中小型血站8混样核酸检测室内质控的思考及实践

中小型血站8混样核酸检测室内质控的思考及实践

吴安明（通讯作者）李仕星黄敏

（黔南州中心血站贵州都匀558000）

【摘要】目的：探寻中小型血站8混样核酸检测室内质控解决方案，从而最大限度发挥室内质控在检测中的作用。方法：（1）使用HAMELTON核酸混样提纯系统（安利斯达）将待检测样本上载架时补足8的倍数，不足时用阴性血浆补足，配置好的室内质控品与6份阴性血浆或平衡液跟随已补足8的倍数待检测样本后摆放。（2）苏州华益美生物科技有限公司和上海浩源生物科技有限公司对以上样本进行8混样进行核酸提纯，实时荧光PCR扩增分析仪进行提纯后核酸模板进行扩增检测，连续收集30次检测值进行分析。结果：（1）室内质控品检测程序最大限度与待检样本一致，均为8混检模式。（2）北京康彻斯坦HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA1，混合均能检出。且HBV-DNA、HCV-RNA-18℃下保存10日无明显变化，HIV-RNA1有所降解，一周内可控。结论：8混样核酸检测室内质控在HAMELTON核酸混样提纯系统（安利斯达）中采用补足阴性样本及三项混合检测操作方法适合于中小型血站应用。

【关键词】核酸检测；8混样检测；实时荧光PCR；室内质控；安利斯达

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2017）26-0325-02

血液质量直接关系到受血者和献血者的身体健康和生命安全,故对血液的采集、检验和管理是血液质量的保证。核酸检测运用于采供血系统血液筛查，极大程度上缩短了经血传播传染病的窗口期，从而保证血液安全性。我国自2014年以来，各地区积极响应国家政策，各地区中小型血站，特别是各中心血站陆续开展血液核酸检测，但由于经验和各方面知识匮乏，且因中心血站筛查标本量较少，如检测过程中使用和大型血站室内质控单独汇集的检测方法，导致试剂利用率较低，会很大程度增加检测成本，同时，在标本排布上也面临重重困难，不易于日常操作。从而大多数实验室使用混合后溶液进行单检模式进行室内质控的检测，导致室内质控检测模式与筛查标本存在较大差异，从而不能充分发挥室内质控在整个检测过程中的作用。因此，我实验室在检测过程中不断探索，并经过一段时间的使用验证，总结出一套目前实用于中小型血站实验室核酸检测的室内质控检测方法。

1.材料与方法

1.1标本来源

（1）常规筛查标本：无偿献血者留样奥地利菲可替生产的带分离胶EDTA抗凝管标本。（2）室内质控品：北京康彻斯坦HBV-DNA(500IU/ML)、HCV-RNA(2000IU/ML)、HIV-RNA1(2000IU/ML)规格：1ML，浓度均为S9，且均为液体型）

1.2仪器与试剂仪器

（1）HAMELTON核酸混样提纯系统(安利斯达)核酸提纯分析仪；（2）EZb-核酸提纯分析仪；（3）ABI7500实时荧光PCR扩增分析仪。

试剂：（1）苏州华益美生物科技有限公司乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒(1＋2型)PCR-荧光法检测试剂盒（规格：48T，批号：MA20140904，效期：2016-04-20）；（2）上海浩源生物科技有限公司乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒(1型)PCR-荧光法检测试剂盒（规格：48T，批号：MF20141228，效期：2015-12-07）。

1.3操作

1.3.1室内质控品的配置：开始实验前一天或几天配置好室内质控，配制方法为北京康彻斯坦HBVDNA、HCVRNA、HIVRNA及已知阴性血浆比例为200ul＋140ul＋960ul＋100ul，充分混匀后平均分装与5支1.5ml离心管、2.0ml反应管(螺口)或5.0ml(螺口)主反应管内，保存于-18℃，每次检测只需取一支室温平衡后混匀进行检测(经一段时间对比，该配置浓度均适用于上述两厂家试剂)。

1.3.2检测标本的排布：将离心并挑出酶免不合格的待检测标本开盖上架，将待检测样本上载架时补足8的倍数，不足时用阴性血浆或平衡液补足，待检测标本补足后为8的奇数倍时，配置好的室内质控品与6份阴性血浆或平衡液跟随已补足8的倍数待检测样本后摆放，且室内质控品在这7个位置上为非固定，每次实验均不同。待检测标本补足后为8的偶数倍时，配置好的室内质控品与7份阴性血浆跟随已补足8的倍数待检测样本后摆放，且室内质控品在这8个位置上为非固定，每次实验均不同。为使检测过程中室内质控品与筛查标本最大限度一致，我实验室均使用已知检测结果为无反应性筛查标本补足。其他检测步骤由专业技术人员严格按照试剂盒使用说明书和本血站的标准操作规程进行操作。

2.结果

2.1苏州华益美生物科技有限公司试剂盒室内质控检测结果见下表1。

从表1数据结果观察可见,苏州华益美生物科技有限公司试剂盒室内质控检测结果HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA1均为检出。

2.2上海浩源生物科技有限公司试剂盒室内质控检测结果见下表2。

从表1数据结果观察可见,上海浩源生物科技有限公司试剂盒室内质控检测结果HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA1均为检出。

3.结论与讨论

由于HAMELTON核酸混样提纯系统（安利斯达）为了节约混样时间，软件编程计算逻辑如下：满足64样本时8通道同时转移标本；未满足64样本,满足32样本时4通道同时转移标本；未满足32样本,满足16样本时2通道同时转移标本；当小于8份标本时，仪器则每个通道分开转移。通过上述实验比较可知8混样核酸检测室内质控在安利斯达核酸混样提纯系统中采用补足阴性样本，三项混合检测的操作方法，不但使室内质控检测流最大限度与常规检测标本检测流程一致，而且操作简单，只需将常规检测标本用已知阴性标本补足8的倍数，然后在其后跟随6份已知阴性标本和已配置好的室内质控品即可；在保证血液质量的同时增加了室内质控品的使用率，降低检测成本，非常适合于中小型血站应用。

【参考文献】

[1]《全国临床检验操作规程》，中华人民共和国卫生部医政司编，主编：叶应妩、王毓三.

[2]《医疗机构临床基因扩增管理办法》卫办医政发〔2010〕194号.

[3]《血站核酸检测工作导则(2016版)》中华人民共和国国家卫生计生委.

[4]《血站技术操作规程（2015版）》，中华人民共和国国家卫生计生委.