ELISA法检测麻疹IgM抗体质控图的建立

ELISA法检测麻疹IgM抗体质控图的建立

刘凤翔刘海燕覃巍巍

刘凤翔刘海燕覃巍巍（南宁市疾病预防控制中心微生物检验科广西南宁530011）

【摘要】目的:探讨适用于麻疹实验室质量控制的有效方法。方法:建立麻疹IgM抗体检测的实验室动态质控图。结果:保证了实验结果的准确性。结论:在实验过程中进行动态质控有较高的应用价值。

【关键词】酶联免疫吸附试验麻疹IgM抗体质控图

【中图分类号】R446.5【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）12-0012-02

在疫苗可预防的疾病中麻疹仍然是引起儿童死亡最多的,主要在发展中国家［1］。2005年在WHO西太平洋区地区会议上我国签署了承诺2012年消除麻疹的文件。为实现这一目标，麻疹实验室的作用至关重要。目前酶联免疫吸附试验（ELISA）是检测麻疹抗体最常用的检测方法。但在实际操作中ELISA法检测麻疹IgM抗体的影响因素较多，往往导致结果出现较大偏差。因此，在实验中加入一个室内质量控制血清对实验进行动态质控，以保证每次结果的准确可靠［2］。现将实验室动态质控图的建立报告如下。

1材料与方法

1.1资料来源2010年南宁市疾病预防控制中心麻疹网络实验室资料。

1.2检测方法采用间接法ELISA检测麻疹IgM抗体，试剂由德国维润赛润研发有限公司提供，有效期内使用，严格按试剂说明书操作。内部对照是试剂盒提供的阴性和阳性对照。每次检测设空白对照1孔，阴性对照1孔，阳性对照2孔。实验室内部质控血清(IHC)由广西疾病预防控制中心计划免疫科提供，取室内质控血清10μl加入500μl的标本稀释液中，按每周检测2-3次所需量分装后置-20℃冰箱保存。检测样本时将室内质控血清带入同时检测，已启用的置2-8℃冰箱保存，一周内未用完应弃去。当Cul-off值、阴性、阳性对照结果符合要求．试验成立时．记录室内质控血清S／CO值。

1.3判定有效性标准用酶标仪405nm波长测OD值，底物空白的OD值＜0.25；阳性对照平均OD值必须满足在评估表中给定有效范围之内。

1.4结果评估：所有的OD值在评估前必须先减去空白孔OD值。取阳性对照平均OD值后，从评估表中找到阳性对照所属区间，从而得到阳性指标和阴性指标OD值判定范围。若检测血清OD值落在灰色区域，视为疑似或不确定值。

2结果

2.1数据2010年南宁市疾病预防控制中心麻疹网络实验室共检测麻疹疑似病例血清209份，质控血清随样品一起检测，连续测定同批次质控血清20次后，计算均值x-、标准差S、S/CO值和变异系数CV，以此作为暂定靶值和标准差进行室内质控。20次结果均在x-±2SD内，OCV值为12.56％，可作为RCV参考值（见表1、表2）

表1室内质控血清检测结果

表2质控血清均值、标准差、变异系数

2.2绘制质控图采用Levey--Jennings质控图法绘制质控图，以室内质控S/CO值为纵轴,不同的检测次数为横轴,前20次室内质控S/CO值的均数为中心线,x-±2SD为警告线，x-±3SD为失控线画出质控图。从21次起检测的室内质控血清S/CO值依次标在质控框架图上，实验进入质控状态见图1。

图1第21-46次实验点质控图x-﹦1.87S﹦0.25CV﹦13.62％

3讨论

南宁市自2004年建立麻疹实验室网络以来，为麻疹暴发的早期诊断及时控制发挥了重要作用，为发热出疹疫情处理提供了科学诊断的依据。建立一系列的质量控制体系，是做好这些工作的前提。尤其是建立实验室动态质控图，保证了每次实验结果的准确可靠。质量控制图是直观地显示外部对照的动态变化,监视其变化是否在允许的范围之内,从而指示检验稳定性的线图。S/CO值考虑了临界值,比仅用OD值更为科学地反映了标本阳性的程度,也更准确地反映了每次检验的动态变化［3］。从图1看，质控点x-﹦1.87，标准差S﹦0.25，变异系数CV﹦13.62％，所有S/CO值都围绕中心线附近波动，均没有超出X±2SD范围，提示试剂盒质量稳定，实验人员操作规范，检验过程处于可控状态。

为提高麻疹实验室检测质量，把实验误差控制在允许限度内，质控图需要定期修正中心线,警告线和失控线，绘制质控图的检测数据不能采用一次测定多个数据,而应在连续的一段时间测定一系列数据作为质控图数据，不同批次试剂绘制不同的质控图。通过室内质控血清值来帮助判定实验的有效性和结果的可靠性，当出现失控，漂移、趋势等现象，应暂停检测查找原因，找出解除故障方法，消除原因，防止将来出现同样问题［2］。

在实验过程中，仅用试剂盒提供的内部阴性、阳性对照只能判定实验是否成立，而不能提示试剂的批内和批间差异，必须使用室内质控血清检测值做质控图，控制检测的精密度和准确性，从而能尽早发现实验问题，甚至能监测不同技术人员的操作差异。对实验室内部质控血清检测结果的监测，可确保不同时间、不同地点的相同检测结果的准确性。

通过在检测麻疹IgM抗体过程中建立动态质控图，参加职能考核、血清再复核、年度现场认证、技术培训等一系列实验室质量控制体系，有效地保证了麻疹网络实验室检测的工作质量。

参考文献

[1]国家麻疹实验室.麻疹和风疹病毒感染的实验室诊断手册［M］.第二版.2008:P1.

[2]薄芳，毛乃颖，蒋小泓等.酶联免疫吸附试验检测麻疹IgM抗体实验室内质量控制血清的制备及应用［J］中国疫苗和免疫2009.15（3）：284～285

[3]宋悦红,胡秀杰.ELISA法检测HIV抗体质控图的应用及其影响因素分析［J］中国艾滋病性病2008.14（1）：58～59