健脾清化方对糖尿病鼠胰岛素抵抗的作用及肝脏PI3K/AKT信号通路影响的研究

健脾清化方对糖尿病鼠胰岛素抵抗的作用及肝脏PI3K/AKT信号通路影响的研究

张琪

张琪黑龙江省黑河市中医医院中医内科黑龙江黑河164300

【摘要】目的：分析研究健脾清化方对糖尿病鼠胰岛素抵抗的作用及肝脏PI3K/AKT信号通路影响。方法：选取24只健康雄性大鼠进行2型糖尿病造模，并将其随机均分为观察组和对照组，其中观察组造模后行健脾清化方灌胃治疗，对照组行生理盐水灌胃治疗，对比两组大鼠胰岛素抵抗的作用及肝脏PI3K/AKT信号通路表达情况。结果：两组大鼠治疗前血清胰岛素水平及肝脏PI3K/AKT表达水平差异无统计学意义，灌胃治疗后观察组大鼠血清胰岛素水平及肝脏PI3K/AKT表达水平显著降低，并优于对照组（p＜0.05）。结论：健脾清化方可有效降低2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗情况，其作用路径可能通过肝脏PI3K/AKT信号通路完成。

【关键词】健脾清化方；糖尿病鼠；胰岛素抵抗；PI3K/AKT信号通路【中图分类号】R587.1【文献标识码】A【文章编号】1276-7808（2015）-03-239-012

型糖尿病是糖尿病最为常见的一种分型，本病多见于35岁以上人群。发病患者常伴胰岛素抵抗状态，早期症状不明显，部分患者可能伴口渴、乏力以及微血管并发症，随着疾病的发展，患者将出现肥胖、疲乏等症状，并可能累及其他系统功能。中医将2型糖尿病归属于“消渴”的范畴中，并认为清胃泻火、滋阴固肾、疏肝清热是本病的重要治疗原则[1]。本次研究中，我们对24只健康雄性大鼠进行2型糖尿病造模，并进行健脾清化方灌胃治疗，旨在分析健脾清化方对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用及肝脏PI3K/AKT信号通路影响1.资料与方法1.1临床资料选取24只健康雄性大鼠（上海西普尔-必凯实验有限公司，合格证号SCXK（沪）2008-0016），周龄8周，体质量200±25g。大鼠于25℃、45%湿度环境下喂养，自由饮水，普通食疗喂养。

1.2方法24只大鼠常规喂食1周后开始给予高糖高脂饲料喂养（标准饲料基础上添加蔗糖、猪油、蛋黄，热能含量为25.8kJ/kg），喂养4周后给予大鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素（上海纪宁实业有限公司，USP级，98.5%），15mg/kg，1次/d，持续3d。检测大鼠空腹血糖水平，以血糖量16.7mmol/L为模型成功判定标准。造模成功后将大鼠随机均分为两组，其中观察组大鼠12只给予3.5g/kg健脾清化方（党参10g、生黄芪10g、苍术8g、黄连5g、制大黄8g、草果仁5g[2]，取500ml水煎煮，得药100ml）灌胃治疗，1次/d，持续6周；对照组大鼠给予同剂量生理盐水灌胃，1次/d，持续6周。

治疗6周后选用戊巴比妥钠麻醉大鼠，抽取5ml腹主动脉血，选用放射免疫法检测血清胰岛素，试剂由解放军总医院科技开发中心放免所提供操作严格按试剂盒说明书进行。颈椎脱位处死大鼠，取出大鼠肝脏，称重，液氮保存，选用实时荧光定量PCR技术检测PI3K、AKT表达水平选用将标本置入裂解液内，研磨，离心，取上清，煮沸，电泳，转膜，丽春红染色，TBST清洗，含脱脂奶粉的TBS-T液内封闭，根据反转录酶将RNA反转录为cDNDA，PCR扩增，检测。Q-PCR仪（abi7900HT）由APPLIEDBIOSYSTEMS生产，凝胶图像分析仪和分光光度仪由上海精宏实验仪器厂生产，试剂盒由美国ABCAM公司生产。

1.3统计学分析将所得数据经SPSS18.0进行统计学分析，计量资料采用（x±s），两组间采用t检验；P＜0.05表示差异具有统计学意义，P＜0.01表示差异显著，P＞0.05表示差异无统计学意义。

2.结果两组大鼠治疗前血清胰岛素水平及肝脏PI3K/AKT表达水平差异无统计学意义，灌胃治疗后观察组大鼠血清胰岛素水平及肝脏PI3K/AKT表达水平显著降低，并优于对照组（p＜0.05）。

3.讨论PI3K/AKT信号通路是胰岛素重要下游分子通路之一。生物体在进食后，胰岛β细胞将合成大量胰岛素作用与肝脏表面的胰岛素受体，诱使受体内的β亚基酪氨酸位点磷酸化，磷酸化的胰岛素首要将激活-1/2酪氨酸，最终激活PI3K。激活状态的PI3K可促进二磷酸磷脂酰肌醇转化为三磷酸磷脂酰肌醇，并作为第二信使激活AKT，活化状态的AKT可调节多种下游分子以增加糖原的合成，此时磷酸化FOX01将诱使其活性降低，进而抑制糖异生，进而降低血糖[3]。

健脾清化方包含党参、生黄芪、草果仁、苍术、黄连等多味中药材，其中党参具有生津益气之疗效，可治疗体倦无力、气血虚亏等症[4]；生黄芪具有利尿泻毒、补气固表疗效，草果仁具有燥湿温中之用，苍术具有燥湿健脾之能，多药合用具有优秀的抗炎、抗氧化，改善大鼠肝肾病理的疗效[5]。本次研究中，我们发现灌胃治疗后观察组大鼠血清胰岛素水平及肝脏PI3K/AKT表达水平显著降低，并优于对照组，这表明健脾清化方在降低2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗上具有显著疗效，并且该疗效可能通过PI3K/AKT信号通路完成。

参考文献：[1]马晓红，何立群.健脾清化方调节局灶节段硬化大鼠炎症信号通路的机制[J].南方医科大学学报，2013，11：1577-1582.[2]陈晛，何立群.健脾清化方对肾纤维化大鼠肾功能、蛋白尿及肾组织Col-Ⅳ表达的影响[J].南京中医药大学学报，2013，29（06）：548-552.[3]马晓红，王东，王云满，等.健脾清化方对慢性肾衰大鼠肾组织TGF-β1mRNA及CTGFmRNA表达的影响[J].中国中医药科技，2013，20（02）：122-123，128.[4]邹赟，朱祎，邵命海，等.健脾清化方对5/6肾切除大鼠ATII/NADPH氧化应激通路的干预作用[J].中南大学学报（医学版），2013，08：779-784.[5]陈晛，何立群.健脾清化方在肾小球硬化大鼠中抗肾纤维化的作用及其机制[J].中国医学科学院学报，2014，36（05）：461-465.