锦州地区结核分枝杆菌的耐药率分析

锦州地区结核分枝杆菌的耐药率分析

李佳凌刘红雪秦瑜珊肖婷婷王俊平

沈阳医学院辽宁/沈阳110000

摘要：通过对锦州市传染病医院临床痰标本中培养出结核分枝杆菌耐药率进行分析，为进一步了解锦州地区结核分枝杆菌的耐药演变规律奠定基础。取锦州市传染病医院2009年7月至2011年7月抗酸杆菌培养阳性菌株。对入选菌株进行分枝杆菌菌种鉴定，按照常规生化法进行。采用绝对浓度间接法对500株结核分枝杆菌进行4种药物的敏感性试验。应用SPSS(Ver.17.0)统计学分析软件进行分析，耐药率趋势采用趋势卡方检验进行分析。

关键词：结核分枝杆菌；耐药率；药敏实验

结核分枝杆菌（M.tuberculosis）简称为结核杆菌（tuberclebacilli）。早在1882年，德国细菌学家郭霍（RobertKoch，1843-1910）就已证明结核分枝杆菌是结核病的病原菌。本菌可侵犯全身各组织器官，但以肺部感染最多见。结核药物的不断发展和卫生生活状况的改善，结核的发病率和死亡率曾一度大幅下降。据WHO统计，全世界约每3个人中就有1个人感染了结核分枝杆菌，在某些发展中国家成人中结核分枝杆菌携带率高达80%，其中约5%～10%携带者可发展为活动性结核病。结核菌的耐药问题一直是临床治疗的一大难题，也是复治难治结核的主要原因之一。目前全球每年约出现8百万结核新病例，并导致约3百万人死亡。结核分枝杆菌的耐药性因地区不同而不同。目前，尚未有锦州市传染病医院关于结核菌耐药性的研究报告。因此，我们计划开展锦州市传染病医院结核分枝杆菌耐药性的筛查和分析，为了本院更好地治疗结核病提供理论依据。

1.检测对象和方法

1.1检测对象

选取锦州市传染病医院2009年7月至2011年7月门诊和住院患者的痰培养中获得结核分枝杆菌。

1.2检测方法

菌种的分离培养按照《全国临床检验操作规程》进行。具体步骤如下：

(1)送检标本经4%氢氧化钠处理后,接种于酸性改良L-J培养基2支,37℃培养,于接种3-4周后观察。此后每周观察菌落生长情况,有菌落生长者。通过菌落特征和抗酸染色镜检结果初步筛选，之后采用法国梅里埃ATB细菌鉴定仪E鉴定板对上述菌株进行菌种鉴定。

(2)从酸性改良L-J培养基上刮取菌苔研磨制成10-20mgPm菌悬液,分别吸取0.1ml接种于含药培养基、对照培养基、PNB及TCH培养基,置37℃培养,4周观察结果

(3)结核分枝杆菌菌型初步鉴定和绝对浓度间接法药敏试验的报告参考文献3。药敏试验用结核分枝杆菌H37Rv药物敏感株作对照和质控。

(4)在药敏实验中,INH(I)、SM(S)、RFP(R)、EMB(E)的药物浓度分别为：0.2、4.0、40.0、2.0（μg/mL）。

2.统计学分析

数据采用SPSS17.0统计学软件包处理，所有计量数据以均数±标准差(x±s)表示，组间结果比较用t检验。以P<0.05表示有统计学意义，P<0.01表示差异具有显著性。

3.实验结果

所有送检的标本经培养和菌种鉴定共分离到结核分枝杆菌500株。结核分枝杆菌的药敏实验结果显示：在500株结核菌株中，278株对所试4种抗结核药物皆敏感，222株至少对一种药物耐药，仅对一种抗结核药物耐药的菌株56株，耐单药率为11.2％，对4种抗结核药物的耐单药率分别为利福平5.1％、异烟肼2.5％、链霉素2.0％、乙胺丁醇1.6％。在500株结核分枝杆菌菌株中，耐2种药物的62株，耐药率为12.4％；耐3种药物的52株，耐药率为10.4％；耐4种药物的52株，耐药率为10.4％；166株至少同时对2种药物耐药，多药耐药率为33.2％；耐多药率为33.8％。

4.讨论

通过对500株结核分枝杆菌药敏试验结果的分析,发现其中耐药菌株达到222株,占44.4%,耐多药菌株166株,占33.8%。其中RFP耐药率最高,提示本地区链霉素、异烟肼、利福平3种药品尤其利福平的耐药情况值得重视。

本组资料结果表明,500株结核分枝杆菌中33.8%耐多药。锦州市4种抗结核药的耐药顺位与中山市(异烟肼50％、链霉素26.5％、乙胺丁醇23.5％、利福平17.5％)。本文研究结果与我国2008年结核病流行病学调查结果(异烟肼17．6％、链霉素17.3％、利福平16.6％、乙胺丁醇1.5％，总耐药率为27.8％)相比较，总耐药率皆明显高于全国流调结果，耐药率显著高于全国流调水平[5-6]。与全国平均水平比较,锦州市链霉素和利福平的耐药率明显较高，而异烟肼的耐药率明显较低，乙胺丁醇的耐药率则相近且对异烟肼、链霉素、利福平、乙胺丁醇这4种主要一线抗结核药物耐药率皆达到20％以上，说明锦州市地区结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物的耐药情况相当严重，应当引起相关部门重视。

锦州地区结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物总的耐单药率为11.2％。结核菌耐2种、3种、4种药物的耐药率分别为12.4％、10.4％、10.4％，则至少同时耐2种药物总的耐药率为33.8％。由此可知，同时耐多种药物的菌株是耐单药菌株的3倍多。对耐单药结核患者如果采用原规范的短程化疗方案仍可获得较好的效果。而对于对多种药物同时耐药的结核患者中的耐多药结核病(MDR-TB)患者，由于至少同时对异烟肼和利福平这2种最有效的抗结核药物产生耐药性，所以原有的短程化疗方案可能会失去作用，就得采用以二线抗结核药物为主的化疗方案[7-8]。该方案如果恰当、合理，耐多药患者治愈率仍可达到90％。但不足之处是治疗费用高、疗程长、不良反应多，并且治疗期间耐多药患者还可能作为高度传染源在易感人群中传播耐多药结核菌，增加原发性MDR-TB发病的可能性，所以对于耐多药结核病应重在预防。

本文研究结果显示：减少和防止耐药结核病的发生，一方面在技术上要建立一种更加准确的、快速的药敏试验方法，为临床患者尽早提供合理的化疗方案；另一方面在管理上必须采取强有力措施加强结核患者归口管理，实行抗结核药物的统一管理和推行全程督导化疗[9-11]。上述两方面的贯彻落实，既可提高现有耐药结核病，特别是耐多药结核病的治愈率，从而减少原发性MDR—TB发病率；对药物敏感的患者来说，也可防止获得性耐药菌株的产生和传播，减少获得性MDR-TB发生[12-14]。

参考文献

[1]中华医学会结核病学分会全国耐药结核病学术研讨会纪要,中华结核和呼吸杂志,2000,3(4),23:78-81.