质对照品溶液稳定性。方法采用不同溶剂溶解盐酸氨溴索注射液的已知杂质对照品，通过HPLC方法对已知杂质对照品溶液的稳定性进行研究；已知杂质进行方法学验证。结果流动相为溶剂，混合杂质对照品溶液中杂质C转变为杂质E，杂质C对照品溶液及其不稳定；溶解杂质B对照品，杂质B与盐酸氨溴索相互转变；更改甲醇为溶剂，各杂质对照品的甲醇溶液稳定。结论采用HPLC法测定盐酸氨溴索注射液有关物质，甲醇作为杂质对照品的溶剂，测定数据稳定，结果准确、重现性好。能准确有效的检测出产品中已知杂质的含量。

【关键词】盐酸氨溴索注射液杂质稳定性溶剂HPLC

【中图分类号】R927【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）39-0059-02

盐酸氨溴索注射液为粘液溶解剂，能增加呼吸道粘膜浆液腺分泌，减少粘液腺分泌，从而降低痰液粘度；还可促进肺表面活性物质的分泌，增加支气管纤毛运动，使痰液易于咳出。适用于下述患者伴有痰液分泌不正常及排痰功能不良的急性、慢性呼吸道疾病，例如慢性支气管炎急性加重、喘急性支气管炎、支气管扩张、支气管哮喘、肺炎的祛痰治疗。参考标准号为YBH21062005的盐酸氨溴索注射液国家标准，在研究中发现EP标准中购买的已知杂质，以流动相作为溶剂溶解杂质对照品的情况下极不稳定，影响本品有关物质的测定，因此我们进行仔细研究，最终确定以甲醇作为溶剂，能够更加准确的检出盐酸氨溴索注射液中有关物质的含量，从而确保药品安全有效。

1仪器与试药

1.1仪器岛津SPD-M20A二级管阵列检测器，LC-20AT泵；AUW220D电子天平(岛津公司)；安捷伦色谱柱（150×4.6mm，5μm）

1.2试药盐酸氨溴索对照品(批号：100599-200502)是由中国药品生物制品研究院提供；EP药典中列出的已知杂质A(批号20120311）、E(批号20120525），化工级；杂质B(批号11025-156)、C（批号11023-158〕、D(批号11035-160)上述试剂均由百灵威医药公司提供；盐酸氨溴索注射液本公司制剂室提供（批号20120909）；盐酸、甲醇（禹王化学试剂公司）乙腈（DNK试剂公司）。

2方法与结果

2.1高效液相色谱法色谱条件检测波长：250nm、238nm，流速：1.0mL/min；色谱柱：热电C8柱（150×4.6mm，5μm），流动相：磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二铵2g溶于800mL水中，用磷酸调节pH值4.0，再加水稀释成1000mL）-乙腈（45:55），进样量20μL，柱温：室温。

2.2溶液稳定性试验

2.2.1供试品溶液的稳定性取20120909批盐酸氨溴索注射液5mL，置100mL棕色量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，室温放置，分别于0、2、4、6、8小时进样1次，计算杂质B峰面积由1814增加至11289增幅约为45%、杂质E未检出，结果表明盐酸氨溴索有关物质测定供试品溶液不稳定，建议立即进样。

2.2.2杂质B、E以甲醇为溶剂的稳定性研究

精密称取杂质B、E对照品适量，用甲醇溶解并稀释成6μg/mL溶液，室温放置，分别于0、2、4、6、8小时进样1次，计算杂质B峰面积由53449增加至54373，RSD%为0.86；E峰面积由75396增加至73555，RSD%为0.91；结果表明，杂质B、E对照品的甲醇溶液在8小时内稳定。

2.2.3杂质B对照品在流动相与甲醇溶剂中稳定性研究

当供试品溶液用流动相溶解在放置的过程中主峰面积不断的降低而杂质B面积不断的增加，见2.2.1供试品溶液稳定试验结果；更改为甲醇作为溶剂后，溶液很稳定，结果如下。表1流动相与甲醇为溶剂杂质B溶液的稳定性结果

溶剂放置时间主(RT)杂质B(RT)主峰（A）杂质B（A）

流动相30min4.5817.3851657165707

2h4.6967.42645473151019

3h4.7097.42257239141287

10h4.7437.49893319112027

甲醇30min未检出7.482—396931

1h—7.468—401653

20h—7.487—401356

2.2.4杂质C与E的研究

精密称取杂质C、E对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1mL中约含杂质C、E6μg的溶液，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，结果，两杂质出现相同保留行为，结果见图(1～2)峰纯度良好（纯度指数为0.9999），由试验结果表明杂质C、E以流动相为溶剂时不稳定，杂质C转变为杂质E。

备注：A、B、C、D、E分别代表杂质对照品；主峰：盐酸氨溴索

2.4线性关系试验精密称取盐酸氨溴索杂质B对照品18.79mg、杂质E对照品7.86mg，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；分别精密量取贮备液0.2、0.6、1.0、1.4、1.8mL，分别置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密量取上述系列溶液各20μL注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归，回归方程为Y=28895C（μg/mL）－1744.2相关系数：r=0.9999；Y=90157C（μg/mL）+4721相关系数：r=0.9998。结果表明盐酸氨溴索杂质B在浓度为0.376～3.382μg/mL的范围内线性关系良好，盐酸氨溴索杂质E在浓度为0.157～1.415μg/mL的范围内线性关系良好。

2.5检测限和定量限试验以信噪比3:1为指标，杂质B的检测限约为2.26ng、杂质E约为0.942ng；以信噪比10:1为指标杂质B的定量限约为7.52ng、杂质E约为3.14ng。

2.6重复性试验精密量取同一批号的盐酸氨溴索注射液适量，用流动相稀释并制成每1mL中含0.375mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液（临用现配），共6份；分别精密称取杂质B、E对照品适量，精密称定，用甲醇溶解并定量稀释制成每1mL中含杂质B1.875g/mL的溶液、杂质E0.75g/mL的溶液，摇匀，作为杂质B、E对照品溶液。依法测定杂质B与杂质E的含量，结果杂质B、E的含量平均为0.02%、0.01%；RSD%分别为3.8%、4.6%。

2.7杂质B、E回收率试验精密量取20120909批盐酸氨溴索注射液5mL，置100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别精密称取杂质B19.36mg、杂质E7.58mg，精密称定，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；精密量取贮备液5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品溶液；另精密量取贮备液4mL、5mL、6mL各三份，分别置50mL量瓶中，加盐酸氨溴索注射液（批号20120909）2.5mL，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为回收率测定供试品溶液（临用现配）。精密量取上述溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按杂质对照品外标法以峰面积计算杂质B、E的检出量，并计算回收率，杂质B的回收率平均值为101.29%，RSD%1.22；杂质E的回收率平均99.59%，RSD%0.74。结果表明本方法准确度良好。

3讨论

3.1盐酸氨溴索注射液有关物质检查时，流动相为溶剂时，溶液不稳定；杂质B峰面积不断增加，在8小时内峰面积由1814增加至11289，主峰面积也不断的减少；由试验结果可知杂质B以流动相为溶剂与主成分相互转变，很不稳定。为了更严格的控制产品的质量，检测样品中有关物质时用流动相为溶剂，杂质B对照品溶液配制采用甲醇作为溶剂。

3.2通过上述试验，可知杂质C以流动相为溶剂时，保留行为与杂质E一致，而且光谱吸收一致，峰纯度良好，由谱图可知杂质C在流动相中完全转变成了杂质E;甲醇为溶剂时杂质C没有转变成杂质E，约在45分钟左右出峰。

3.3为了严格的控制产品的质量，因此杂质E对照品也采用了甲醇为溶剂来溶解。且通过上述方法学的验证，数据稳定、方法准确、重现良好。

参考文献

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[3]付建，苏贵勇，赵海桥，等．HPLC法测定盐酸氨溴索注射液的含量和有关物质[J]．齐鲁药事，2012，31(02)：84-87