两个不同厂家的格列比嗪片在健康人体生物利用度的研究

两个不同厂家的格列比嗪片在健康人体生物利用度的研究

黄天文

黄天文（广西肿瘤医院广西南宁530021）

【摘要】目的比较两个不同厂家的格列比嗪片的人体药动学参数和生物利用度。评价二者的生物等效性。方法24名男性健康志愿者随机交叉单剂量口服5mg受试制剂或参比制剂，应用高效液相色谱法测定血液中格列比嗪浓度。并用3P97程序对实验数据进行统计处理。结果单剂量口服受试及参比格列比嗪片5mg的Tmax分别为：2.85±1.44h和2.76±1.13h；Cmax：320.80±96.19mg·L-1和301.15±92.42mg·L-1；t1/2：3.02±1.06h和3.53±1.01h；AUC0-15：2136±580.82mg·h-1·L-1和2033.23±506.46mg·h-1·L-1；AUC0-∞：2281.22±520.93mg·h-1·L-1和2106.94±638.60mg·h-1·L-1。试验格列比嗪片的相对生物利用度为(101.7±10.5)％。结论两个不同厂家的格列比嗪片具有生物等效性。

【关键词】格列比嗪生物利用度HPLC

【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）18-0372-02

格列比嗪为磺脲类口服降糖药，主要作用于胰岛β细胞，促进内源性胰岛素分泌，抑制肝糖原分解并促进肌肉利用葡萄糖，还可以改变胰岛素靶组织对胰岛素的反应性[1]。本实验通过测定血浆中格列比嗪的浓度，观察健康志愿者口服江西泽众制药厂研制的格列比嗪片后的血药浓度经时过程，估算相应的药代动力学参数，并以苏州中化药品工业有限公司生产的格列比嗪片为参比制剂，对两种制剂进行生物利用度和生物等效性评价，为临床用药提供参考依据。

1.仪器与试药

日本岛津LC-10ADHPLC系统，包括LC-10AD泵，RF-10AXL荧光检测仪，Reheody7725I进样伐。WDL-95色谱工作站（Ver.3.10，中科院大连化学物理研究所），Sartorius1/10万电子天。

受试制剂格列比嗪片，5mg/粒，江西泽众制药厂，批号20121101。参比制剂格列比嗪片，5mg/粒，苏州中化药品工业有限公司生产，批号20130106。标准品：格列比嗪，纯度98.8%；内标品：格列齐特，纯度99.5%，上海时代生物科技有限公司。其它：甲醇为色谱纯，美国Tedia公司出品；HCl、K2HPO4为市售分析纯；水为蒸馏水，用前经去离子处理。

2.方法与结果

2.1色谱条件

岛津LC-10ADHPLC系统，色谱柱：C-18柱(5μm，150mm×4.6mm)，流动相：甲醇：0.01mmol•L-1醋酸盐缓冲溶液(pH=4.8)=59:41（v/v），流速：1.0mL•min-1，紫外检测波长：225nm，柱温：36℃。

2.2给药方法及血样采集

24名受试者随机分为两组，每组12人，采用自身交叉对照试验方法。受试者禁食12h后于早晨8：00空腹用室温20%葡萄糖水200ml送服试验制剂或参比制剂，两周后两组自身交叉服用。20名受试者每人单剂量一次口服参比制剂格列比嗪片1粒（含格列比嗪5mg）或试验制剂格列比嗪片1粒（含格列比嗪5mg），两周后自身交叉服用试验或参比制剂。服药前及服药后0.5，1，1.5，2，2.5，3，4，6，8，10，12和15h抽取受试者前臂静脉血3ml，肝素抗凝，立即离心，分离出血浆，置于-30℃冰箱保存待测。

2.3血浆样品处理

取血浆0.5ml置10ml玻璃离心管中，加入4mg•L-1内标格列齐特20μl，加入0.1MKH2PO4缓冲液（pH=4.0）200μl，混匀后，加入二氯甲烷5ml，混旋1.5min，3000r/min离心10min，取出下层有机相，压缩空气流吹干，用200μl流动相溶解残渣，取50μl进样。

2.4干扰试验

在2.1的色谱条件下，格列比嗪的保留时间约8.0min左右，内标格列齐特的保留时间在10.1min左右。空白血浆无杂质干扰。本方法具有较高的特异性，能准确测定血浆中格列比嗪的浓度，灵敏度较高。

2.5线性关系考察

精密称取格列比嗪标准品适量制成标准品水溶液，取健康志愿者混合空白血浆，加入适量格列比嗪标准品水溶液，配制浓度分别为(25、50、100、200、500、1000)μg•L-1的血浆样品溶液，如2.3血浆样品处理方法处理后测定。采用内标法峰面积定量，以格列比嗪浓度为x轴，以格列比嗪峰面积与格列齐特峰面积的比值为y轴，进行回归，回归方程y=286.8x+9.127，相关性良好，相关系数r=0.9998（n=5）。

2.6绝对回收率、精密度和相对回收率试验

取空白血浆加入格列比嗪标准品水溶液，配制浓度分别为(25、200、1000)μg•L-1血浆样品溶液，每个浓度配制5份，处理后测定。将测得的峰面积与相应浓度格列比嗪标准品水溶液直接进样测得的峰面积相比，计算绝对回收率。高、中、低三中浓度的绝对回收率分别为：88.56±7.72，88.87±4.58，92.10±2.63。同上法，一天内配制上述3种浓度血浆样品溶液各5份，处理后测定；连续5天，每天配制上述3种浓度血浆样品溶液各1份，处理后测定。分别计算日内精密度、日间精密度，结果见表1。

三种浓度的日内精密度、日间精密度小于15.0％；低、中、高三个浓度的回收率为为88.56～114.52%；表明本试验建立的方法符合生物样品分析的要求。

2.7药动学参数结果

根据所测氟康唑的血药浓度一时间数据。利用3p97计算机软件（中国数学药理学会）拟合，计算受试和参比氟康唑胶囊的主要药动学参数t1/2、Cmax、Tmax、AUC（Cmax、Tmax用实测值表示，AUC0-tn用梯形法计算）。并进行方差分析、双单侧t检验和置信区间分析，评价它们的生物等效性。根据所测萘哌地尔血药浓度一时间数据，利用3p97计算机软件拟合，有关药物动力学参数和相对生物利用度见表2。

表224名受试者口服受试和参比格列比嗪片的药动学参数（mean±SD,n=24）

3.讨论

本研究采用HPLC－UV检测，测定方法的平均绝对回收率为88.56～92.10％，日内、日间变异系数（RSD）小于4.36％，标准曲线线性范围为25～1000μg1·L-1，r=0.9995。血浆中最低定量限为25μg1·L-1。该方法能满足药动学和生物利用度研究要求。

两种制剂的达峰时间在2～3h之间，与文献[2]报道相似。20名受试者试验制剂和参比制剂的血药浓度和主要药动学参数基本一致。所得参数AUC、Cmax进行自然对数转换后先用双交叉实验设计的方差分析，再用双向单侧t检验进行生物等效性评价。结果表明受试制剂参数AUC的90%可信限落在参比制剂80%～125%范围内，Cmax落在参比制剂70%～143%范围内，Tmax用非参数法进行检验二者无差异。因此受试制剂与参比制剂生物等效。

参考文献

[1]陈新谦，金有豫主编.新编药物学(第14版)[M]北京：人民卫生出版社1997：464

[2]陈秋潮，杨春芹，赵彩虹，等.格列比嗪的药代动力学及生物利用度研究[J].药学学报，1995，30(6)：476～480.