HPLC法测定注射用普鲁卡因青霉素中青霉素含量

HPLC法测定注射用普鲁卡因青霉素中青霉素含量

王妍

哈药集团制药总厂

【摘要】方法：采用安捷伦C18色谱柱（218mm×4.6mm，5μm），0.2mol/L磷酸二氢钾溶液(含0.16%的三乙胺,氢氧化钾溶液调pH至5.6)-乙腈(80∶20)，检测波长为235nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。结论：本法简便、准确，可用于注射用普鲁卡因青霉素中青霉素的含量测定。

【关键词】注射用普鲁卡因青霉素；含量；测定

注射用普鲁卡因青霉素为普鲁卡因青霉素与青霉素钠(钾)加适宜的悬浮剂与缓冲剂制成的无菌粉末，对梭状芽孢杆菌属、消化链球菌和产黑色素拟杆菌等厌氧菌具良好抗菌作用。注射用普鲁卡因青霉素为长效品种，不耐酸，不能口服，应用仅限于青霉素高度敏感病原体所致的轻、中度感染。本实验采用高效液相色谱法对注射用普鲁卡因青霉素中的青霉素的进行了含量测定。

1仪器与试药

1.1仪器：HS11-1电热恒温水浴锅（上海昨非实验室设备有限公司）；721可见光分光光度计(四川赛恩思仪器有限公司);Waters2695高效液相色谱仪(北京京科瑞达科技有限公司);液相柱温箱(滕州市滕海分析仪器有限公司);TH-UP实验室专用高纯水机(滕州市滕海分析仪器有限公司);德安特分析天平0.1mg(上海升徽电子有限公司);精密电子天平(厦门德量检测仪器有限公司);SB25-12D超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2色谱柱：安捷伦C18色谱柱（218mm×4.6mm，5μm）。

1.3对照品：青霉素购自中国药品生物制品检定所。

1.4试剂：甲醇（青岛雅各化学试剂销售有限公司）、乙腈（青岛雅各化学试剂销售有限公司）、冰醋酸（青岛雅各化学试剂销售有限公司）、磷酸二氢钠（济南汇丰达化工有限公司

）、三乙胺(济南汇丰达化工有限公司)、氢氧化钾（济南汇丰达化工有限公司）、磷酸（济南汇丰达化工有限公司）。

1.5试药：注射用普鲁卡因青霉素

2测定方法确定

2.1色谱条件

依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：0.2mol/L磷酸二氢钾溶液(含0.16%的三乙胺,氢氧化钾溶液调pH至5.6)-乙腈(80∶20)，检测波长：235nm，流速：1.0m?min-1。柱温：30℃。理论板数按青霉素峰计算应不得低于2000。

2.2对照品溶液的制备

精密称取青霉素对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含50?g的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备

取注射用普鲁卡因青霉素适量，精密称取，加5毫升流动相，超声2分钟,过滤，滤液转移至10毫升容量瓶内，即得。

2.4专属性试验

分别对样品进行酸破坏、碱破坏、氧化破坏、加热破坏将降解物制成阴性样品，依上述方法测定，结果在青霉素出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

2.5精密度试验

精密称取青霉素对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为50?g?mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.63%，表明本方法精密度良好。

2.6对照品的线性考察

精密称取青霉素对照品，分别配置浓度为20微克/毫升、40微克/毫升、60微克/毫升、80微克/毫升、100微克/毫升、120微克/毫升、140微克/毫升、160微克/毫升、180微克/毫升、200微克/毫升溶液。分别按照实验条件测定，记录色谱峰。以峰面积(Y)为纵坐标，对照品进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，青霉素在20～200?g?mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.7准确度试验

精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的青霉素对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率为99.3%，RSD=0.76%。结果表明此方法的回收率良好。

3结论

分别考察乙腈-0.1%冰醋酸（27：73），0.05mol.L-1磷酸盐缓冲液-乙腈(体积比为50∶50)，

甲醇-0.2%磷酸溶液（40：60），乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH6.5)(36:64),磷酸盐缓冲液（pH4.5）-甲醇-乙腈（80：10：10）,0.2mol/L磷酸二氢钾溶液(含0.16%的三乙胺,氢氧化钾溶液调pH至5.6)-乙腈(80∶20)不同比例的流动相，结果以0.2mol/L磷酸二氢钾溶液(含0.16%的三乙胺,氢氧化钾溶液调pH至5.6)-乙腈(80∶20)为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用0.2mol/L磷酸二氢钾溶液(含0.16%的三乙胺,氢氧化钾溶液调pH至5.6)-乙腈(80∶20)为流动相。本实验表明此方法可用于注射用普鲁卡因青霉素中青霉素的含量测定。注射用普鲁卡因青霉素中青霉素的含量为标示量的95-105%。

【参考文献】

[1]郎友;单艺;满朝新;王今雨;董鑫悦;杨相宜;姜毓君;;超高效液相色谱-串联质谱法测定乳及乳制品中青霉素类药物残留量[J];中国乳品工业;2013年05期

[2]郭萌萌;李兆新;谭志军;吴海燕;韩现芹;冷凯良;翟毓秀;;分散固相萃取/液相色谱-串联质谱法测定水产品中的8种青霉素残留[J];分析测试学报;2011年09期

[3]张其洁;;高效液相色谱分析青霉素及头孢菌素类抗生素[J];国外药学(抗生素分册);1983年02期

[4]赵华;卞永东;王德祥;汤勇;黄传国;液相色谱-串联质谱法测定动物性食品中20种抗生素类药物残留[J];化学分析计量;2011年01期

[5]陈瑞春;贾海涛;艾连峰;郭春海;高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶和奶粉中9种青霉素类药物残留量[J];食品科学;2011年18期