探讨甘和茶定性定量方法

探讨甘和茶定性定量方法

邓倩雯林颖怡劳燕霞

邓倩雯林颖怡劳燕霞（广州王老吉药业股份有限公司广州广东510450）

【摘要】目的建立甘和茶定性、定量的检验方法。方法对甘和茶成方制剂中桔梗、山楂和岗梅药材进行薄层色谱定性鉴别；采用高效液相法对黄芩药材进行含量测定；流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（48∶52）；检测波长：280nm；流速：1.0ml/min；柱温：35℃。结果薄层色谱专属性强，方法可行；黄芩苷：平均回收率为99.20%，RSD=0.96%（n=6），在10.0625～402.5000μg之间呈良好的线性关系，回归方程为Y=27.583x＋86.058，R2=0.9999（n=7）。结论本方法简便、准确，专属性强，可作为提高甘和茶质量标准提供依据。

【关键词】甘和茶桔梗山楂岗梅黄芩苷定性定量

甘和茶是我公司主要产品之一，由黄芩、苍术、柴胡、桔梗、山楂、金樱根、岗梅等20味药材，加水煎煮后，浓缩而制成的复方制剂。具有清暑散热，生津止喝的作用。主要用于感冒发热，中暑口渴，预防感冒。并收载于卫生部《药品标准》中药成方制剂第9册，其质量标准仅限于金樱根和苍术的薄层色谱鉴别[1]。为提高该复方制剂的质量标准,本文增加了桔梗、山楂和岗梅的定性鉴别的研究；

同时采用高效液相色谱法,选择黄芩中的黄芩苷作为定量方法的研究[2]。以更精确的监测药材的投料量，能更好的、更有效的对甘和茶进行质量控制。

1.仪器与试剂

Agilent1200高效液相色谱仪；电子天秤：Sartorius-CPA225D，十万分之一；CMAGREPROSTARⅡ型号成像系统；硅胶G板（青岛海洋化工研究所）；甲醇（色谱纯），水（超纯水）；其余试剂均为分析纯；桔梗、山楂、岗梅对照药材（批号：121028-200608、1211138-200403、121152-201103中国药品生物制品检定所购进，供鉴别用），黄芩苷对照品（批号：110715-200514中国药品生物制品检定所购进，供含量测定用）；甘和茶和甘和茶缺桔梗、山楂、岗梅、黄芩阴性样品（广州王老吉药业股份有限公司提供）。

2.方法与结果

2.1薄层鉴别

2.1.1桔梗：取本品15g，加乙酸乙酯100ml和盐酸2ml，置水浴上加热回流40min，放冷，滤过，滤液置水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。同法制成缺桔梗的阴性对照溶液。另取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯(7:4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。结果见附图1。

图1：桔梗薄层色谱图

1、2、3甘和茶（批号；130201、130301、130302）4、桔梗对照药材5、阴性对照溶液。

2.1.2山楂：取桔梗鉴别下的供试品溶液，作为供试品溶液。同法制成缺山楂的阴性对照溶液。另取山楂对照药材1g，加乙酸乙酯20ml和盐酸0.5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚－二氯甲烷-甲酸（5:5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，在105℃加热，喷以溴酚蓝试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。结果见附图2。

图2：山楂薄层色谱图

1、2、3甘和茶（批号；130201、130301、130302）4、山楂对照药材5、阴性对照溶液。

2.1.3岗梅：取本品7.5g，加水50ml，盐酸2ml，置水浴中加热回流2小时，滤过，滤纸与滤渣，置锥形瓶中，加乙醚摇匀，超声2次，每次40ml，滤过，合并滤液，用水洗涤二次，每次40ml，乙醚液蒸干，残渣用石油醚（30～60℃）浸泡2次，每次15ml，倾去石油醚液，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制成缺岗梅的阴性对照溶液，另取岗梅对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷-丙酮-乙酸乙酯(5:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液。在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰。结果见附图3。

1、2、3甘和茶（批号；130201、130301、130302）4、岗梅对照药材5、阴性对照溶液。

2.2黄芩含量测定

2.2.1色谱条件及系统适应性试验：色谱柱：HypersilODS-C18（250mm×4.6mm×5μm），流动相；甲醇—0.4%磷酸(48:52)，检测波长为280nm，流速：1ml/min。理论板数以黄芩苷计算应不低于3000。黄芩苷峰与相邻峰之间的分离度均＞1.5[3]。对照品、样品溶液和阴性对照溶液色谱图见图4。

图4：从上至下为：对照品溶液、样品溶液和阴性对照溶液色谱图

2.2.2检测波长的确定：Agilent高效液相色谱仪，DAD检测器，对黄芩苷对照溶液进行光谱扫描，波长范围为200～400nm，结果表明黄芩苷在280nm处有最大吸收，故确定黄芩苷测定波长为280nm。结果见图5。

图5：黄芩苷光谱扫描图

2.2.3溶液配制

2.2.3.1对照品溶液的配制：取黄芩苷对照品适量，精密称定，用70%乙醇配制成每1ml含40μg的溶液，摇匀，即得。

2.2.3.2供试品溶液的配制：取样品2.0g，精密称定，置带具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，在称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，即得。

2.2.3.3阴性对照溶液的制备：按处方及制法制成缺黄芩药材的阴性样品。取相当于供试品的量，按供试品溶液的制备方法制备成阴性溶液，即得。

2.2.4线性关系考察：取黄芩苷对照品适量，分别配制成每ml各含10.0625μg，20.1250μg，40.2500μg，80.5000μg，161.0000μg，201.2500μg，402.5000μg，进样量为10μl。以对照品量（μg）为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），绘制标准曲线；黄芩苷的线性方程：Y=27.583x＋86.058，R2=0.9999。结果表明黄芩苷在10.0625～402.5000μg范围内呈良好的线性关系。

2.2.5重复性试验：精密称取同一批号样品，按供试品溶液制备方法平行制备6份，并测定，计算。黄芩苷含量的RSD为1.85%。

2.2.6稳定性试验：取同一供试品溶液，在0、2、4、8、12h分别进样，测定峰面积值，结果黄芩苷含量的RSD为0.99%。说明制备的供试品溶液至少在12h内稳定。

2.2.7加样回收率考察：取甘和茶样品1.0g（已知含量），精密称定，分别精密加入一定量的黄芩苷对照品，测定，并计算回收率，结果见表1。

表1甘和茶加样回收率考察结果

2.2.8样品测定：取三个批号的甘和茶，进行含量测定分析，结果见表2。

表2样品测定结果

3讨论

3.1甘和茶是20味药组成的复方制剂，其处方剂量大，药材之间有效成分相互干扰比较大，故在原标准对苍术和金樱根进行薄层色谱鉴别的基础上，只仅增加了桔梗、山楂和岗梅的薄层色谱鉴别。

3.2黄芩是处方中的主要成份之一，故采用黄芩中黄芩苷作为本实验的含量指标进行考察。分别使用超声提取和水浴中加热回流提取处理。结果两种提取方法效果相差并不大，最终确定用快捷、方便的超声提取法。

参考文献

[1]中华人民共和国卫生部药品标准－中药成方制剂（第9册）[S].1994.6.

[2]国家药典委员会.中国药典（2010年版.）一部[S].北京：化学工业出版社，2010：附录ⅥB、ⅥD.

[3]周燕双,黄惠莲.广东神曲质量标准提高研究，《中国当代医药》[J].2012年19（2）:43-45.