采用HPLC法验证进样小瓶清洁效果

采用HPLC法验证进样小瓶清洁效果

石小磊宋人杰吴静刘寒寒蒋红梅

（扬子江药业集团江苏紫龙药业有限公司；江苏常州213000）

摘要目的：采用HPLC法验证进样小瓶的清洁效果。方法：以难溶物-富马酸卢帕他定为考察对象，采用EcipseXDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，1%三乙胺（用磷酸调pH7.0）-甲醇-乙腈（20：100：10）为流动相，检测波长为242nm，柱温为30℃，流速为1.0ml·min-1。结果：采用本法测定清洁后进样小瓶的残留物的含量，均未检出。结论：进样小瓶的清洁效果符合验证要求。

关键词：HPLC法；进样小瓶；清洁效果；验证

CleaningValidationofInjectionVialsbyHPLC

ShiXiaolei,Songrenjie,Wujing,Liuhanhan,Songrenjie

(YangtzeRiverPhamacyGroupJiangsuZilongPharmacyCo.Ltd.,JiangsuChangzhou213000,China)

ABSTRACTObjective：TovalidatethecleaningeffectofinjectionvialsbyHPLC.Method:RupatadineFumaratewastheserachingsample.AnEcipseXDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）wasusedwiththemobilephaseof1%triethylamine(adjustpHto7.0withphosphoricacid)-methanol-acetonitrile(20：100：10).Thedetectionwavelengthwas242nmandtheflowratewas1.0ml·min-1.Thecolumntemperaturewas30℃.Results:TheresidueofRupatadineFumarateincleanedinjectionvialswasnotdetectedoutbythismethod.Conclusion:Cleaningeffectofinjectionvialsmeetvalidationrequirements.

高效液相色谱法作为分析领域的常用方法，可用于含量测定、杂质检测等，而在检测过程中，液相进样小瓶作为承载样品进入分析系统的关键器皿，其清洁程度无疑会直接影响药品检测的准确性、真实性。以难溶物-富马酸卢帕他定为考察对象，建立HPLC法测定清洁后的进样小瓶中富马酸卢帕他定的含量，对本单位采用的清洁方法进行效果验证[1]，现报道如下。

1仪器与试药

美国安捷伦Agilent1260型液相色谱仪；Chemstation色谱工作站；EcipseXDB-C18（250×4.6cm，5μm）。

富马酸卢帕他定对照品（中国食品药品检定研究院，批号：101241-201101，99.5%）；反丁烯二酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111541-201102，99.4%）；三乙胺（TEDIA，批号：13100027）；乙腈（默克，批号：1728930409）；磷酸（西陇化工股份有限公司，批号：1501131）；甲醇（TEDIA，批号：16055100）；水为纯化水。

2方法与结果

2.1残留物代表样品确定

2.1.1.各品种主药、辅料溶解特性与检测情况分析表

从生产的各品种的溶解性、检测频次、检测溶剂、检测最高浓度、OOS发生情况等方面进行全面分析，分析如表1：

表1各品种主药、辅料溶解特性与检测情况分析表

2.1.2.确定残留物代表

根据溶解特性，结合检测中有关物质、清洁验证检测OOS发生情况，综合评定，选取溶解性差且检测出现OOS的富马酸卢帕他定作为模拟验证样品，同时以0.2mg/ml作为验证样品配制浓度。

2.1.3.清洁效果接受标准

液相进样小瓶经清洁后残留物富马酸卢帕他定的接收限度应不得过其检测限。

2.2溶液的配制

2.2.1对照品溶液的配制

精密称取富马酸卢帕他定对照品适量置100ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备

取“2.2.1”对照品溶液，放置过夜，按本公司的实验室玻璃仪器清洁管理规程中的方法对液相进样小瓶进行清洗，晾干后，取流动相溶液倒置于该容量瓶、液相进样小瓶中，作为供试品溶液。

2.3色谱条件

以EcipseXDB-C18（250×4.6cm，5μm）为色谱柱，流动相为1%三乙胺（用磷酸调pH7.0）-甲醇-乙腈（20：100：10），检测波长为242nm，柱温为30℃，流速为1.0ml/min。

2.4系统适用性试验及结果

精密量取对照品溶液20μl注入液相色谱仪，进样分析，色谱图见图1，结果表明，理论板数按卢帕他定峰计算不低于2000。

A.空白溶剂B.对照品溶液1.富马酸2.卢帕他定

2.5线性关系的考察[2]

取富马酸卢帕他定对照品适量，用流动相为溶剂，作为母液。再分别精密量取不同体积的母液，分别用流动相稀释至刻度，摇匀，制成20%-180%浓度水平的对照品溶液。取上述溶液各20?l，注入已平衡的液相色谱仪，以浓度X为横坐标，以测得峰面积Y为纵坐标（包括定量限），进行线性回归，相关系数R2大于0.999，从满足该线性要求的系列浓度中选择最高和最低浓度构成该分析方法的范围。

表2标准曲线的回归方程（n=8）

2.6精密度试验

取100%浓度水平的对照品溶液20?l，注入已平衡的液相色谱仪，重复进样6次，记录色谱图，计算6次测得峰面积的RSD为0.02%，试验结果表明精密度良好。

2.7灵敏度试验

将2.2.1.项下对照品溶液用流动相逐步稀释，直至检测峰高为基线噪声的8~12和2~4倍为止，得到富马酸卢帕他定的定量限为0.39ng、检测限为0.12ng。

2.8溶液稳定性

分别精密量取在室温条件下放置不同时间段的对照品溶液，按2.2项色谱条件进行测定。结果表明，对照品溶液放置48小时内，RSD均未超过1.0%，实验结果表明对照品溶液放置48小时内是稳定的。

2.9清洁效果验证结果

分别将对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入已平衡的液相色谱仪中，记录色谱图，按“2.5线性关系的考察”获得的曲线计算供试品溶液中富马酸卢帕他定的量。结果表明液相进样小瓶经清洁后的残留物富马酸卢帕他定均未检出，其浓度小于其检测限，达到接受标准。

3讨论

采用HPLC法测定液相进样小瓶经清洁后的残留物的含量，按照本法测定，结果均未检出，说明本公司所采用的液相进样小瓶的清洁方法较好，能够满足清洁要求，清洁验证达到接受标准，从而可以保证液相进样小瓶经清洁后对检测结果的准确性和真实性无影响，符合要求。

参考文献

1韩庆福,毛明亮,杨洪周等.制药用器具清洗机清洁效果验证探讨[J].机电信息,2015,32:4-11.

2聂希霖,周本宏.HPLC法测定富马酸卢帕他定片剂的含量及有关物质[J].中国药师,2011,5:664-666.