HPLC法同时测定复方盐酸二甲双胍片中格列美脲和盐酸二甲双胍的含量

HPLC法同时测定复方盐酸二甲双胍片中格列美脲和盐酸二甲双胍的含量

黄锦婷黄增键

中山大学附属第三医院广东广州510630

【摘要】目的：建立复方盐酸二甲双胍片中格列美脲和盐酸二甲双胍的HPLC含量检测方法。方法：流动相为0.025%十二烷基磺酸钠溶液（33%）和磷酸二氢钠的0.03mol/L甲醇溶液（67%）组成，用磷酸将流动相pH值调至3.5，色谱柱为VP-ODS（250mm×4.6mm），柱温控制在30℃，检测波长为215nm，流速控制在1.2ml/min。结果：进行HPLC检测系统适应性试验，试验内容包括精密度试验、重现性试验、稳定性试验和回收率试验，确立了色谱条件和建立了标准曲线，盐酸二甲双胍和格列美脲在标准曲线范围内线性关系良好。结论：复方盐酸二甲双胍片中二甲双胍和格列美脲的HPLC检测法简便、可靠，能满足日常含量检测要求。

【关键词】HPLC；盐酸二甲双胍；格列美脲

复方盐酸二甲双胍片中两种有效成分的含量比较大，传统HPLC检测方法繁琐，而且该含量检测方法的重现性较低，为此本文通过改变HPLC的色谱条件，建立了更为高效和可靠的HPLC检测方法，现将应用效果汇报如下。

1仪器和试药

1.1仪器

日本岛津LC-20A高效液相色谱仪，色谱工作站为LCsolution，检测器为SPD型紫外分光光度计，色谱柱为日本岛津的VP-ODS（250mm×4.6mm）色谱柱，酸度计为上海雷磁PHS-2型台式酸度计。

1.2试药

本文所用试剂磷酸二氢钠、甲醇、磷酸和乙腈均为色谱纯级，上述试药都采购自上海化学试剂厂。复方盐酸二甲双胍片（北京京丰制药有限公司，批号20110425），盐酸二甲双胍及格列美脲对照品购自中国药品与生物制品检定所。

2实验方法

2.1色谱条件

流动相为0.025%十二烷基磺酸钠溶液（33%）和磷酸二氢钠的0.03mol/L甲醇溶液（67%）组成，用磷酸将流动相pH值调至3.5，色谱柱为VP-ODS（250mm×4.6mm），柱温控制在30℃，检测波长为215nm，流速控制在1.2ml/min，进样量为20μl。按照盐酸二甲双胍计算理论塔板数，塔板数≥3000，检测样本与杂质之间分离度符合要求。

2.2对照品溶液制备

分别精密称取格列美脲和盐酸二甲双胍对照品12.5mg和12.52mg，将格列美脲和盐酸二甲双胍对照品分别置于200ml和100ml容量瓶中，放置格列美脲对照品的容量瓶中加入甲醇溶液至刻度摇匀，精密量取格列美脲甲醇溶液1ml加入放置有盐酸二甲双胍对照品的容量瓶中，加入流动相至刻度摇匀[1]。

2.3标准曲线绘制

将32.15mg盐酸二甲双胍对照品和1.562mg格列美脲对照品置于50ml容量瓶中，加入流动相至刻度摇匀。精密量取上述对照品混合溶液1、3、6、9、12、15ml置于10ml容量瓶中，加入流动相至刻度摇匀，精密量取上述不同含量的混合对照品溶液20μl，依据2.2中的色谱条件，记录每种含量的色谱图，色谱图以峰面积为纵坐标（Y），对照品含量为横坐标（X）[2]。根据检测结果建立标准曲线方程（y=3.97×103X-4.29×102；n=6；r=0.9993），标准曲线方程表明盐酸二甲双胍在0.643-9.645mg之间，峰面积与浓度线性关系良好，格列美脲在0.0312-0.4686mg之间，峰面积与浓度线性关系良好。

2.4供试品溶液制备

取测定样品复方盐酸二甲双胍片去除包衣后研细，精密称量相等于含0.125g盐酸二甲双胍的微细粉末，置于100ml容量瓶中，加入流动相至刻度，摇匀后超声。精密量取上述溶液10ml至100ml容量瓶中，加入流动相至刻度摇匀。

2.5精密度实验

精密量取2.2中配置的对照品溶液，含量相当于0.3215mg/L盐酸二甲双胍和0.7810mg/L格列美脲，按照上述色谱条件连续进样3次，记录每次进样的峰面积和保留时间，根据记录结果计算RSD值。

2.6重现性实验

根据2.4中配置本文所要检测的供试品溶液，按照上述色谱条件连续进样3次，记录每次进样的峰面积和保留时间，根据记录结果计算RSD值。

2.7稳定性试验

按照2.4中配置本文所要检测的供试品溶液，分别于1、3、6、12、18、24h进样检测，记录每次进样的峰面积和保留时间，根据记录结果计算RSD值。

2.8回收率实验

按照2.4中配置本文所要检测的供试品溶液，在配置的供试品溶液中加入浓度分别为0.05、0.10、0.15μg/ml的对照品标准溶液，按照上述色谱条件连续进样3次，记录每次进样的峰面积和保留时间，根据记录结果计算回收率。

3结果

3.1精密度和重现性试验结果

根据2.5的精密度试验方法，格列美脲和盐酸二甲双胍的RSD计算结果均为0.5%，精密度试验结果说明检测仪器性能良好。根据2.6的重现性试验方法，格列美脲和盐酸二甲双胍的含量分别为101.09%和102.13%，两者RSD分别为0.5%和0.6%，重复性试验结果说明本文HPLC检测方法重现性好。

3.2稳定性和回收率试验结果

根据2.7的稳定性试验方法，格列美脲和盐酸二甲双胍的峰面积分别为53297和9012463，两者的RSD分别为0.9%和0.7%，稳定性试验结果表明本文HPLC检测方法在24h内稳定性良好。根据2.8的回收率试验方法，格列美脲和盐酸二甲双胍的回收率分别为98.9%和99.5%，两者的RSD分别为0.6%和0.4%，回收率试验结果表明本文HPLC检测方法回收率准确。

4结论

复方盐酸二甲双胍片是临床中较为常用的降糖药物，该片剂中二甲双胍不仅能增加胰岛素敏感性，而且可有效降低肝糖原输出，片剂中格列美脲除增加胰岛素敏感性外，还可增加体内胰岛素分泌，因此复方盐酸二甲双胍片能获得较为理想的治疗效果。为探寻复方盐酸二甲双胍的HPLC检测方法，本文通过改变HPLC的色谱条件，建立了更为高效、便捷和可靠的HPLC检测方法，试验结果显示，本文采用的检测方法精密度和重现性良好，稳定性和回收率均满足要求，是一种更加准确、可靠的复方盐酸二甲双胍片含量检测方法。

参考文献：

[1]何佩芳，张红，刘辉，等.HPLC法同时测定复方盐酸二甲双胍/沙格列汀渗透泵控释片的含量[J].中国药师，2016，19（1）：25-28.

[2]张丽，廖春，王鑫，等.RP-HPLC法同时测定复方盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍和格列美脲的含量[J].沈阳药科大学学报，2013（5）：362-365.