糖尿病合并肺结核患者肺部病灶组织中细胞因子的表达及意义

糖尿病合并肺结核患者肺部病灶组织中细胞因子的表达及意义

王亚萍

牡丹江市康安医院，结核科157000

摘要:目的:比较TNF-a、IFN-y组织和IL-10、肺结核、糖尿病患者合并糖尿病肺损伤的单个肺结核和肺结核患者，合并肺结核患者细胞免疫功能的变化及其意义。方法:应用南非广播公司免疫组织化学方法检测13例肺良性病变风险,单一的肺结核患者45例,15例糖尿病合并肺结核患者的肺部病变组织中TNF-a,干扰素-y和IL-10的表达,阳性细胞的平均光密度(AOD)比较,和定量的AOD值采用秩变换后,方差分析和LSD测试方法比较。结果：TNF-a、IFN-y、IL-10在坏死区炎性反应带显著表达，糖尿病组TNF-a低于结核组(P<0.05)，IL-10的AOD值高于结核组(P<0.05)。肺结核组TNF-a的AOD值高于对照组(PBBB00.05)，IL-10的AOD值低于对照组(P<0.05)。结论:TNF-a、IFN-y、IL-10参与了结核病局部免疫反应。糖尿病患者局部细胞免疫反应下降。糖尿病患者局部组织细胞因子的调控可能成为糖尿病合并肺结核患者的一种新的免疫治疗方法。

关键词:TNF-a;干扰素-v;IL-10;糖尿病;结核病

1.资料与方法

1.1一般资料：选择2015年5月至2016年10月在胸外科住院的肺叶切除患者，男60例，女24例，年龄20-68岁。(1)对照组：同期纳入18例良性肺部疾病，正常肺组织周围肺组织病变的手术切除。其中男12例，女6例，年龄(51±5)岁，其中炎性假瘤4例，错构瘤2例，曲霉菌2例，支气管扩张8例，肺炎2例。(2)结核组:选择住院的单肺结核患者50例，男32例，女18例，年龄（45±7）岁。(3)糖尿病合并肺结核组：同期入选糖尿病合并肺结核患者16例，其中男性11例，女性5例，平均年龄(50±6)岁。均为2型糖尿病，有2?15年的病史。术前平均血糖(9.8±3.1)mmol/L，术后平均血糖（8.1±2.4）mmol/L，与术前相比差异无统计学意义(P>0.05);年龄差异无统计学意义（P>0.05）。诊断标准：结核病的诊断经病理证实。2型糖尿病诊断标准到2010年ADA糖尿病：（1）糖化血红蛋白A1c≥6.0％；(2)空腹血糖FPG≥6.5.0mmol/L，空腹定义为无卡路里摄入量至少8h；（3）在口服葡萄糖耐量试验中1.5小时葡萄糖12.2mmol/L；(4)高血糖或高血糖典型症状患者，随机葡萄糖12.2mmol/L。在没有确定高血糖时，标准（1）—（3）应经反复测试确认。血脂异常的诊断标准参考《中国成人血脂异常指南》[3]。排除标准:结合免疫系统相关疾病、心脏和肾脏衰竭、支气管结核、癌症;人类免疫缺陷病毒阳性;近来免疫调节剂的应用[2]。

1.2方法:（1）标本收集：分别收集4组肺组织，用生理盐水冲洗。固定11％甲醛溶液一天一夜后，低温包埋石蜡制成石蜡切片。（2）免疫组化方法：采用免疫组织化学SABC法染色后，将第一抗体进行兔抗人多克隆抗体染色，工作浓度均为1:145，第二抗山羊抗兔IgG，按照套件说明操作。（3）结果判断：在显微镜下观察各组HE染色的组织学结构，观察各组免疫组织化学反应的部位，分布及染色强度。各切片阳性细胞呈棕褐色，棕黄色，阳性细胞数>5.5％，均为阳性。每例均配备HE切片作对照观察，并对阳性对照和阴性对照，分析图片，计算平均光密度值（averageopticalintensityAOD）。糖尿病患者接受常规糖尿病治疗，治疗轻度糖尿病患者口服降糖药物，如格列本脲和阿卡波糖。根据中度糖尿病患者的空腹血糖和糖化血红蛋白水平制定质量计划，严重患者加胰岛素注射：空腹血糖>13.7mmol/L：生理盐水450m1+胰岛素21u静脉滴注，平均7u/h;空腹血糖下降至12.2-13.7mmol/L：5.1％糖盐水静滴,两组患者入组后均接受肺结核强化治疗

药为异烟肼、利福平、乙胺丁醇、乙酰胺，根据症状进展选择用药剂量和次数,强化治疗的时间为2.5个月。痰检后2.5个月，阳性持续维持1.5个月的强化治疗，阴性患者接受异烟肼联合利福平巩固治疗，巩固治疗为期9?11个月。

2.结果

治疗6个月后，两组患者痰菌阴转率，肺病灶吸收率和闭孔率均显著增高（P<0.05），痰菌阴转率（X2=11.132，P<0.05）TNF-α和IFN-γ在治疗前均明显低于对照组，IL-10明显高于对照组（P<0.05）。对照组TNF-α，IFN-γ和IL-10免疫组化染色结果显示，对照组细胞质和膜基质有少量棕黄色改变;肺结核组在上述部位表达增加细胞质和膜呈棕黄色，以背景颜色为主，分布不均匀，呈散在分布，局灶性表达;IL-10在糖尿病和肺结核组中表达最弱，IL-10主要在细胞质中ASM和膜，是结核病组和糖尿病和结核病组中最弱的。2.2TNF-α，IFN-γ和IL-10AOD计数结果与对照组相比，糖尿病合并肺结核患者TNF-aAOD值明显降低（P<0.01）。与肺结核组相比，糖尿病肺结核患者TNF-α水平明显低于肺结核组（P<0.01）。与对照组相比，肺结核组IL-10的AOD值糖尿病肺结核组明显低于对照组（P<0.05）;与肺结核组比较，糖尿病肺结核组IL-10的AOD值较高（P<0.05）。

3.讨论

在宿主抗TB免疫中，TNF-α协同IFN-γ通过嗜中性粒细胞和巨噬细胞的作用将巨噬细胞和淋巴细胞募集至结核，并用IL-3定位炎症反应。发挥抗性作用对结核分枝杆菌感染。IL-10能增加精氨酸酶1的活性，使氮中间体显著减少，可一般削弱巨噬细胞的功能，并抑制保护性细胞因子TNF-α，IFN-γ的产生，使慢性结核分枝杆菌感染较大肺部组织复制的数量。结核病是糖尿病的一个重要危险因素，受到广泛关注，Vallerskog等对糖尿病大鼠的研究发现，给予低剂量，低毒力的结核分枝杆菌气溶胶感染大鼠，白细胞聚集延迟，从肺组织到结核分枝杆菌的淋巴结传播速度也有所延缓，在早期和中期与糖尿病和结核病患者血清中IFN-γ的相关性较低也明显减少。因此，在结核分枝杆菌感染过程中，细胞因子对机体的免疫应答至关重要。Th1/Th2细胞因子的失衡可能是导致结核分枝杆菌易感性和延迟免疫反应的主要原因，因此去除结核分枝杆菌并不容易。另外，Baker等人显示IL-10还在减少保护性细胞因子如TNF-α和IFN-γ的释放中起作用。结论：糖尿病合并肺结核患者肺组织TNF-α，IFN-γ水平明显降低，IL-10水平显著升高，这是影响肺结核患者肺部病变改善的重要因素。因此，在今后的治疗中，患者应注意维持血糖和炎性细胞因子，以改善局部免疫功能，改善临床预后[1]。

本研究发现肺结核患者TNF-α和IFN-γ水平明显高于对照组（P>0.05），而对照组均来自炎性假瘤和支气管炎性细胞的扩张和感染，如细菌感染，所以炎性细胞因子参与炎症因子TNF-α，IFN-γ水平也升高,使两组间差异减少。IFN-γ水平明显低于单纯肺结核组和对照组。Th1型细胞免疫功能受损，在糖尿病肺结核患者中，免疫反应迟缓，不利于机体对结核分枝杆菌的清除。

参考文献

[1]彭家孟,王斌,何晖.炎性因子在糖尿病合并肺结核患者肺部病灶组织表达对患者预后的影响分析[J].中国地方病防治杂志,2014,29(05):369-370.

[2]张放,杨飞.糖尿病合并肺结核患者肺部病灶组织中细胞因子的表达及意义[J].中国医科大学学报,2014,43(04):313-315+319.

[3]叶文婕,曹建峰.糖尿病并发症的临床分析[J].糖尿病新世界,2015(13):85-86.